Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата Советский патент 1981 года по МПК C12R1/645 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩЕГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА

Изобретение относится к медитданской промышленности, в частности к производству фер ментов медицннского назначения, и касается повышения активности продуцента молокосвертываюшего фермента руделина. По основному авт.св. N 522230 известен способ получения молокосвертывающего ферментного препарата, используемого дяя получения молокосвертывающего препарата Руссулин, который может заменить ферментный препарат аналогичного действия Решшн живот ного происхождения. Этог способ характеризуется тем, что в качестве продуцентов фермента используют базидальные грибы вида Russula deooloraus, а именно штамм Russula deooloraus штамм 2, культивирование которого ведут i питательной среде, содержащей необходимые источники для роста продуцента при 25-26 С до достижения максимальной активности в кул туралыюй жидкости. После чего мицелий стаеляют, фильтрат охлаждают, осаждают белки охлажденным этиловым ширтом, смесь выдерживают сутки при -15°С. декантируют надосадочиую жидкость, осадок отделяют и высушивают. Активность препарата 500000 ед. 1. Однако данный способ не позволяет получить фермент, обладающий активностью, выше указанной в известном способе. Цель изобретения - повышение активности и выхода целевого продукта фермента. Поставленная цель достигается тем, что культуральную жидкосп на 6-7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают теплсшой обработке в субэкстремалыюм интервале температур 37,5 38,5° С в течение 30-75 мин. Сущность способа состоит в том, что для осуществления этого процесса колбы, содержащие культуру в период максимальной продукции фермента, т.е. на 6-7 сутки ферментации в обычных условиях, подвергали воздействию повышенной температуры 37,5-38,5° С в течение различного времени для определения тех сроков, в . происходит максимальный выход фермента. Опыты с интервалами в 15 мин показали, что имеет место фазный характер увеличения выхода фермеша: в чалвооги, наиболее высокое значение наблюдается в сроки 30 мин и 1 ч 15 мин. Последний сро является онтимал шлм в болыиенстве опытов и при этом в среднем активность превышает активность культуральной жидкости в контроле на 33%. Активность культуральной жидкост без температурной обработки (контроль) не меняется на протяжении 24 ч. На чертеже представлен график результатов проведенных экспериментов, причем на оси П р им е р. Ферментацию проводят в качалочных колбах емкостью 750 мл (со 100 мл питательной среды) на качалках при 140 об/мин при 26 С в течение 7 сут. В результате периодической проверки молокосвертывающей активности культурапьной жидкости (контроль) и той же жидкости после очередной температурной обработки (опыт) отмечено значительное (в среднен на 33%) повышение уровня активности культуральной жидкости через 1 ч 15 мин выдержки в термостате при 38° С (даннь1е ряда опытов суммированы в таблице 4 ординат - активность культуральной жидкости, соответствующая количеству фсрменга и ней (в процентах к контролю), на оси абцисс время прогревания. В таблице приведены результаты статистической обработки полученных данных. ii)H определении зависимости молокосвертываюшей активности культуральной жидкости от тсмпературной обработки в интервале субжстрсмальной температуры. И на графике). Молокосвертывающая активность культуральной жидкости, достигнутая в конце ферментации, служит контролем для дальнейшего эксперимента. Колбы с культуральной жидкостью помещают в ультратермостат, обеспечивающий быстрый нагрев и дальнейшее поддержание температуры на уровне 38°С. Каждые 15 мин в течение 4-х часов проводят очередную проверку молокосвертываюшей активности культуральных жидкостей. Определение активности фермента проводят по следующей методике: в 100 мг молока вносят 585 1 мл 15л-ного раствора CaCl/j . беруг 10 мл в пробирку, нагревают гю 35°С и вносят 1 мл активной культуральнон жидкости. В момент внесения культуральной жидкости вклю чдют секундомер и активность фермента определяют по времени образования плотного сгустка. Преимущества предлагаемого способа заключаются в том, что кратковременная тепловая обработка позволяет существенно увеличить выход и активность фермента, а также экономи ческий эффект при промьплленном получении указанного продукта. анттуиВнос ь Формула изобретения Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата по авт.св. № 522230, отличающийся тем, гто, с новьниения активности и выхода целевого продукта, культуральную жищсость на 6-7 сутки культивирования в период максимальной активности продуцента подвергают тепловой обработке в субэкстремальном интервале температур 37,5-38.5°С в течение 30-75 мин. Источники информа1ши. принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР N 522230, кл. С 12 D 13/10, 1972. -э- Время 180 г7о