Способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне,воде,почве и зеленых листьях Советский патент 1981 года по МПК G01N31/08 

1

Изобретение относится к анализу материалов химическими способами путем хроматографии и может быть использовано для контроля за остаточными количествами пхлорфенилового эфира гераниола (аналога ювенильного гормона)

СНз-С СН-CHi-СН -С-СН-СН -0- С1

сн.

сн.

в объектах окружающей среды, продуктах питания и кормах с целью защиты окружающей среды от загрязнения химическими веществами.

Известен способ определения (4-(6,7-эпокси-3-этил-7-метил-2-ноненил)окси)-1,2 (метилен-диокси) бензола (ENT-70119) и 6,7-эпокси-1 - (п-этиЛфенокси) -3,7-диметил-2-октена (ENT-70221) в питательной среде для разведения Stomoxys calcitrans (L). Питательная среда представляет собой смесь измельченной мякоти сахарного тростника, пщеничной муки, рыбного белка и воды 1. Методика включает стадии экстракции смесью бензол-метанол в аппарате Сокслета,

очистки методом колоночной хроматографии на комбинированном сорбенте и анализа первого из указанных соединений методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) и второго спектрофотофлуометрическим методом. Пределы определения соответственно равны 6,0 и 1,0 мг/кг. Они настолько высоки, что могут превыщать исходную концентрацию действующего вещества. Кроме того, применение в качестве экстрагента смеси бензол-метанол обеспечивает извлечение, наряду с действующим веществом, больщо10го количества коэкстрактивных веществ-примесей, существенно затрудняющих анализ.

Известен также способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гера 5 ниола в зерне, воде, почве, и зеленых листьях, включающий экстрагирование органическими растворителями, очистку и хроматографический анализ.

