Способ определения количества фенотиазина в меде Советский патент 1984 года по МПК G01N33/02 

1 Изобретение относится к санитарии и может быть использовано при санитарно-гигиенической оценке меда после обработки пчел фенотиазином, Фенотиазик находит широкое исполь зование для диагностики и лечения варроатоза и браулеза (вшивости) пчел. Его применяют путем сжигания в виде порошка или специальных таблеток в улье с больными пчелами. При лечении варроатоза пчел фенотиазином остатки его попадают в мед. Широкое применение фенотиазина в пче ловодстве вызывает необходимость пос тоянно проводить ветеринарно-санитарную оценку меда в отношении остаточных количеств этого препарата. Известен способ определения фенотиазина в меде с помощью тонкослойной хроматографии, согласно которо.му экстракцию фенотиазина из меда проводят с помощью 60 мл бензола.Полученный экстракт очищают путем элюирования (вымывания) через колон ку с силикагелем АСК и окисью алюминия, где в качестве вымывающего раствора также используют бензол (ДО мп). Конечное определение фенотиазина проводят на пластине силуфол обрабатывая (опрыскивая), ее раствором хлорного железа ij . Недостатками этого способа являются использование при анализе больших количеств бензола, который обладает канцерогенным действием, а также проявление хроматографических пластин раствором хлорного железа, которое выявляет и многие другие вещества. Кроме того, чувствительност метода составляет 3 мкг препарата в пробе, что вынуждает брать навеску меда не менее 30 г, с которой очень неудобно работать. Известен также способ определения количества фенотиазина в меде, предусматривающий экстракцию фёнотиазнна из водного раствора меда ацетоном с последуюш;им перераспределением в гексан, упаривание экстракта,нанвсение его на пластину,воздействие проявляющим реактивом и установление ко личества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна.

Дпя дополнительной очистки экстр к- 55 та хроматографическую пластину вначале пЬмещают в боковом положении в камеру с гексаном, а затем в камеру

После обработки пластины проявляющим реактивом (нитратом серебра) обнаружены темно-зеленые пятна фенотиазина в пробе меда и стандартном растворе фенотиазина. Коэкстрактивные вещества из пробы меда проявляются рядом с пятном фенотиазина, прикрывая его только с одной правой 37 с системой подвижных растворителей гексан-ацетон. Конечное определение препарата проводят на хроматографических пластинах со слоем окись алюминия - гипс, так как при использовании этих пластин требуется не очень тщательная очистка экстракта. В качестве проявляющего реактива применяют 1 %-ный водный раствор азотнокислого серебра. Чувствительность метода составляет 1 мкг препарата в пробе меда или О,1 мг/кг 2 . Недостаток этого способа - использование в качестве проявляющего реактива азотнокислого серебра, которое является дефицитным, и дорогостоящим реагентом и относится к особо ядовитым лекарственным средствам списка А (Яды),которые необходимо хранить , учитывать и использовать согласно специальным строгим правршам. Кроме того, в качестве хроматографических пластин используют пластины CQ слоем окись алюминия - гипс, которые исследователь готовит .самостоятельно. После нанесения конечного экстракта на хроматографическую пластину проводят .дополнительную, очистку экстракта путем помещения пластин в боковом положении в хроматографическую камеру, насыщенную гексаном. Принцип этой Очистки заключается в том, что гексан не двигает остаточные количеств.а фенотиазина на пластине, но сдвигает коэкстрактивные вещества, покрывающие фенотиазин на пластине. После прохождения фронта растворителя через всю пластину ее вынимают из камеры и оставляют на воздухе до исчезновения запаха гексана. Затем зту пластину помещают в камеру со смесью подвижных растворителей гексан - ацетон в соотношении 24:6, повернув ее на 90 по отношению к первоначальной разгонке. После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластину вынимают из камеры и через 10 с опрыскивают %-нымводным раствором азотнокислого еребра. стороны, что позволяет определить количество фенотиазина в сравнении с пятном стандартного раствора исследуемого препарата. Сравнивая площадь и интенсивность окраски пят из пробы с пятном стандартного раст ра фенотиазина, количество фенотиазина в пробе меда определяют по формуле где X общее количество фенотиазина в меде, мг/кг; количество фенотиазина в стандартном ацетоновом рас воре, нанесенном на пласти ну рядом с опытной пробой, мкг; площадь пятна стандартного раствора фенотиазина, нане сенного на пластину, 5„- площадь пятна пробы. Р -.масса пробы меда, взятого для анализа, г. Кроме того, при определении фенотиазина известным способом на пла тинах силуфол не удается получить удовлетворительные результаты из-за проявления азотнокислым серебром коэкстрактивных веществ меда (воск пигменты),которые закрывают собой пятно фенотиазина, т.е. наблюдается четкая зависимость результата анализа от степени загрязнения меда козкстрактивными веществами. При ис кусственном внесении фенотиазина в пробы меда и особенно при анализе свежеоткачанного меда после лечения пчелиных семей фенотиазином нередко не удается выявить остатки фенотиазина на пластине силуфол, а на пла тинах со слоем окись алюминия - гип препарат в этих пробах определяется Цель изобретения - повышение точ- 45 тину ности определения путем предотвращения образования загрязнения на пятне исследуемого вещества и упрощение анализа. Поставленная цель достигается тем что согласно способу -определения количества фенотиазина в меде, включающему экстракцию фенотиазина из водного раствора меда ацетоном с пос ледующим перераспределением в гексан 55 ся

