Способ определения эпидемичности вируса гриппа Советский патент 1983 года по МПК C12N7/00 

X

ел

X 4 - Изобретение относится к медицине а именно, к вирусологии. Известен способ определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенност популяций штаммов вируса, выделенны от больных tCl . Однако известный способ сложен, длителен, что затрудняет проведение профилактических мероприятий и своевременное приготовление вакцины из выделенных штаммов. Целью изобретения является упрощение способа, Цель достигается тем, что при ос ществлении способа определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных, исследуют антигенную гетерогенность штаммов в пре делах дрейфа и шифта и по наличию гетерогенности штаммов по антигенно му составу в пределах дрейфа и шифта определяют эпидемичность вируса гриппа, а по наличию гетерогенности штаммов только в пределах дрейфа или дополнительно содержащие единич ные варианты с шифтовыми изменениями определяют отсутствие эпидемичности. Способ осуществляют следующим об разом. Накопление вируса производят путем пассажей смывов от больных на куриных эмбрионах. Полученный материал разводят стерильным физиологическим раствором хлористого натрия с коэффициентом 10, после чего зара жают куриные эмбрионы, которые инкубируют при 35°С в течение 72 ч. Эмбрионы вскрывают, отбирают эллантоисные жидкости, давшие положитель ную реакцию геммагглютинации, и готовят из них пул, состоящий из равных объемов отдельных аллантоисных жидкостей. Собирают фракции вируса Фракционирование проводят на свежих или формализированных куриных эритроцитах, предварительно отмытых стерильным физиологическим растворо хлористого натрия. Вирус адсорбируют на куриных эритроцитах в течение 1,5 ч при +4с. Соотношение вирусосодержащей жидкости и эритроцитов равно 10:1. После адсорбции смесь центрифугируют при 1,5 тысяч об/мин в течение 5 мин. Снимают над осадочную жидкость. Для промывания к эритроцитам добавляют охлажденный до 1-4°С физиологический раствор хлористого натрия в соотношении 2:1 смесь размешивают и центрифугируют при 1,5 тысяч об/мин в течение 5 мин После снятия промывной жидкости к эритроцитам добарпяют охлажденный физиологически раствор в соотношении 1:0,7, размешивают и оставляю для э-люции при комнатной температуре. Через 30-60 мин проводят центрифугирование в указанном режиме и отсасывание пастеровской пипеткой элюата. К осадку эритроцитов добавляют новую порцию охлажденного физиологического раствора. Последующие элюаты снимают с тем же интервалом до полного истощения гемагглюи тинина. Для предотвращения пророста в используемый физиологический раствор и в пробирки для элюатов добавляют смесь антибиотиков (пенициллин со стрептомицином из расчета 100-200 ЕД/мл), Затем проводят проверку элюатов и установление антигенной структуры популяции. В надосадочной и промывной жидкостях, а также в полученных элюатах определяют геммагглютинируквдую активность. Затем надосадочную и промывную жидкости, полученные элюаты, а также осадок эритроцитов после снятия последнего элюата, разводят с коэффициентом 10 до предельных разведений, пассируют на куриных эмбрионах и инкубируют при 35,5с в течение 48-72 ч. Эмбрионы вскрывают, собирают аллантоионные жидкости и материал, отдельно от каждого эмбриона, проверяют в РТГА с гепериммунными сыворотками к эталонным штаммам вируса гриппа. По данным РТГЛ определяют.гетерогенность исследуемой популяции в пределах дрейфа, что свидетельствует о способности данного штамма вызвать некрупную эпидемию, а только локальные вспышки. Проявление гетерогенности популяции исследуемого штамма как в пределах дрейфа, так и в пределах шифта свидетельствуют о потенциальной возможности перерастания вызванных им вспышек в широко распространяемые эпидемии. Пример 1. Для изучения антигенной структуры популяции был взят вирус гриппа серотипа A/H3Nj /, эталонный штамм А/Гонконг/1/68. После его накопления на куриных амбрионах 100 мл вирусосодержащей аллантоисной жидкости адсорбировали в течение 1,5 ч на свежих эритроцитах кур. Элюцию проводили в 7 мл физиологического раствора хлористого натрия при комнатной температуре. Полученные элюаты, осадок эритроцитов, насадочную и промывную жидкости пассировали в куриных эмбрионах до предельных разведений. Все материалы, отдельно от каждого эмбриона, были оттипированы в РТГА. Всего при фракционировании было получено 479 штамм-вариантов. Из них 372 типируюхся как исходный штамм, причем у 75 отмечаются изменения в преде, лах дрейфа. У 77 полученных штаммвариантов отмечаются отличия от ос

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИДЕМИЧНОСТИ ВИРУСА ГРИППА путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных, отличающий ся тем, что, с целью упрощения способа, исследуют антигенную гетерогенность штаммов в пределах дрейфа и шифта и по наличию гетерогенности штаммов по антигенному составу в пределах дрейфа и шифта определяют эпидемичность вируса гриппа, а по наличию гетерогенности штаммов только в пределах дрейфа или дополнительно содержащие единичные вариашты с шифтовьо ш изменениями определяют отсутствие эпидекдачности.i