Способ получения индоксильных или тиоиндоксильных сложных эфиров аминокислот или пептидов Советский патент 1985 года по МПК C07D209/12 

1 1 Изобретение относится к области .получения новых сложных эфиров амиио нокислот или пептидов, которые могут быть использованы в качестве диагностических средств. Известно получение сложных эфиров взаимодействием спиртов с галоидангидридами кислот, смешанными ангидридами или активированными слож ными эфирами кислот 1 . Цель изобретения - разработка на основе известного метода способ получения новых соединений для быстрой и простой диагностики. Поставленная цель достигается способом получения индоксильных или тиоиндоксильных сложных эфиров аминокислот или пептидов общей формулы 0-А-В где - одинаковые или различны и означают водород, галоид, низшую алкильную, алкоксильную, арильную, аралкильную, аралкоксил ную, гидроксильную, кар боксильную, карбокси (низший) алкоксильную, аралкоксикарбонильную, аралкоксикарбонил (низший) алкоксильную, нитро- или низшую ациламиногруппу, или два сосед них заместителя означаю бензоаннелированный ост ток; X - сера, или незамещенная аминогруппа, или замеще ная алкильным, аралкиль ным, арильным или ациль ным остатком аминогрупп А - моноаминокарбоновая кис лота или аланинсодержащий ди- или трипептидны остаток; В - N-защитная группа в петидной части (остатке), согласно которому соединение общей формулы RI 52 де R,-R и X имеют указанные значеия, подвергают взаимодействию с гаоидангидридами или смешанными ангидидами, или активированными сложными фирами кислот общей формулы НО - А - ВIII де Л и В имеют указанные значения. В качестве обычной в химии пепидов защитной для азота группы определении В нужно понимать, натример ацильную, оксикарбонильную, иокарбонильную, сульфонильную, сульенильную, пинильную, циклогексенильую, фосфорильную или карбомоильную руппы. Пример 1. 3-/Ы-/Толуол-4 сульфонил/-1: аланилокси/-индол. Раствор 1. Для приготовления хлорангидрида кислоты по одностадийному способу 5,35 г (0,22 моль) Ы-/толуол-4-сульфонил/-Ь-аланина растворяют в 20 мл абсолютного диметилформаМИДа (ДМФ) и охлаждаю т до -ЗО.С. Затем при перемешивании и охлаждении добавляют пипеткой 1, 76 мл (0,024 моль) хлористого тионила и реакционную смесь оставляют на 30 мин в охлаждающей бане при -30°С. Раствор 2. В трехгорлую колбу емкостью 250 мл, снабженную мешалкой, термометром и трубкой для подачи и отвода газа, вносят после полно с удаления воздуха за счет слабого тока азота раствор 2,90 г (0,022 моль) индоксила (3-окси-индола) в 40 мл абсолютного ДМФ, добавляют 9,74 мл абсолютного пиридина и охлаждают до -15С. Взаимодействие. Приливают раствор 1 к раствору 2 и перемешивают в отсутствие кислорода и влаги примерно в течение 5 ч при -15°С до тех пор, пока с помощью тонкослойной хроматографии нельзя более обнаружить индоксил. Для обработки реакционную смесь концентрируют в вакууме максимально при температуре бани 40-50°С. Остаток растворяют в 100 мл уксусного зфира и промывают последовательно дважды по 30 мл 1н. раствора лимонной кислоты, 20 мл воды, 50 мл 5%-ного раствора бикарбоната натрия и 25 мл воды. Уксуснозфирную фазу после высушивания над сульфатом натрия выпаривают в вакууме. 3 Полученный сьфой продукт очрщают с помощью колоночной хроматографии ia силикагеле смесью толуола с диок саном (9:1). После отгонки раствори тапя из собранных фракций в вакуум благодаря замешиванию остатка в эфи ре получают 1,А5 г (18,4%) 3-Н-/трлуол-4-сульфонил/-Ь-алакилокси/ индола, бесцветные кристаллы, т.пл. ЮЗ-С; oi : -56,6% с 1% (метано В качестве побочного продукта из других фракций указанного отделения с помощью колоночной хроматографии выделяют еще 0,89 г (11,3%) 1-/N-/трлуол-4 -сульфонил/-Ь-аланилокси/оксииндола-1-/К/толуол-4 -сульфонил/-Ь-аланилокси/-1-оксоиндолинаиз уксусного эфира: бесцветные кристаллы, т.