Питательная среда для выращивания продуцента молокосвертывающего фермента Советский патент 1980 года по МПК C12B3/00 C12D13/10 

дукщего состава (вес. %): крахмал осахаренный О,5-1,5,аммоний фосфорнокислый однозамещенный 0,2-0,7, кукурузный экстракт 0,3-1,2, молочная. сыворотка 0,4-1,5 и минеральные соли калий фосфорнокислый одно- и днузамещенные 0,06 и 0,04 соответственно, кальций хлористый 0,05-0,5, магний сернокислый 0,03-0,1, цинк сернокислый 0,001-0,001, железо сернокислое 0,00001-0,0005 ИНа среде указанного состава продолжительность культивирования продуцента молокосвертьшающих ферментов оказалось возможным сократить с 8-9 суток до 5,5-6,5 сут. без снижения молокосвертывающей активности.

Недостатком прототипа -является наличие в технологии подготовки питательной среды стадии осахаривания крахмала, применение для осахаривания амилолитических ферментов из расчета 5 ед. .активности на 1 г крахмала, длительность культивирования, составляющая 5,5-6,5 сут, получение готовой культуральной жидкости, трудно поддающейся дальнейшей обработке при выделении из нее ферментЕ-юго препарата, а также сравнительно легкая подверженность питательной среды и культуры контаминации постороннеймикрофлорой .

Целью изобретения является сокращение продолжительности выращивания, снижение себестоимости препарата фермента и повышение гарантии микробиологической чистоты процесса.

Поставленная цель достигается тем что среда содержит в качестве источника углерода муку кукурузную, а в качестве источника азота - натрий .азотнокислый и дрожжи, причем компоненты питательной среды взяты в следующем соотношении (вес. %): мука кукурузная 0,9-1,6 натрий азотнокислый0,1-0,3 дрожжиО,1-0,4 калий фосфорно.кислый однозамещенный . О,01-0, 03 калий фосфорнокислый двузамещенный0,02-0,06 кальций хлористцй 0,05-0,5 магний сернокисльГй0,03-0,1 вода остальное выпускают гидролизные заводы и другие виды дрожжей. Из состава среды исключается цинк сернокислый и железо сернокислое.

Выращивание на такой среде продуцента молокосвертывашщих ферменто .позволяет сократить время культивирования на сутки, т.е. вместо 5,56,5 сут до 4,.5-5,5 сут без снижения молокосвертывающей активности культуральной жидкости и получать культуральную жидкость (глубинную культуру) , легко поддающуюся фильтрации, вакуумноцентрированию и выделению из концентрата осадка препарата рыхлой структуры, лишенной темных пигментов Кроме того, выбранное сочетание азотистого питания с кукурузной мукой позволяет сократить лагфазу развития культуры за счет первоначального потребления неорганического азота (натрий азотнокис.лый) , после чего наступает период использования органического азота дрожжей, что очень важно, так как такое сочетание компонентов приводит к стабильному снижению рН в процессе роста культуры Тгриба до 2,5-3,1 в конце периода выращивания.

Этот фактор очень важен в отношении ослабления развития посторонних микроорганизмов, проникновение которых иногда наблюдается при столь длительном процессе выращивания и, следовательно, повышает микробиологическую чистоту производства. Стоимость кукурузной муки ниже стоимости крахмала более чем в 2 раза (157 и 420 руб. за тонну соответственно). Кукурузная мука к тому же более доступна и однородна по -составу по сранению с крахмалом. Использование в качестве источника азота натрия азотнокислого с дрожжами позволяет получать почти бесцветную (слабо-золотистую) культуральную жидкость, лишенную темных пигментов,- что в дальнейшем позволяет исключить из технологи стадию освобояэдения пигментов из културальной жидкости или ферментного препарата.

Примеры, иллюстрирующие использование рекомендуемой питательной сред для выращивания продуцента молокосветывающего фермента Russula decoloran Пример 1. Б ферментере емкостью 0,25 м 3.

Среда, содержание в %:

1Д мука кукурузная

0,15

натрий азотнокислый

0,25

дрОжжи калий фосфорнокислый однозамещенный 0,04 калий фосфорнокислый двузамещенный 0,06 кальций хлористый . 0,05 магний сернокислый 0,05 вода -до 100

Среду стерилизуют, охлаждают, затем вносят посевной материал из расчета 4% от объема засеваемой среды и выращивают с соблюдением разработанных условий. Максимальный уровень молокосвертывающей активности в культуральной жидкости (400 ед/мл) наблюдают через 107 ч роста, при этом рН культуральной жидкости, составил 2,6.

Пример 2. В ферментере:, емкостью 2 м. Среда, содержание в %: мука кукурузная 1,1 натрий азотнокислый 0,1 дрожжи0,3 калий фосфорнокислый однозамещенный 0,04 калий фосфорнокислйй двуэамещенный0,06 кальций хлористый . 0,05 магний сернокислый 0,05 водадо 100 Среду стерилизуют через систему УНС, охлаждают, засевают посевным материалом из расчета 4,4% от объема засеваемой питательной среды и выращивают принятым на заводе способом. Максимальная мойокосвертывающая. активность в культуральной жидкости (360 ед/мл) наблюдается через 124 ч, при этом рН культуральной жидкости был равен 2,8. Таким образом, предлагаемая питательная среда позволяет сократить длительность выращиваНия продуцента молокосвертывающих ферментов Russula .decoldrans с 5,5-6,5 до 4,5-5,5 суто С заменой раствора осахаренного крах мала кукурузной мукой, а введение в среду таких источников неорганическо го -и органического азота как натрий азотнокислый и дрожжи позволяет сократить лагфазу продуцента, получать глубинную культуру, легко поддающуюся дальнейшей переработке, культуральная жидкость почти бесцветная, а следовательно, не требует очистки ее от пигментов. На таком сочетании источников углеводов и азота при выращивании продуцента наблюдается стабильное снижение рН глубинной культуры в кислую сторону, что предотвра щает развитие посторонних микроорганизмов, проникновение которых не исключается при таком длительном процессе выращивания. Ориентировочный экономический эффект только за счет снижения длитель ности выращивания и за счет замены осахаренного крахмала кукурузной мукой из расчета на 1.товарную тонну препарата с молокосвертывающей активностью ДООООО ед/г составляет около 10 тыс. рублей. , Формула изобретения Питательная среда для- выращивания продуцента молокосвертывающего (J)ep мента Russula decolorans, содержащая источники углерода и азота, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, хлористый кальций, магний сернокислый и воду, отличающаяся тем, что, с целью сокращения продолжительности выращивания, снижения себестоимости препарата фермента и повышения гарантии микробиологической чистоты процесса выращивания, среда содержит в качестве источника углерода муку кукурузную, а в качестве источника азота - натрий азотнокислый и . дрожжи, причем компоненты питательной среды взяты в следующем соотношении (вес. %): мука кукурузная 0,9-1,6 натрий азотнокислый 0,1-0,3 дрожжи О,1-0,4 калий фосфорнокислый однозамещенный 0,01-0,08 калий фосфорнокислый двузамещенный 0,02-0,06 кальций хлористый 0,05-0,5 магний сернокислый . 0,03-0,1 водаостальное Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР 522230, кл, С 12 D 13/10, 1974.J 2.Авторское свидетельство СССР № 595997, кл. С 12 Д 13/10, 1976 (прототип).