Способ предусматривает четырехкратную экстракцию смесью диэтиловый эфир20 гексан (3:7), упаривание, очистку на колонке с окисью алюминия при последовательном промывании ее смесями диэтиловый эфир-гексан различного состава-, определение проводится методом жидкостной хроматографии с УФ-детектированием в пределах 0,5-1,0 мг/кг 2. Однако известный способ имеет низкую чувствительность определения и трудоемкость. Он пригоден лишь для исследовательских целей по изучению метаболизма, продолжительности сохранения и прочего и непригоден для анализа остатков в реальных условиях, поскольку реальные дозы действующего вещества значительно ниже. Например, исходные концентрации при обработке воды составляют примерно 0,02-1,0 мг/кг, зерна 1 -10 мг/кг, рекомендуемые нормы поверхностной обработки 100-300 г/га. Цель изобретения - повыщение чувствительности определения и снижение затрат. Поставленная цель достигается тем, что очистку проводят методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, а хроматографический анализ осуществляют путем газожидкостной хроматографии. В качестве органического растворителя используют гексан для зерна, воды и зеленых листьев. В качестве органического растворителя используют диэтиловый эфир для почвы. Чувствительность способа оценивается как нижний предел обнаружения п-хлорфени лового эфира гераниола в объекте. Нижний предел определяется двумя факторами: минимально обнаруживаемым количеством вещества на хроматографе (0,01 мкг); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определению п-хлорфенилового эфира гераниола Пример. Оценка нижнего предела обнаружения для зерна. Минимально определяемое количество вещества на хроматографе 0,01 мкг, что соответствует концентрации 5 мкг/мл (ввод пробы 2 мкл), а наличие коэкстрактивных веществ не позволяет увеличить размер пробы (свыше 50 кг) или уменьшить объем конечного анализируемого раствора (менее 1 мл) Таким образом, нижний предел обнаружения в зерне для данного способа 0,1 мг/кг. Аналогичным образом определяются пределы для остальных объектов. Для метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) предел обнаружения также определяется двумя факторами: минимально обнаруживаемым количеством вещества на пластине (0,5 мкг на силуфоле и 1,0 мкг на окиси алюминия); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определнию п-хлорфенилового эфира гераниола. Поэтому при анализе зернами листьев на пластину наносят не всю пробу, а ее часть, так как в противном случае оставшиеся коэкстрактивные вещества -мещают определению. Пример I. Количественное определение h-хлорфенилового эфира гераниола в зерне. (для нижних пределов обнаружения этим определяется заданное в пробу количество п-хлорфенилового эфира гераниола). Берут 5 навесок зерна пщеницы по 50 г каждая, экстрагируют 70 мл гексана при встряхивании в течение 1 ч. Одна используется как контроль, остальные содержат по 4,8 мкг п-хлорфенилового эфира гераниола, заданных в данные навески. По окончании растворитель сливают и дважы промывают зерно гексаном порциями по 30 мл. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 1-2 мл. Для количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола остаток переносят на пластину с окисью алюминий, которую элюируют циклогексаном. Зону, соответствующую п-хлорфениловому эфиру гераниола, трижды промывают подогретым до 40°С гексаном, экстракт упаривают до 1 мл и анализируют методом ГЖХ на фазе SE-30 Контроль при времени удерживания Т 4,11 мин пика не имеет. В остальных пробах обнаружено, %: 72,9; 67,4; 73,3; 73,0 внесенного вещества (средний процент обнару ения 71,9). Стандартное отклонение 2,8°/о, доверительный интервал 4,4% при уровне надежности р 0,95. Пример 2. Количественное определение h-хлорфенилового эфира гераниола в воде. Параллельно анализируют 5 проб, каждая объемом 1 л. Одну используют как контроль, в остальные задано по 2,015 мкг вещества. Пробу воды помещают в делительную воронку объемом 2 л, добавляют 150 мл гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин, органический слой отделяют и повторяют экстракцию 80 мл гексана. Объединенный экстракт суш.ат и очищают так же, как в предыдущем случае. Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено,%: 67,5; 70,6; 71,7; 65,0 внесенного вещества (в среднем 68,7%), стандартное отклонение 3,0%, доверительный интервал 4,8%, при уровне надежности р 0,95. Пример 3. Количественное определение п-хлорфенилового эфира гераниола в почве. Параллельно анализируют 4 пробы весом по 100 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе добавляют 150 мл диэтилового эфира и встряхивают в течение 1 ч, растворитель сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза порциями по 70 мл в течение 15 мин. Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1. Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено, %: 79,9; 76,3; 75,4 внесенного вещества (в среднем 77,2%), стандартное отк лоненУе 2,4%, доверительный интервал 5,9% при уровне надежности ,95. Пример 4.. Количественное определение h-хлорфенилового эфира гераниола в зеленых листьях. Параллельно анализируют 5 проб весом 20 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе листьев добавляют 70 мл гексана и встряхивают 40 мин. Экстракт сливают и промывают листья двумя порциями гексана по 70 мл каждая. Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1. Контроль пика не имеет, в остальные пробах обнаружено, %: 78,6; 84,0 75,9; 78,6 внесенного вещества (в среднем 76,2%), стандартно отТаблица 1 клонение 8,0о/о,доверительный интервал 12,7% при уровне надежности р 0,95. Результаты количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола представлены в табл. 1. В табл. 2 показаны нижние пределы определения п-хлорфенилового эфира гераниола известным и предложенным способом. Количество реагентов, необходимых для проведения анализа, уменьшается. В известном способе для очистки на одну колонку требуется 22 г окиси алюминия,5 мл диэтилового эфира и 55 мл гексана, а в предлагаемом для пластины - 13 г окиси алюминия , 30 мл циклогексана и 20 мл гексана.

4,8/50

Зерно

2,015/1000

Вода

4,8/100

Почва

4,8/20

Листья

71,6

4,4

2,8

68,7

3,0

4,8

77,2

2,4

5,9

76,2

8,0

12,7

Мука пшеничная0,5

Формула изобретения

используют гексаи для зерна, воды и зеленых листьев.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

2.Redfern R E. et all. Activity and Persistance of the insect juvenile hormone mimic IH-25 in flour. J. of Econ. Entom., 1975, Wo 3, p. 377.