Способ производства ферментного препарата Глюкобататина гх Советский патент 1983 года по МПК C12N9/26 C12R1/66 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам производства амилолитических. ферментов Глюкобататина Гх.

Известны способы производства амилолитических ферментов путем глубинного культивирования их продуцента Aspergillus batatae-6l на питательной среде, содержащей Фильтрат барды муку, куку рузный экстракт, мел или магнезит С13Из известных способов наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ производства амилолитических ферментов путем приготовления питательНОЙ среды на основе фильтрата зернокартофельной барды, муки кукурузной, пшеничной или ржаной, кукурузного экстракта, акмиачной селитры, мела, магнезита и растительного масла, стерилизации ее, выдержки, охлаждения, посева культуры A8p.i)atatae-6l и культивирования ее глубинным методом при аэрации 2.

Однако этот способ не позволяет регулировать рН среды, в результате чего ферменты получаются с недостаточной активностью. Активность ферментбв АС - 4,0 ед/мл, ГлА 50 ед/мл

Цель изобретения - повышение активности целевого продукта за счет поддержания рН среда оптимальным для накопления оС-амилазы и глюкоамилазг }

Цель достигается fем, что S способе производства ферментного препарата Глюкобататина Гх путем приготовления питательной среды на основе фильтрата зерно-картофельной барды, члуки кукурузной, ржаной или пшеничной, кукурузного экстракта, мела, магнезита и растительного масла, стерилизации ее, В14Цержки, охлаждения, посева культуры Aspergillus batatae-6l и культивирования ее глубинным методом, фильтрат зернок тофельной барды разделяю на два равных потока, один из которых охлаждают до температуры 40- 45с, смешивают его с мукой, кукурузным экстрактом, аммиачной селитрой, мело магнезитом и растительным маслом, нагревают до температуры 75-80 с и подают на стерилизацию, а другой поток барды вводят в смесь на стадии стерилизации, осу1даствляя стерилизацию обыего потока при 132-13б°С и вы держку в течение 40-50 VHH, устанавливая рН после стерилизации равным 5,5-5,8, при этом начальную стадию процесса - стадию синтеза -oi-амилазы ведут при данном значении рН, а по истечении 38-42 часов от начала процесса на стадии синтеза глюкоамилазы рН снижают до рН 5,0-5,3,, а также и тем, что глубинную культуру Aspergillus batatae-6l вырагцивают на Среде слеАуюцего состава, вес.%;

Мука кукурузная, ржаная или пшеничная . 2,4-4,0 Кукурузный экстракт. 0,7Ь-0,9 Селитра аммиачная 0,7-0,9 Мел0,,3 Магиезит0,1-0,.3 Растительное масло 0,05-0,06 Фильтрат.зерно-картофельной барды остальное Кроме того, аэрацию; осуществляют ступенчато, в первые 6-8 ч количество Воздуха составляет 8 10 MVM а по истечении этого времеии - 20-30 .

Q1OCO6 осушестбляется следующим образом.

Горячий фЮ1Ьтрат зерно-картофельной барды, нмекхций температуру 75-80 4:, разделяют на два потока , один иэ которых охлаждают до 40-45 0, вещают в него муку, кукурузный экстракт, аммиачИую сёлитру, меп, растительное масло и магнезит, причем магнезит вводят в количестве а зависи юсти от рН среды

После перемешивания всех компонентов определяют рН среды.

Смесь фильтрата барды с введенными компонентёшй нагревгиот до 75 острш паром, а затем направляют на HciZ;peB в контактную головку и в предва итёльио простерилизоваиный стерилизатор. На.стадию стерилизации вводят второй поток фильтраг та барды и осуществляют стерилизацию общего потока при 132-13б С, выдержг ку ее в стерилизаторе при этой температуре в течение 40-50 мин и в горячем ВИД0 подают на ферментацию, / рН среды устанавливают равным 5,6 5,8 (при необходимости вводят НаОН) при помощи магнезита, расход которого зависит от рК барды. После заполнения ферментатора всю систему освобояндгаот от питательной среды, прокачивают водой до удаления взвешен ных частиц и стерилизуют острьм паром в течение 30-40 мин. После заполнения ферментатора питательную среду охлаждают до 30-32°С, задают посевную культуру и ВЕфащивают культуру Aspergillus batatae-6l. Процесс вначале при рН 5,6-5,8 т.е. значении, оптшлальном для синтеза ol-амилазы, s затем ,по истечении 38-42 ч от начала процесса устанавливают рН рав ным 5,0-5,3, оптимальным для синтеза глюкоамилазы.

