Способ определения кофеина в лекарственных смесях Советский патент 1982 года по МПК G01N31/08 

I

Изобретение относится к определению кофеина и лекарственных смесях и может быть использовано при анализах фармацевтических препаратов в контрольно-аналитических лабораториях.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ определения кофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования. Точную навеску анализируемого образца, равную 0,16 г, помещают в мерную колбу емкостью 50 мл и обрабатывают 20-25 мл теплого хлороформа для извлечения действующих веществ из таблеточ-ной массы, после охлаждения раствор доводят до метки хлороформом, перемешив.ают и фильтруют Первую порцию фильтрата отбрасывают, из следующей порции 2 мл переносят в делительную воронку и промывают 2 ра|3а 1 н раствором серной кислоты пор;циями по 5 мл, взбалтывая каждый раз в течение 2 мин. Хлороформный раствор переносят в мерную колбу емкостью 50 мл, сернокислое извлечение промывают хлороформом дважды по 5 мл, присоединяя его к основному раствору в мерной колбе. Хлороформ отгоняют, остаток растворяют в 0,01 н растворе гидроокиси аммония. Оптическую плот10ность раствора определяют при 240 и 273 нм при использовании в качестве раствора сравнения 0,01 н раствора гидроокиси аммония. Содержание кофеина определяют по известной форму15ле С1 .

