Способ определения содержаниябЕлКА B зЕРНЕ Советский патент 1981 года по МПК G01N33/02 A01G7/00 

Изобретение относится к Ьелекции сельскохозяйственных культур на повышение, содержания белка, а также к аналитической химии. Известен способ определения белка в зерне, основанный на реакции Кьель даля 1 . Недостатком этого метода является его громоздкость и неточность определения, так как по этому методу определяют сумму всех азотсодержащих веществ зерна, среди которых на долю белков приходится 70-90%. Известен также способ определения белка в зерне, основанный на образовании окрашенного 1сомплекса ионов меди и пептидных связей в молекуле белка, при котором экстрагирование белка проводят спирто-щелочным раствором с последующим колориметрированием при введении в раствор биуретового реактива 2. Однако необходимость предваритель ного экстрагирования белка, длитель ность определения и частые помутнени 5 аствора делают невозможной фотомет рию. Цель изобретения - повышение точности анализа, упрощение процесса и сокращение времени определения. Поставленная цель достигается тем, что экстрагирование белка проводят в присутствии биуретового реактива, при этом в качестве экстрагента используют изопропиловый спирт, к которому добавляют биуретовый реактив в равном объеме. Причем используют биуретовый реактив следукяцего состава, г/л: Сегнетова соль 8-9 Медный купорос 4-5 Йодистый калий 4-5 0,2 М раствор едкого натраДо 1 л Соотношение биуретового реактива и изопропилового спирта I-l оптимально, так как все другие соотношения реактивов приводят к образованию трудноустранимой мути. Максимальное извлечение белка и максимальная интенсивность окраски раствора наблюдается спустя 20-30 мин после смешивания растительного материала с биуретовой смесью. Реакция мало зависит от механического встряхивания и температуры окружающей среды в пределах 20-30с. Оптимальными условиями являются продолжительность экстракции 30 мин с

последующим центрифугированием в течение 15 мин при 300Од.

Расчет концентрации Ьелка произвдят по стандарту, которым является суммарный белок, выделенньлй из муки зерна соответствующих культур (пшеница, ячмень, рожь и т.д.).

Концентрация белка в зерне рассчитывается по следующей формуле

Ipn-CcmK

С

С - концентрация белка в зерне,

где

.вёс.%,

Е и Е - экстинкции биуретовых раст° воров соответственно для

опыта и стандарта при 545 н навеска белка стандарта,

стп мг (обычно 5 мг), коэффициент содержания бел1Cка в препарате белка стандарта (обычно 80-89%), m - навеска муки, мг.

Пример. Навески муки тонкого помола (20-40 мг) различных сортов зерна помеодают в сухие центрифужные пробирки. Прибавляют 2,5 мл смеси 1:1 биуретового реактива и изопропилового спирта. Тщательно перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем центрифугируют при 3000 g в течение 15 мин и измеряют Э1 стинкцию надосадочной жидкости при 545 нм на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре. Одновременно в тех же условиях определяют экстинкцию стандартного белка.

Содержание белка в различных сор тах злаковых культур при определении биуретовым методом представлено в таблице.