Способ получения литиевых солей бромсодержащих 8-замещенных (имидазо/2,1-I/пуринил-3)- @ -Д-рибофуранозил-5 @ -фосфатов Советский патент 1992 года по МПК C07H19/23 

пользованы в молекулярной биологии для регуляции уровня адениловых нуклеотидов в клетках различных тканей.

Цель изобретения - разработка простого одностадийного способа получения новыхреакционноспособныхфлуоресцентных производных в ряду циклических 1,М®-производных адениловых нуклеотидов.

Указанная цель достигается взаимодействием аденозин-3 ,5-циклофосфата или аденозин-5-ди- или -трифосфата с симметричным бис-(а-бромметил)кетоном при мольном соотношении реагентов, равном 1:(5--20) соответственно в среде: смешивающийся с водой полярный органический растворитель - 0,1 - 1,0 М водный раствор ацетата лития (рН 5,0 - 6,0) при 30-40°С с последующим выделением целевого продукта известными приемами.

Пример 1. Трилитиевая соль (бромацетил)фенил имидазо(2,1-0пуринил -3}- 0-рибофуранозил-5-трифосфата.

К раствору 110 мг (0,2 ммоль) динатриевой соли аденозин-5-трифосфата в 8 мл 0,1 М литий-ацетатного буфера (рН б)добавляюто раствор 320 мг(1 ммоль) 1.1-(1,4-фенилен)бис(2-бромэтанона) в 20 мл с веже перегнанного диметилформамида. Реакционную смесь термостатируют при 30°С в течение 24 ч, затем добавляют 15 мл воды и экстрагируют эфиром (3x100 мл). Водный слой после экстракции упаривают при пониженном давлении и 35°С. К остатку добавляют 2 мл безводного этанола, затем 2 мл безводного диэтилового эфира и полученную суспензию центрифугируют. Осадок отделяют и высушивают в вакууме. Выделение целевого продукта осуществляют с помощью препаративного высоковольтного электрофореза на бумаге в 0,025 М литийацетатном буфере (рН 6). Полосу бумаги, содержащую получаемое соединение, идентиф°ицируют в УФ-свете по флуоресценции, вырезают и элюируют водой. Элюат упаривают до обьема 0,5 мл, добавляют 2 мл безводного этанола и затем 5 мл безводного эфира. Осадок отделяют центрифугированием, промываютуказанной смесью и высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора. Получают 12 мг (9%) целевого продукта.

Физико-химические свойства полученного соединения представлены в табл.1.

П р и М е р 2. Дилитиевая соль (бромацетил)фенил имидазо(2,1-1)пуринил -3}-)б-О-рибофуранозил-5-дифосфата.

В условиях, аналогичных описанным в примере 1,из94 мг(0,2 ммоль) динатриевой

соли аденрзин-5-дифосфата получают 15 мг 11 %) целевого продукта.

Физико-химические свойства представены в табл. 1.

Примерз. Литиевая соль (бромметил)фенил имидазо(2,1-1)пуринил-3}-Д-рибофуранозил-3 ,5-циклофосфата.

В условиях, аналогичных описанным в примере 1, из 70 мг (0,2 ммоль) натриевой

соли аде1- озин-3,5-циклофосфата получают проду| ст, который очищают с помощью препаратцвнрй бумажной хроматографии в системе н-бутанол-уксусная кислота-вода (5:2:3). , содержащий целевой продукт

осторожнр подщелачивают разбавленным pacтвopOIv гидроокиси лития (рн 6-6,5) и далее обраб&;ывают как описано в примере 1. Получают 18 мг (15%) целевого продукта. Физико-химические свойства представлены в табл. 1.

Примеры 4 и 5. Дилитиевая соль (бромацетил)фенил имидазо(2,1 -)пуринил-3}-/3-0-рибофуранозил-5-дифосфата. I

Процесс проводят в условиях, описанных в примере 2, при значениях парамет-. ров, указанных в табл. 2.

П р и (wi е р 6 (сравнительный).

В услрвиях, аналогичных описанным в

примере 11, вводят во взаимодействие 275 мг (0,5 ммол(.) динатриевой соли аденозин-5трифосфата и 1,22 г (5 ммоль) 1,4-дибромбутандиона 2,3. Через 48 ч по данным ТСХ реакционная смесь представляет собой

сложную смесь трудноразделимых продуктов, не содержащую флуоресцирующих сое-: динений..

Проведение процесса за пределами указанны);: параметров приводит к снижению выхода целевого продукта, а в случае увеличения мольного соотношения нуклеотид:бис(б|1)омметил)кетон не наблюдается существенного увеличения выхода.

Таким образом изобретение позволяет

получать В достаточно простых условиях реакционно-способные алкилирующие производные I адениловых нуклеотидрв, обладающие выраженными флуоресцентрыми свойствами (их квантовый выход квантово1у|у выходу 1,Ы -этеноаденозина,

т.е. 0,5, b отличие от слабофлуоресцирующих 7-оксо-9-хлорметилпиримидо(2,1 -i)nyринил-3}7(0-рйбофуранозил-5 -фосфатов).

ФорМул а и 3 обретени я 1. Способ получения литиевых солей бромсод ржащих 8-замещенных(имидазо 2,1-1 пуринил-3)-/0-О-рибофуранозил-5 фосфатов общей формулы

где R1 - водород; Rp ОН

Ra - группа формулы где п 2 или 3,

или RI и R2 образуют группу формулы

оы

отличаю щи и с я тем, что натриевые соли аденозин-5-ди-. или -трифосфата, или аденозин-3,5-циклофосфата, соответственно, вводят во взаимодействие с 1,1-{1.4фенилен)бис(2-бромэтаноном) при молярном соотношении реагентов 1:(5-20) соответственно, в среде: смешивающийся с водой полярный органический растворитель - 0.1-1,0 М водный раствор ацетата

лития (рН 5,0-6,0) при 30-40°С.

2. Способ по п. 1, отл ича ю щийся тем, что в качестве органического растворителя используют Ы,Ы-диметилформамид, диоксан, гексаметапол, 1-метилпирролидон-2.:

Таблица 2

Изобретение касается нуклеотидов, в частности получения трилитиевой соли {8- [4-(бромацетил)фенил]имидазо[2,1 -1]пурин ил-3}-)5-0-рибофуранозил-5 -трифосфата или литиевой соли {8-[4-(б'ромметил)-фе- нил]имидазо[2,1 -{]пуранил-3}-О-рибофура- нозид-З ,5 -циклофосфата, которые могут быть использованы в качестве флуоресцентных аналогов адениловых нуклеотидов дляселективной модификации активных (или регуляторных) центров соответствующих ферментов, имеющих в районе связывания зкзо-МН2-группы молекулы субстрата определенную нуклеофильную группу, например - SH, а также в биологии для регуляции уровня адениловых нуклеотидов в клетках различных тканей. Цель - создание новых полезных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией Na-солей аденозин-3 .5'- циклофосфата или №-солей аденозин-5'-ди- или трифосфата с 1,1-