Недостатком известного способа является его низкая селективность, что ограничивает применение. Способ не может быть использован для определеМния кофеина в лекарственных смесях, содержащих такие вещества, например, как промедол, папаверина гидрохлорид, фенацетин вследствие активного области noпоглощения этих веществ в глощения кофеина и невозможности отделения указанных компонентов от кофеина методом экстракции из-за растворимости промедола и солей папаверина в хлороформе, а также содержания фенацетина, являющегося макрокомпонентом (в лекарственных смеСях соотношение кофеина и фенацетина обычно равно 1:10), в анализируемой фракции даже с учетом его ограниченной растворимости в хлороформе. Известный способ неприемлем для определения кофеин-бензоата натрия вследствие его нерастворимости в хлороформе, хотя кофеин-бензоат натрия значительно чаще кофеина входит в состав различных фармакологических сочетаний . Цель изобретения - повышение селективности способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения кофеина в лекарственных смесях путем растворения анализируемой пробы в органическом растворителе, отделения сопутствующих веществ и фотометрирования, пробу растворяют в 506б5 -ном этаноле, сопутствующие вещества отделяют хроматографией в тонком незакрепленном слое кисдой окиси алюминия в системе хлороформэфир, взятых в соотношении :50-65, полученную зону кофеина выявляют в ультрафиолетовом свете и фот.ометрируют. Способ осуществляется следующим образом. Анализируемую пробу растворяют в 50-60%-ном этаноле, полученный раствор хроматографируют в тонком незакрепленном слое кислой окиси алюминия в системе хлороформ-эфир, взятых в соотношении 25-35:50-65. Зону кофеина выявляют в УФ-свете, элюируют анализируемое вещество 0,050,1 н раствором соляной кислоты и полученный элюат спектрофотометрируют при 273 нм. Обработка анализируемой пробы раст ворителем, отделение сопутствующих веществ и фотометрирование позволяет перевести в раствор в случае порошка вер анализируемую пробу, а в случае таблеток - все действующие вещества, включая кофеин-бензоат натрия. Хроматографирование раствора смеси в тонком незакрепленном слое кис903765ло ри ни и чи ву ма яв зо ли ще на ла оп ра но фо га ни че ко ве окиси алюминия в системе раствоелей хлороформ-эфир в соотноше25-35:50-65 позволяет полностью о значительным различием в велиах Rf отделить кофеин от сопутстщих компонентов. Кофеин-бензоат натрия дает на хроограмме две зоны, одна из которых яется зоной кофеина, а вторая ой бензоата натрия и находится на ии старта Хроматографическое разделение ветв, составляющих кофеин-бензоат рия, позволяет использовать предаемый способ для количественного еделения в лекарственных смесях личного состава не только кофеина, и кофеина-бензоата.натрия. Количество кофеина вычисляют муле: А Уа Р. /4 X - количество кофеина или кофеин-бензоата натрия в анализируемой пробе, г; D и D, - оптическая плотность элюатов анализируемого образца и стандартного раствора соответственно;количество кофеина или кофеин-бензоата натрия в 1 мл стандартного раствора с учетом исходной концентрации, наносимого на хроматограмму количества раствора и разведения при элюировании, г; V - объем пробы, наносимой на хроматограмму, мл; Л - объем мерной колбы, используемой для растворения анализируемого образца; V - объем мерной колбы, используемой при элюировании;Р - вес лекарственной формы по прописи, г; q - точная навеска анализируемого образца, г. Для установления точности предламого способа проводят его испытапостановкой серии опытов, для о кофеин и кофеин-бензоат .натрия ичественно определяют в искусстных лекарственных формах, приготовленных по прописи отвешиванием и гредиентов, без включения стадий из мельчения и смешивания ингредиентов во избежание наложения ошибок, не связанных с точностью анализа, а ха рактеризующих потери на различных стадиях технологического процесса. Взвешивание ингредиентов проводят на аналитических весах, поэтому навеска анализируемого образца соот ветствовала весу порошка по прописи Экспериментальные данные много кратной повторности и результаты статистической обработки данных, по лученных при анализе сложных (искусственных) смесей при терапевтической дозе 0,1 г, представлены в табл. 1. Как видно из данных статистической обработки, способ не содержит систематической ошибки, та как истин ное содержание кофеина не выходит за пределы установленного интервала. Относительная погрешность среднего результата с надежностью оС 0,95 равняется t3,0. В качестве объектов исследования используют сложные кофеиносодержащие порошки, приготовленные в аптеках и кофеинсодержащие лекарственные фо мы заводского изготовления - таблет ки при различных терапевтических дозах. Результаты приведены в табл.1Технологический процесс изготовления порошков в условиях аптек вклю чает взвешивание ингредиентов на тех нических весах в расчете на все дозы, измельчение, смешивание и развеску на дозы. На стадиях измельчения и смеши-вания возможны потери ингредиентов, а также ошибки, обусловленные взвешиванием .