упаривание экстракта, нанесение его на пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление коливором соляной кислоты и не мешают проявлению розовых пятен фенотиазина. Rf препарата 0,45. 374 чества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 н. раствор соляной кислоты. При нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива, используют 0,1-0,5 н. раствор соляной кислоты, а на пластину со слоем окись алюминия - гипс 1-2 н. раствор соляной кислоты. Сущность изобретения заключается в том, что при обработке пластины силуфол или со слоем окись алюминиягипс раствором соляной кислоты фенотиазин проявляется на пластине в виде розовых пятен на белом фоне.Коэкстрактивные вещества меда при этом не проявляются и не мещают выделению пятен фенотиазина, что не требует проведения не только тщательной основной, но и даже дополнительной очистки экстрактов путем помещения пластин в камеру с гексаном. Пример I, Навеску меда (10 г), содержащего фенотиазин в количестве 0,18 мг/кг, растворяют в 10 мл дистиллированной воды, переносят в делительную воронку и фенотиазин экстрагируют 30 мл ацетона, встряхивая воронку 3 мин. Слоям дают разделиться и нижний слой отбрасывают, а верхний (ацетоновый экстракт) переносят в чистую делительную воронку, добавляют 60 мл истиллированной воды и реэкстрагируют 10 мл гексана, встряхивая воронку 2 мин. Реэкстракцию фенотиазина в гексан повторяют дважды. Затем гексановые экстракты объединяют, 10 г безводного сернокислого натрия сушат в течение 15 мин, упаривают до небольшого объема (0,2 ил) и наносят на пластину силуфол. Рядом с опытной пробой наносят известные количества фенотиазина в ацетоне и пласпомещают в хроматографическую камеру со смесью гексан - ацетон в соотношении 24:6. После подъема фронта растворителей на высоту 10 см пластину вынимают из камеры и обрабатывают 0,1 н. раствором соляной кислоты.Феиотиазин проявляется через 60 с после начала опрыскивания в виде четких .пятен-розового цвета. Коэкстрактивные вещества из пробы меда не проявляютна пластине при обработке ее растКоличество фенотназина в исследу мой пробе меда устанавливают путем сравнения интенсивности окраски и площади пятна из анализируемого об разца и известного количества фенотиазина в ацетоне (стандартный раст вор), нанесенного рядом с опытной пробой на пластинке до помещения ее в хроматогра ическую камеру. Общее количество фенотиазина в м де определяют по формуле Ч где X - общее количество фенотиазин в меде,мг/кг; А - количество фенотиазина в стандартном растворе, нанесенном на пластину, мкг; площадь пятна стандартного раствора, площадь пятна исследуемой пробы, мм ; Р - масса исследуемой пробы меда, г. Подставив полученные показатели в формулу 2 j 32 0,2 мг/кг 32 То устанавливают, что количество фенотиааина в меде 0,2 мг/кг, Пример 2. Анализ пробы меда проводят аналогично примеру 1 за исключением того, что экстракт наносят на пластину силуфол и опрыс кивают 0,5 н. раствором соляной ки лоты. В результате этого розовые пятна фенотиазина проявляются через 10 с после начала .опрыскивания и имеют более интенсивную окраску.Коэкстрактивные; вещества из пробы меда не проявляются на пластине и не загрязняют собой пятна фенотиази на. Количество фенотиазина в пробе меда 0,2 мг/кг. П Р и м е Р 3. Анализ меда прово дят по примеру 1, однако гексанойый экстракт, упаренный до объема 0,2 м наносят на пластину со слоем окись алюминия - гипс.