Штамм 705-57-продуцент молокосвертывающего фермента Советский патент 1980 года по МПК C12K1/02 C12D13/10 A23C19/02 

(54) ШТАММ BACILLUS. POUVMVXK

705-57-ПРОДУЦЕНТ МОЛОКОСЬЕРТЫВАКЩЕГО

12 Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для получения ферментного препарата,Зс1меняю цего сычужный фермент, применяемый в сыр делии . Известен штамм BaciIIus polymyxa 13-13, характеризующийся тем, что он обладает молокосвертывающей активностью культуральнбй жидкости 3500 ед/мл и протеолитической активностью - 0,80 ед/мл 1. Недостатком штамма является его недостаточно высокая активность дл рентабельного производства ферментного препарата. Наиболее близким.по технической сущности к изобрютению является исх ный штамм Вас.polymyxa 705, полученный из Всесоюзной коллекции микр организмов. Подробного описания кул турально-морфологических свойств нет. Указаний на активность молокосвертывающего фермента нет. По Данным исследователей активность молокосвертывакщего фермента,определенного по методу Пятницкого Н,П и Пятницкой И.Н., составляет 5000ФЕРМЕНТА6000 ед/мл и продолжительность культивирования 32 ч 2 . Целью изобретения является получение нового штамма мутанта культуры Bac.polyroyxa 705, с повышенным биосинтезом молокосвертывающего фермента при глубинном способе культивирования. Использование штамма Вас.polymyxa 705-57 даст возможность получать активный комплекс молокосвертывающего фермента при глубинном способе культивирования, тем самым, интенсифицировать производство молокосвертывающего фермента. Штамм Вас.polymyxa 705-57 - продуцент молокосвертывающего фермента получен из штамма Вас.ро- lymyxa 705 путем индуцированной селекции с применением комбинированного воздействия этиленимина в концентрации 1:5000 при экспозиции 30 мин и УФ-лучей в дозе 4000 эрг/мм. Выделенный активный мутант подвергали проверке ферментативной активности при хранении и при пересевах на свежую питательную среду. Культивирование мутанта Вас.polymyxa 705-57 в глубинных условиях проводили на жидкой питательной среде, содержащей крахмал картофельный растворимый, лиэаты дрожжей, ), , MgSO МпЗОд , СаСОз, FeSO .

Рост штамма на указанной среде в условиях глубинного культивировани на качалке (со скоростью вращения 160-180 об/мин) при 26°С в колбах емкостью 750 мл со 100 мл питательно средфл интенсивный, культура имеет вид густой, слизистой бактериальной массы. Максимальное образование молокосвертывакяцего фермента в культуральной жидкости навлюдается к 32 ч роста. Показатели активности молокосвертывающего фермента, определяемого по методу Пятницкого Н.П. и

Лятницкой И.Н. составляет 8000 ед/мл культуральной жидкости и протеазы 0,8-0,9 ед/мл (стандартный метод ГОСТ 202642-74).

Исследованиями, проведенными в течение 6 мес., установлено, что при хранении и пассировании на среде с ломтикаки картофеля высокий уровень активности молокосвертывающего фермента у мутанта Bac.polymyxa 70557 не снижается.

Сравнительные данные молокосвер:Тываю1дей и протеолитической активностей штаммов Bac.polymyxa приведены в табл. 1. . . Таблица

Полученный мутант Bac.polymyxa 7 57 имеет следующие морфологические и физиологические, признаки. Морфологические признаки.Гpa вIoложительные палочки с згжругленными .концами соединены по две или одиноч ные.Размер (2,3-5}Х(0,б-0,7) мкм.На 5 сутки встречаются клетки со спора ми клостридиального типа. Десятисуточная культура состоит из спор размером (1,2-1, 4)Х(0, 7-0, 7 Культуральные признаки. Сусло агаррост обильный, колонии белого цвета выпуклые, слизистые, блестящие, поверхность бугристая. Край колоний неровный, консистенция вязкая, упру гая. Среда без изменении. Картофельный агар-характер роста как и на сусло агаре. Эшби агар-рост диффузный или совсем отсутствует. МПА-рост слабый, в виде тонкого плоского налета, гладкий. Слизь не образуется. Край колонии фестончаты поверхность неровная. Среда без види мых изменений. Среда Чапека-колонии мелкие, про рачные, слизистые, беловато-серого цвета. Ломтики картофеля-рост обильный, колонии белые, слизистые, выпуклые за счет пузырьков газа. Картофель размягчается. Ломтики моркови-рост слизистый очень обильный, прозрачный, слегка желтоватым оттенком. МПБ-рост слабый. Пленки не образует. На поверхности диффузионный налет. На дне рыхлый осадок. В середине столбика рост в виде тонкого стержня. Филиологические признаки.Среда Гетчинсона-рост отсутствует,клетчатка не разрушается. Молоко створаживается через сутки. Сыворотка отстает и хорсяио отделяется по всей толще столбика. Желатина-рост на поверхности и в глубине по уколу.; Разжижение кратеровидное. Крахмал гидролизуется, рост пышОтношение к источникам углерода. Глюкозу, сахарозу, лактозу, ксилозу, арабинозу, маннит, глицерин усваивает. Инозит не усваивает, рамнозу усва- ивает очень слабо. Отношение к температуре. Развивается при температуре от 10 до 45с с оптимумом при . Максимальное образование молокосвертывающего фермента при . Нитраты восстанавливает в нитриты. Отношение к кислороду - факультативный анаэроб. Пригодность фермента, синтезируемого Bac.polymyxa 705-57, для свертывания молока в сыроделии проводили по методу быстрой пробы, который дает возможность предсказать органолептические свойства сыра, приготовленного с заменителем сычужного фермента.

Штамм Bac.polymyxa 705-57 по результатам быстрой пробы пригоден для свертывания молока в сьцроделии. Для свертывания-равного количества молока требуется в 2,5 раза меныле раствора , продуцируемого

предлагаеквлм штаммом, чем штаммоманалогом.

Штамм Bac.polymyxa 705-57 обладаej более высоким отношением молокосвертывгиощей активности к протеоли|Тической (данные приведены в табл.2),

Таблица2