пл. 187-188°C;oi д :41,7°, с 1% (даФ). Аналогично путем взаимодействия замещенных индоксильных соединений с соответствующими аминокислотами получают следующие субстраты, приче во всех случаях (кроме 7.23-7.27) в качестве побочных продуктов образуются указанные 1-замещенные 3-окс индолы: 1.13-/Н-/бензолоксикарбонил/-Ь-ала 1НИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы, т.пл. 123С; 49,0°,с 1% (метанол); 1.23-/Н-/бензш1оксикарбонил/-Ьаланилокси/-4-метил-индоп, бесцветные кристаллы, т.пл. 113°С; Лтч : 44,6°, с 1% (метанол : 1.33-/N-/бeнзилoкcикapбoнил/-Lаланилокси/-5-метил-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 143-144°С; . У ,2°. с 1% (метанол); 1.43-/N-. /бензилоксикарбонил/-Ьаланилокси/-6-метил-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 148°С; c : -49,0°, с 1% (метанол); 1.53-/N-/бeнзилoкcикapбoнил/-Lаланилокси/-7-метил-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. МбС; о : -51,2°, с 1% (метанол); 1.63-/N-/бeнзилoкcикapбoнил/-L- с(.д аланилокси/-4,7-диметилиндол,бесцве ные кристаллы, т.пл. 121°С; -46,3°, с 1% (метанол); 1.73-/М-/бензилоксикарбонил/-Ь fli аланш1окси/-4--хлор-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 142-143°С; IX jf : -61,4°, с 1% (метанол); 1.83-/Ы-/бензш1оксикарбонил/-Ьаланилокси/-5-бром-индол, бесцветны 954 кристаллы, т.пл. 138°С; : -28,0°, с 1% (метанол); 1.93-/N-/бeнзилoкcикapбoнил/-Lаланилокси/-6-хлор-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 170С; dC : -41,3°, с 1% (метанол); 1.103-/N-/тoлyoл-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-4-хлор-57бром-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 150152°С; с/4° : -31,0, с U (метанол); 1.113-/N-/тoлyoл-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-4,5,7-трихлориндол; 1.123-/К-/толуол-4-сульфонил/-Ьаланилокси/-4-хлор-5-бром-7-метилиндол; слабо окращенньге в бежевый цвет кристаллы, т.пл. 143-145С; ТХ: готовая пластина (Fertigplatte) силикагеля, элюирующее средство толуол:диоксан 2:1, индикация: УФ, NHj(ra3), Rf-значение 0,56. 1.133-/Ы-/Толуол-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/5-окси-индол;1.143-/N-бeнзилoкcикapбoншl/-L-aлaнилокси/5-метокси-индол;1.153-/Н-/толуол-4-сульфонил/-Ьаланилокси/-5-бензилокси-индол;1.163-/К-/толуол-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-4-карбокси-индол;1 Л 7 3-/N-/тoлyoл-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-4-бензилокси-карбонилиндол;1.183-/N-/тoлyoл-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-5-/карбоксиметокси-инол;1.193-/Ы-/толуол-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-5-/бенэилскси-карбонш1етокси/-индол;1.203-/К-/толуол-4 -сульфонил/-Ьаланилокси/-6-нитро-индол;1.213-/Н-/толуол-4-сульфонил/-Ьаланш1окси/-6-ацетиламино-индол;1.223-/М-/толуол-4-сульфонил/-Ьaлaнилoкcи/-бeнзo/g/-индoл;1.231-метил-3-/М-/бензилоксикарбонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 92°С; д. : -49,5°, с - 1% (метанол); 1.241-бензил-3-/К-/толуол-4 -сульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, Т.ГО1. 149-152°С; : -54,9% с 1% (ДМФ); 1.251-фенил-3-/Ы-/толуол-4 -сульфонил/-Ь-аланилокси/-индол;1.261-aцeтил-3-/N-/тoлyoл-4 -сульфонил/-Ъ-аланилокси/-индол;1.271-бeнзoил-3-/N/-/тoлyoл-4 -сульонил/-Ь-аланШ1окси/-индол, бесцветные кристаллы, т.гот. 155-156°С; t/ -54,7% с 1% /ДМФ);

1.283-/Ы-/бенз1 Алоксикарбонил/-глиЦИЛОКСИ/-ИНДОЛ бесцветные кристаллы, т.пл. 122-124С;

1.293-/Н-/.толуол-4 -сульфонил/-глицилокси/-индол, бесцветные кристаллы т.пл. 103-105С;

1.303-/Н-/толуол 2-сульфонил/-Ьаланилокси/-индол бесцветный аморфный порошок; oi : -62,5, с 1%

(метанол).

ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-диоксан 9:1, индикация: УФ, ), Rf значение 0,20.

1.313-/Н-/Толуол-3 -сульфонШ1/-Ьвланш1окси/-индол, бесцветные кристаллы; т.пл, 94°С; -54,9°,

с 1% (метанол);

1.323-/Н-/толуол-4 -сульфонил/-Паланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т,пл.98°С; ot : +53,1%

с 1% (метанол);

1.333-/Н-/бензилоксикарбонш1/-В, Lаланилокси/-индол, бесцветные кристалы, т.пл. 110-11ГС;

1.343-/Н-/бензилоксикарбонил/-Ьвалнлокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 73-75С; ot : -42,2% с 1% (метанол);

1.353-/Н-/бензилоксикарбонил/-Ълейцилокси/индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 64-65°С; о/ : -41,Г,

с 1 % (метанол);

1.363-/Н-/бензилоксикарбонил/-Ьизолейцилокси/-индол, бесцветный аморфный порошок; оС : -30,6, с 1% (метанол).

ТХ: готовая пластина силикагеля,

элюирующее средство толуол-диоксан 2:1, индикация: УФ, NHj(ra3), Rf значение 0,57.

1.373-/Ы-/Бензш10Ксикарбонил/ -ьфенилаланилокси/-индол желтоватые кристаллы, т.пл. tX: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-диоксан 9:1, индикация: УФ, NHj(ra3) Rf-значение 0,56

1.383-/Н-/толуол-4 -сульфонил/-Ьфенилапанилокси/-индол, бесцветные

. кристаллы, т.пл. 167-169°С; otj : -34,, с 1% (метанол);

1.393 /Ы-ацетил-Ь-тирозилокси/-ин;дол;

1.403-/Н бензоил-Ь-тирозилокси/-индол;

1.413-/К-/бензилоксикарбонил/-1ТИРОЗКЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветная аморная пена; 0/1° : -22,6°, с 1% (метанол) .

ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-диоксан 4:1, индикация: УФ, NH,(газ), Rf значение 0,27;

1.423-/Н-/Толуол-4-сульфонил/-Ьтирозш1окси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 171°С; об : -28,3°,

с 1% (метанол);

1.433-/Н-/толуол-4 -сульфонил/-0ацетил-Ь-тирозилокси/-индол, бесцвеные кристаллы, т.пл. 168-170°С; о/ -24, Г, с 1% (ДМФ);

1.443-/Н-/бензилоксикарбонил/-Ьаланил-Ъ-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 144°C;o : -17,3°, с 1% (метанол);

1.453-/К-/толуол-4 -сульфонш1/-Валанил-Ь-аланилокси/-индол, желтоватая аморфная пена; о/ : +5,8°, с 1% (метанол).

ТХ: готовая, пластина силикагеля элюирующее средство толуол-диоксан 4:1, индикация: УФ, МН,(газ), Rf значение 0,19.

1.463-/N-/Бензилоксикарбонил/-Ь аланил-Ь-аланил-Ь-аланилокси/-индол бесцветные кристаллы, т.пл. 156°С; oil : -39,5°, с 1% (метанол);

1.473-/N-/толуол-4 -сульфонил/-Валанил-В-аланил-Ь-аланилокси/-индолбесцветные кристаллы, т.пл. 216°С; с : +53,8°, с 1% (метанол);

1.483-/Н-/ацетил-1-аланилокси/-индол, бесцветная аморфная пена;о : -12,5, с 1% (метанол).

.

ТХ: готовая пластина силикагеля (элюирующее средство уксусный эфирдихлорметан 10:1, индикация: УФ, NHj(ra3), Rf - значение 0,33.