После развития хррматограм ы в камере со смесью подт{жных растворителей гексан - ацетон в соотношении 24:6 пластину вынимают из камеры и обрабатывают IH. раствором соляной кислоты. В резуль тате остатки фенотиазина проявл ротся непосредственно после опрыскивания в виде четких пятен розового цвета, которые через30 мин приобретают зеленую окраску. Rf препарата 0,50. Козкстрактивные вещества не проявляются на пластине и не перекрывают собой пятен фенотиазина, а также не нарушают их конфигурации, Количество фенотиазина в пробе меда 0,22 мг/кг. Пример 4. Анализ меда проводят по примерам 1 и 2,,. однако пластину со слоем окись алюминия - гипс опрыскивают 2н. раствором соляной кислоты. В результате фенотиазин проявляется в виде четких пятен розового цвета с более интенсивной окраской. Через 30 мин пятна приобретают зеленую окраску. Коэкстрактивные вещества на пластине не выявляются и не мешают проявлению розовых пятен фенотиазина.Количество фенотиазина в исследуемой пробе меда 0,22 мг/кг. Таким образом, остатки фенотиазина, обнаруженные в исследуемом меде предлагаемым способом, составляют 0,2 и 0,22 мг/кг (примеры 1-4), а известным - 0,18 мг/кг. Это объясняется тем, что при анализе меда известным способом коэкстрактивные вещества на пластинах со слоем окись алюминия - гипс мешают проявлению пятен фенотиазина и снижают полноту его определения. С целью установления чувствительности метода и полноты определения фенотиазина в пробы меда вносят известные количества препарата и проводят анализ предлагаемым способом. Результаты исследований представлены в табл.I. Данные табл. похазьшают, что увствительность предлагаемого способа составляет 0,5 мкг в пробе меда (10 г) или 0,05 мг/кг, полнота определения 70-80 %. Предлагаемый способ определения количества фенотиазина в меде по сравнению с известным обладает повышенной точностью определения и позволяет устранить зависимость результата анализа от присутствия в меде коэкстрактивных веществ. При этом способ дает возможность проводить конечное определение фенотиазина на пластинах силуфол без проведения трудоемких ме7годов очистки экстракта из

ме того, способ более экономичен

(табл.2) и не требует для проведения для использования.

ВОВ, что делает его перспективным

Таблица 1 меда.Кро- анализа опасных и дефицитных реакти11202378

I.СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ФЕНОТИАЗИНА В МЕДЕ, предусматривающий экстракцию фенотиазина из . водного раствора меда ацетоном с последуюсдим перераспределением в гексан, упаривание экстракта, нанесение его на пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна, о т л и ч а |ощ и и с я тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения образования загрязнения на пятне исследуемого вещества и упрощения анализа, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 и.раствор соляной кислоты. 2.Способ поп.1.отличающ и и с я тем, что при нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива используют 0,1-0,5 н. раствор соляной кис- . лоты. 9 3.Способ поп.1,отличающ и и с я тем, что при нанесении экстракта на пластину со споем окись алюминия - гипс в качестве проявляющего реактива используют 1-2 н. раствор соляной кислоты.

Затраты на дополнительную очистку экстрактов Затраты на проявляющие реактивы Итого: 2 руб.88 коп. 0,03-0,59 коп. 29,6 коп. 0,03-0,59 коп. 3 руб.17,6 коп.