на технических весах, поэто му точный вес порошка не соответствует весу порошка по прописи, что учитывается при расчете результатов анализа. Исходя из многостадийности технологического процесса, допускаются отклонения в содержании отдельных ин гредиентов в дозе. Для лекарственных форм аптечного изготовления в соответствии с инструкцией допустимыми являются tlO, ±15, -2Q% при содержании 0,1; 0,05; 0,02 г вещества соответственно. Найденное содержание кофеина и кофеин-бензоата натрия (табл. 2 и 3) не выходит за пределы допустимых отклонений. Относительная погрешность среднего результата с надежностью «СО,95 равняется ii, (табл. 2). Способ испытывают на заводских лекарственных формах. Данные количественного анализа таблеток свидетельствуют о возможности использования предлагаемого способа для анализа таблеток и показывают, что вспомогательные вещества, входящие в состав таблеточной массы, не оказывают влияния на ход анализа, поэтому способ может быть применен для таблеток кофальгин (кофеин-бензоата натрия 0,05, анальгина 0,3%), пирамеин (кофеина 0,03 г, амидопирина 0,3 г), пираминал (кофеина 0,03 г, фенобарбитала 0,02 г, амидопирина 0,25 г), кофадин (кофеин-бензоата натрия 0,1 г, кодеина 0,0015 г, амидопирина 0,25 г, анальгина 0,25 г), диафеин (кофеин-бензоата натрия 0,05 г, фенобарбитала 0,02 г, анальгина 0,25 г, фенацетина 0,25 г), дикафен (кофеин-бензоата натоия 0.05 г, кодеина 0,015 г, анальгина 0,25 г, фенацетина 0,25 г), так как количественное определение кофеин-бензоата натрия проводят при испытании способа на порошковых лекарственных смесях подобного или более сложного состава (табл. 1). Пример 1. Один порошок лекарственной смеси (q - точная навеска 0,38 г), содержащей, г: папаверина гидрохлорида 0,03; фенобарбитала 0,05; кофеин-бензоата натрия 0,1; бромизовала 0,2; вес по прописи Р равен 0,38 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 50%-ном этиловом спирте и доводят объем до метки . Параллельно готовят раствор стандарта растворением в мерной колбе емкостью 25 мл 0,1 г кофеин-бензоата натрия, соответствующего требованиям и содержащего tO кофеина. На стеклянную пластинку размером см с помощью прибора наносят слой выпускаемой фирмой Reanal окиси алюминия II степени активности по Брокману, модифицированной добавлением ледяной уксусной кислоты; толщина слоя 1 мм. На линию старта с помощью микропипетки наносят 0,15 мл (V) раствора анализируемого образца и раствора стандарта кофеин-бензоата натрия в виде полос шириной около f мм и длиной около k CM. (Увеличение объема наносимой пробы до 0,15 мл с исполь зованием в процессе элюирования При ма разведения дает возможность избежать ошибок на первой стадии анализа за счет неточности измерения малых объемов). На хроматограмме оставляют пусту зону тех же размеров. Зоны подсушивают до полного удаления растворите ля, затем хроматограмму развивают в системе растворителей хлороформэфир, взятых в соотношении 25:б5, Обнаружение зоны кофеина проводя в УФ-свете, источником которого слу жит хроматоскоп с максимумом излучения 25 нм (Rf кофеина 0,33), Обкалывают иглой зону кофеина стандарта, зону кофеина в исследуемом образце и пустую зону таких же размеров, расположенную на уровне кофеина стандарта, С хроматограммы уд ляют лишний адсорбент. Зону кофеина анализируемого образца, зону кофеина стандарта и пус тую зону помещают в микроколонки и элюируют 0,1 н раствором соляной кислоты в мерные колбы 25 мл (V).. Полученные элюаты центрифугируют при скорости 10000 об/мин в течение 5 мин. На спектрофотометре СФ-26 при толщине поглощающего слоя 1 см и дл не болны 273 нм определяют оптическую плотность элюатов, полученных с зон кофеина в исследуемом образце (DX 0,37) и стандарте (О 0,368) при использовании в качестве раство ра сравнения элюата пустой зоны. (Спектрофотометрирование элюата исследуемого образца и стандарта пр использовании в качестве раствора сравнения элюата пустой зоны дает возможность учесть помехи, обусловленные наличием в элюате побочных продуктов, зависящих от природы адсорбента) . Содержание кофеина и кофеин-бензоата натрия в исследуемом образце определяют по формуле, при этом содержание кофеина равно 0, г, а содержание кофеин-бензоата натрия 0,1005 г. Пример 2. Берут полученную навеску порошка (q 0,635 г), приготовленного по прописи, г: кофеина фосфата 0,015; кофеина 0,02; анальгина 0,2; амидопирина 0,2; фен ацетина 0,2; (вес по прописи Р равен 5 0,635 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 60%-ном этиловом спирте и доводят объем до метки. Параллельно доводят раствор стандарта кофеина в концентрации, соответствующей содержанию кофеина в анализируемом образце. В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя в качестве подвижной фазы, взятых в соотношении (30:60), Rf кофеина в этих условиях 0,35. При этом получают О, 0,13 и 0,165. Содержание кофеина 0,0218 г. Пример 3. Один порошок лекарственной смеси (q - точная навеска 0,63 г), содержащей,, г: промедола 0,03; кофеин-бензоата натрия 0,1; анальгина 0,25; амидопирина 0,25; (вес по прописи Р равен 0,63 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 60%-ном этиловом спирте и доводят до метки. В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя окись алюминия и систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении 30:60, Rf кофеина в этих условиях 0,35. При этом получают (У 0,5 и DC 0.2. Содержание кофеин-бензоата натрия составляет 0,1070 г, а содержание кофеина - 0, г. Пример . Одну таблетку (точная навеска 0,б57 г), содержащую, г: кофеин-бензоата натрия 0,1; анальгина 0,25; амидопирина 0,25, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,663 г, помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки, затем доводят объем до метки. В дальнейшем в.едут анализ по методике, описанной в примере 1, но используя систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении 35:50 (Rf кофеина 0,2), и для элюирования кофеина с адсорбентом 0,05 н раствор соляной кислоты. При этом получают D 0,395 и Осы 0.05. Содержание кофеина равно 0,039ч г, а кофеин-бензоата натрия - 0, г. Пример 5. Один порошок лекарственной смеси (q 0,5б5 г), содержащей, г: кодеина фосфата 0,015; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,25; фенацетина 0,25; (вес порошка по прописи Р равен 0,5б5 г) растворяют в мерной колбе емкостью 25 мл в 60%-ном этиловом спирте и доводят объем до метки.

