Способ диагностики е-гиповитаминозау пТиц Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ Е-ГИПОВИТАМИНОЗА У ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарии и может быть применено для диагностики Е-гиповитаминоза птиц непосредствен но в птицеводческих хозяйствах. Известен способ диагностики Е-гиповитаминоза у птиц путем прямого опреде ления содержания витамина Е в органах и тканяхбиологических объектов посредством .экстракции витамина жирорастворителями с последующим спектрографированием и хромотографированием Однако эти методы очень сложны, трудоемки, требуют использования дорого стоящего оборудования и дефицитных реактивов, а при исследовании витамина Е в крови молодняка птиц необходимо 10-12 цыплят на один анализ, поэтому они не нашли применения в птицеводческой практике. Наиболее близким к предлагаемому ясвляется способ диагностики Е-гиповитаминоза, основанный на косвенном определении Е-витаминной недостаточности у животных, путем определения резистентности эритроцитов к гемолитическому действию диапуровой кислоты 2 . Основными недостатками данного косвенного определения Е-вита1уШНной недостаточности :5тляется то, что в реакции в качестве гемолитика применяется диалуровая кислота, растворы которой должны использоваться только свежеприготовленными так как в {jacTBopais, хранящихся более 24 ч, диалуровая ккспота разлагается, отчего теряется ее гемоли-т TwieCKoe свойство, что приводит к большому расходованию диалуровой кислоты. Стоимость 1 кг диапуровой кислоты (ТУ 16П-357-68) 16ОО р, что удорожает диагностику. Кроме того, реакция гемолиза эритроцитов с диалуровой кислотой осуществляется в сложном фосфатно-буферном растворе, требующем постоянного поддержания кислотности на одном уровне, а это увеличивает продолжительность исследований и количеств во используемых реактивов. Uenb изобретения - сокращение сро ков исследований и упрощение способа, а также снижение затрат на осуществление способа. Поставленная цель достигается том, что в способе определения Е-гштовитаминоза у птиц, заклк чающемся в прове-г дении гемолиза эритроцитов для определения ик резистентности к действию гем литического фактора, для проведения гемолиза используют 0,007-О,01%-ный раствор лимонной кислоты, а эритроциты перед гемолизом разбавляют физиологическим раствором. . Благодаря предложенному способу поя вилась возможность заменить сложный фосфатно-буферный раствор физиологичесКИМ раствором, при этом отпала необхо димость в постоянном поддержании кисло ного равновесия растворов. Способ определения Е-витаминной недостаточности осуществляется следующим образом. Свежевзятую кровь птиц разбавляют физиологическим раствором, гемолизируют о, 00 7-о, 01%-но и лимонной кислотой и инкубируют в термостате 1 ч при 39-41-С, центри)угируют 8-10 мин при об/мин и колоршЛетрируют на ФЭК. Пример. В центрифужную про бирку, содержащую 3 мл физиологического раствора, добавляют 0,03 мл крови птиц, взятой из подкрыльцовой вены. Осторожно смешивают до однородной взвеси эритроцитов и переносят по 1 мл в 3 Пробирки. В 1-ю и 2-ю пробирки добавляют 1 мл 0,01%-ный раствор лимонной кислоты, в 3-ю пробирку 1 мл физиолог-ического раствора и выдерживают 1 ч в i-epMocTaTe при 30-41 С, затем 30 мин при комнатной температуре. После этого в 1-ю и 3-ю пробирки добавляют по 3 мл физиологического раствора , в

0,01 0.021 0,115 О,016 5,1 0,01 О,.О2 0,007 0,009 0,14 0,005 2,9 0,ОО7 0,О1 О,008 0,О13 0,17 0,01 1,9 0,008 0.015

0,11 0,015 5,2 0,15 0,006 2,7 0,175 0,012 1,8 пробирку - 3 мл дистигшированной воды. Содержимое каждой пробирки осторожно перемешивают к центрифугируют 8-10 мин при 150О-2000 об/мин. Недостаточную жесткость каждой пробирки колориметрируют на ФЭК при светофильтре №3 { длина волн 415-420 ммк ). Гемолиз в процентах вычисляют по форк муле а - в 100 гемолиз 3 0,03-0,012-100 .- 5,3 0,35-0,012 где а - показание ФЭК в пробирке 1 i о,оз; б - 2 - 0,35; в - - 3 - 0,012. Гемрпиз эритроцитов выию 1 О % бигчшнализирует о дефиците витамина Е. П р и м е р 2 . Исследования проводят по примеру. 1, но дополнительно в : качестве раствора используют фосфатнобуферный раствор, в в-иде гемолитика - диалуровую кислоту. а - вЮО Гемолиз г б - в О.О25-0.01 100 сг о о/ 6,29-0, Раакшж) гемолиза эритроцитов предложенным способом проводят на клинически здоровых птицах (150). Одновременно на этих же-птицах проводят параллельные исследования с диалуровой кислотой. В обоих реакциях используют 0,007-0,01 %-ные растворы кислот и получают одинаковые результаты, что в конечном итоге подтверждает надежноность, простот} и эффективность данного изобретения. Результаты исследований сведены в таблицу.

Предлагаемый способ диагностики &-гиповитаминоза у птиц с использованием гемолиза эритроцитов пимонной кислоты обеспечивает по сравнению с иэвестным способом следующие преимущест ва : сокращает время исследования в 2 раза, что позволяет в течении 8 ч одному исследователю провести экспрессдиагностику Е-гттовитаминоза у 6-7 стадах птиц ( анализов);

замена реактивов и растворов делает реакцию более простой и дос1упкой дпя применения в птицеводческой практике; сокращает затраты при исследовании одной птицы в 200раз, что имеет большое aKOHONf ческое значение.

Так, при исследовании 1 пробы крови с диапуровой кислотой, затраты составляют 20 коп, тогда как при исследовании одной пробы крови с лимонной кислотой - о, 1 коп,

в птицеводческом хозяйстве среднего размера, для одноразового определения Е-витаминной обеспеченности проводят как минимум 35 0-4 ОС анализов. В течении года такую профилактическую диспансеризацию в бройлерных хозяйствах проводят не менее 24 раз и 12 раз в хозяйствах яичного направления, что составляет 9-10 тыс. исследований для бройлерного хозяйства и 4-5 тыс. исследований для хозяйства яичного направлеПродолжение таблицы

ния. Затрачы на реактивы при исследоваНИИ птиц с помощью диалуровой кислоты в OJ:HOM бройлерном хозяйстве составляют 180О-2ООО р;И 9ОО-1ООО р в хозяйстве яичного направления в то время как при исследованш птиц предложенным методом соответственно 9-10 р и р.

Формула изобретения

Способ диагностики Е-гиповитаминоза у птиц путем проведения гемолиза эритроцитов для определения их резистентнорти к действию гемолитического фактора, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для проведейия гемолиза используют 0,ОО7-О,01 -нь1й раствор лимонной кислоты, а эритроциты перед гемолизом раэбавляют физиологическим раствором.

(

. Источники инфсрмац ш, принятые во внимание при экспертизе 1. Биохимия и физиология питания животных.Рига, 1972, с. 112. ; 2. Wn) Е.Е. HemeBysiB of e A fihho C tes from v-i-t mnn E-e e-EiCieni :C,K-lcV-tin5.- BiochimiCOl o4 BiophvSi ca, Acta.-(g76, voB,ao .N2,p.552.