Продолжительность процесса ферментации 60 ч, аэрацию осуществляют при разиом количестве воздуха.

Готовая культура должна удовлетворять т ребованиям технических у.слов ий: 7 активность об-амилаэы не мене .;|4 ед/мл культуры -. б) активность глюкоамилазы не м нее 5,0 ед/мл культуры; в концентрация СВ 3,0-3,5%. Готовую культуру охлаждают до 12-15°С,. передают на хранение и ис пользуют для ос харивания. Пример. Горячий фильтрат зерно-картофалыюй барды с температурой 85 разделяют на два потока. Один из них охлаждают до 45 С и э шаю1Г в него следушцие компонентыг мас.%: Мука кукурузная . 2,4 Кукурузный экс;тракт 0,8 Аммиачная селитра 0,7 . Мел .Of2 Магнезит0 25 Растительное масло 0,06 РК барды составляет 3,9 содерж ниесухйх,вещес1 в 4%, плотность 1,03 г/см, рН среды 5,6 благодаря введенному магнезиту. Смесь нагревают ост{ял4 паром, до 75°С и подают на стерилизацию. По истечении 60 шн от начала процесс в смесь вводят второй поток барды, температуру 85 С, осуществляют стерилизацию среды при 135 С выдерживают ее при этой температуре 45 мин иПри такой температуре подают в ферментг1тор рН среды равна 5,6 Охлаждают питательную среду непосредственно в ферментаторе до , задают посевную куль ру. из инЬкуляторра и начинают проц ферментации культурыsAspergillus batatae-6l. : Выращивание посевной культуры Aspergillu8batatae-6l производ ят на питательной среде следующего состава, Bec.%t Кукурузная, пшеничная или ржаная мука 2,0 Кукурузный экстракт 0,7 Подсолнечное масло ОД Вода .ОстальрН среды доводят разбавленным раствором NaOH до 5,6. Начгшьную стадию процесса ферментации осуществляют при рН 5,6 стадию биосинтезаof-амилазы, а по истечении 40 ч от начала процесса рН устанавливают (добавляя NaOH) 5,2 и начинают процесс синтеза глюкоамилазы . Аэрацию осуществляют ступенчато стерильным воздухом в количестве 12 MV, в течение 8 ч после посева, а затем 30 до 60 ч роста культуры. Процесс ферментации продолжают 60 ч, после чего культуру охлаждают до 15 С. Получают культуру с активностью о -амилазы 4 ед/мл, глюкоамилазы 6 ед/мл культуральной жидкости. Полученный ферментный препарат содержит коАошекс ферментов (целлюлозу, протеазу k другиеЬ но преимущественно dL-амилазу и глюкоамилазу. Применяют его вместо солода для ооахаривания крахмала в производстве спирта. Расход его на ос.ахаривание составляет 90-100% по массе крахмала, исходя из дозировки глюкоамилазы 5-6 ед на 1 г крахмала для трехсуточного брожения. За счет замены солода выход спирта увеличивается на 0,7 дал из 1 т условного крахмала.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ГЛЮКОВАТАТИНА Гх путем 1 приготовления питательной среды на основе фильтрата зерно-картофельной барды, муки кукурузной, ржаной или пшеничной, кукурузного экстракта, мела, магнезита и растительного масла, стерилизации ее, выдержки, охлахсдения, посева культуры As per- gillus batatae-6l и культивирования её глубинным методом при аэрации, о т л и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения активности целевого продукта за счет поддержания рН среды оптимальной для накопления с|С.-амилаэы и глюкоамилазы, фильтрат зерно-картофельной барды разделяют на два равных потокаг, один из которых охлаждают до 40-45°С и смешивают с мукой, алмаачной селитрой, кукурузньм экст- • рактом, мелом, магнезитом и растительным маслом, нагревают до температуры 75-85°С и подают на стери- Лизацшо, а другой поток барды вводят в смесь нёпоёредствейнр на стадии стерилизации, осуществляя стерилиза-:( цию общего потока при 132-136 С и выдержку в течение 40-50 мин, устанавливая после стерилизации рН равным 5,6-6,8 при этом начальную стадию процесса - стадию синтеза о?-амйлазы - ведут при даннс«^ значений рН, а по истечении 36-40 ч oi? начала пр1оцес- • са - стадию синтеза глюкоамилазы - {? ведут при рН, равном 5,0-5,5. I л ль 2. Способ по п. 1, о т л и ч а - Г/1 ю щи и с я тем, что культивирование культУЕ>&ы Aspergillus batatae-6l ведут на среде следующего состава, .вес.%: ' ,.:•'.,.;, • . ' ' • ' -.