Способ получения [8-(6-аминогексил)-амино]-аденозин-5-дифосфата Советский патент 1981 года по МПК C07H19/20 C07H19/16 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 8-(6-АМИНОГЕКСИЛ;-АНИНО -АДЕНОЗИН-5 -ДИФОСФАТА Изобретение относится к усовершенствованному способу получения ГВ-(6-аминогексил)-амино -аденозин-5-дифосфата {8-AГA-AДФ , используемого для приготовления биоспецифических адсорбентов для аффинной хроматографии миозина и миозиноподобных белков. Известен способ получения 8-АГА-АД заключающийся в бронировании 5 -адено зинмонофосфата, во взаимодействии полученного бромпроизводного с гексакетилендиамином при , в защите первичной аминогруппы трифторацетильной защитной группой, в получении имидазглида Г8- (б-трифторацетамидо) амино -S-аденозинмонофосфата, который фосфорилируют до 8-(б-трифтораце тамидо) -амино -5 -аденозиндифосфата, в последующем удалении трифторацетиль ной защитной группы. Промежуточные продукты выделяются колоночной хроматографией на ионообменной смоле. Выт ход целевого продукта в расчете на ис ходный мононуклеотид составляет приблизительно 30 lj . Недостатками известного способа получения 8-АГА-АДФ являются многостадийность процесса и невысокий выход целевого продукта (приблизительно ). . Цель изобретения - упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта. Эта цель достигается тем, что согласно способу получения Г8-(6-аминогексил) -амино -аденозин-5-дифосфата в качестве нуклеотида используют аденозин-5 -дифосфат и взаимодействие полученного бромпроизводного с гексаметилендиамином производят при -комнатной температуре и рН 11,0-11,5 с последующим выделением целевого продукта ионообменной хроматографией,. Предлагаемый способ получения В-- -АГА-АДФ позволяет сократить число стадий до .двух, привести реакцию с гексамеТилендиамином при комнатной

температуре и повысить выход целевого продукта с 30 до .

П р и м е р. К раствору 0,55 г (1 ммоль ) тринатриевой соли 5 -АДФ в 3 мл Na-ацетатного буфера при рН «,0 добавляют при энергичном встряхивании 0,19 г (1,2 ммольj брома в 2 мл этого же буфера и оставляют на ночь при комнатной температуре. Максимум поглощения в УФ-спектре при этом смещается до 263 нм. Непрореагировавший бром экстрагируют ССЦ, после чего реакционную смесь лиофилизуют. Лиофилизат добавляют к раствору 10 г (0,09 моль перегнанного гексаметилендиамина в 10 мл . Добавлением конц. НС1 устанавливают рН 11,5 и оставляют на 48 ч яри комнатной температуре, По истечении этого срока максимум поглощения в УФ-спекре смещается до 279 нм. Реакционную смесь разбавляют в 100 раз водой и пропускают через колонку 11x2,5 см, заполненную анионитом ФАФ (олайненский химкомбинат в С1 форме. Колонку промывают водой (1,5 л до отсутствия качественной реакции на первичную аминогруппу с тринитробензолсульфокислотой, затем 500 мл 0,01 н НС1 и, наконец. О,О М LiCl в (|,01 н НС1. Фракция с максимумом поглощения при 275 чм, определенном при рН 9,5, объединяют, нейтрализуют и лиофилизуют. Вещество является хроматографически чистым при хроматографировании на пластинках Silufol

UV-254 в системе изомасляная кислота: аммиак: вода (66:1:33, дает окрашивание с нингидрином. Соотношения первичный амин: нуклеотид: кислотолабильный фосфор и первичный амин: нуклеотид:общий фосфор 1:1:1 и 1:1:2 соответственно. Выход, определенный методом с УФ-спектроскопии, считая 278 л-моль-1 см (рН 11,0;,

равен .

Формула изобретения

Способ получения Г8-(6-аминогексил)-aминoJ-аденозин-5-дифосфата, включающий бромирование нуклеотида, взаимодействие полученного бромпроизводного с гексаметилендиамином, о т личающийся тем, что, с целью упрощения процесса и увеличения выхода целевого продукта, в качестве нуклеотида используют аденозин-5 -диофосфат и взаимодействие

полученного 8-бромаденозин-5-дифосфата с гексаметилендиамином производят при комнатной температуре и рН 11,0-11,5.

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе 1. Тгауег I., Тгауег Н., Small О, and Bottomlev R.. Preparatfon of Adenosine Nucleotide Deri vaties Suitable for Affinity Chromatography.Biochem,J. 139, 197, 609, (прототип).