Параллельно готовят раствор стандарта кофеин-бензоата натрия в концентрации, соответствующей содержанию кофеин-бензоата натрия в анализируемой смеси.

В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, но наносят на линию старта по 0,3 мл раствора анализируемой смеси и раствора стандарта, систему растворителей хлороформ-эфир, взятых в соотношении 30:60.

Получают Dj(0,t5 и 0 0,5.

Содержание кофемна составляет 0,018 г, а содержание кофеин-бензоата натрия - 0, г.

Пример 6. Одну таблетку (точная навеска равна 0,779 г), содержащую, г: кодеина 0,0015; фенобарбитала 0,01; кофеин-бензоата натрия 0,05; анальгина 0,3; амидопирина 0,3, вспомогательных веществ достаточное количество до получения таблетки средним весом 0,773 г помещают в мерную колбу 25 мл и обрабатывают 60%-ным этиловым спиртом при покачивании до полного распадания таблетки. В дальнейшем ведут анализ по методике, описанной в примере 1, включая приготовление стандарта, но используя в качестве системы растворителей смесь хлороформа и эфира в соотношении 30:60.

Получают DJ, 0,15 и D,. 0,32.

Содержание кофеина равно 0,0186 г, а содержание кофеин-бензоата натрия 0, г.

. Предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение кофеина и кофеин-бензоата натрия в различных лекарственных смесях сложного состава в присутствии бромизовала, фенацетина, фенобарбитала, кодеина, амидопирина, промедола, анальгина, папаверина гидрохлорида, т.е. веществ, наиболее часто сопутствующих кофеину в лекарственных смесях.

Предлагаемый способ по сравнению с известным обеспечивает высокую селективность определения кофеина в лекарственных смесях различного состава и позволяет определять количественное содержание производного кофеина - кофеин-бензоата натрия в сложных смесях.

Способ прост по выполнению и обладает высокой точностью определения кофеина и кофеин-бензоата натрия в различных дозах, а также высокой чувствительностью, так как уменьшение дозы кофеина в анализируемом образце соответственно вызывает уменьшени оптической плотности элюата.

Таблица 1

Амидопирина0,3 0,63 0,42 О, Фенобарбитала0,3 Кофеин-бензоата натрия0,1 Амидопирина0,25 Фенацетина0,25 0, 0, X 0,0039 X 0,0013 X 0,0030

11 Кофеин-бенэо 0,1 0,60 О,«О 0, эта натрия

903765

12 Продолжение табл. 1 0,0tOO 0,1000 3, Фенобарбитала 0,01 О, if 095 0,37 0,39 Кофеинбензоатанатрия 0,1 Амидопирина 0,3 0,617 О,АО 0, Фенобарбитала: 0,03 Кофеиибензоатанатрия Амидопирина фенацетина Кофеинбенэоата0,5917 0,35 0,35 натрия 0,25 Анальгина 0,25 Амидопирина 0,6135 0, 0, 0,015 Кодеина Кофеинбензоатанатрия 0,1 Анальгина 0,25 Амидопирина 0,3620 0,42 0,40 Кодеина фосфата 0,015 Кофеинбензоатанатрия Амидопирина 0,6229 0,42 0,45 Промедола Кофеинбензоата0,1 натрия 0,25 Амидопирина 0,25 Анальгина 0,5343 0,42 0,42 0,025 Промедола

Таблица 2

0,0051 0,0018

0,0042 t4,10 0, 0,1055 0,102 0, 0,1096 , 0,101i , 0,1027 0,0384 0,0960 ,0433 0,1083 ,0392 0,0982

15

903765

16 Продолжение табл, 2

Таблица. 3,

17

0,6577 0,38 0,360,03820,0955 0,1006

18

903765 Таблица k

0,38 0,40Q,,0,1061 0,0051

0, 0,20,,1058 0,0023

0, 0,00,,1000iO,0063

0,40 0,380,03830,0958 0,1006±

0,0063

t6,26%