1.493-/Ы-Сукцинил-Ь-аланилокси/индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 142°С; -63,9°, с 1% (метанол) I

1.503-/К-бензоил-В, L-аланилокси/индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 17ГС;

1.513-/Н-фта,поил-Ь-аланилокси/-инд бесцветные кристаллы, т.пл. 58°С;

(У: : -26,3°, с 1% (метанол).

1.523-/К-/этоксикарбонил/-1-аланиЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы, т.пл. 96°С;оС ° : -68,9°, с 1% (йетанол). 1.533-/Н-/циклогексилоксикарбонил/Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 149°Сс : °: -60,4°, с 1% (метанол); 1.543-/N-/фeнилoкcикapбoнил/-L-aлaНИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы т.пл. 16ГС; : -96,0, с 1% (метанол); 1,55 3-/N-/4-метил-бензилоксикарбонил/-Ь-аланШ1окси/-индолбесцветные кристаллы, т.пл. 135С; -45,9 1% (метанол). 1.563-/Н-/4-нитро-.бензш1оксикарбонкл/-Ь-аланилокси/-индол, желтоватые кристаллы, т.пл. 160°С; oif 1 : -29,4°С с 1% (метанол). .,573-/Н-/бензилтиокарбонил/-Ь-алаНИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы т.пл. 122С; У:|°: -77,8°, с 1% (ме танол) ; 1.583-/К-метансульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, -54,0°, с 1 т.пл. 164-1б6С; 0 (метанол); 1.593-/Ы-/бензилсульфонш1/-Ь-алаНИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветное вязкое масло; d : -54,8°, с 1% (метанол) ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-уксусньй эфир 2:1, индикация: УФ, КН,(газ), Rf - значение 0,40. .,603-/N-БeнзoлcyльфoншI/-L-aлaниЛОКСИ/-ИНДОЛ, б,есцветное вязкое масло;в д-59,8°, с 1% (метанол). ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее Средство толуол--- уксусньй эфир 2:1, индикация, УФ, NHj(ra3 Rf - значение 0,48. 1.613-/N-/4 -Бром-бензилсульфонил/L-аланштокси/индол, желтоватый аморф ньй порошок, ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол диоксан 4:1, индикация: УФ, NH,,(ra3) Rf - значение 0,39, 1.623-/N-/4-Нитро-бензолсульфонил/Ь-аланштокси/-индол, бесцветные кристаллы, т,ш1, 136-137°С; :-35,9°, с 1% (метанол); .,633-/N-/4 -ацетиламино-бензолсульфонш1/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл, 1б2-163°С; -57,2, с - 1% (метанол)} 1.643-/N-/4 -н-бутил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т,пл, 105°С; d. : с 1% (метанол). 1,65 3-/N-/4 -трет-бутил-бензолсульфонил/-Ьталанш1ОКси/-иидол, бесцветные криаталлы, т.пл. .otfj : -43,3°, с 1%-(метанол); 1.663-/N-/4-н-октил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветьые кристаллы, т.пл, 57°С oi : -34,2°, с 1% (метанол); .,673-/N-/4 -окси-бензолсульфонил/Ь-аланилокси/-индол, вязкое слабо красноватое масло; ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-диоксан 1f1, индикация: УФ, Шз(газ) Rf - значение 0,62, 1.683-/N-/4 -Метокси-бензолсульфонш1/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл, 126-128°Cj -54,3°, с 1% (метанол); 1.693-/N-/4 -бензилокси-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бе щветные кристаллы, т.пл, 112°С; о : -40,3°, с 1% (метанол); 1.703-/Ы-/4-/2 окси-зтокси/-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индап1.713-/N-/4 -/3 -окси-5 -окси-нпентилокси/-бензолсульфонил/-1-алаНИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветное вязкое -36,4 , с 1% (метанол). масло; d В ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол - этилацетат 1:10, индикация: УФ, МН,(газ), Rf - значение 0,37. 1.72 3-/N-/4-/3, 6 -Диокси-н-гептилокси/-бензолсульфонил/-Ь-аланилОКСИ/-ИНДОЛ, слабо красноватое вязкое масло; ТХ: готовая пластина сидиоксан 4:1, индикация: УФ, NHjCras) Rf - значение 0,21, 1.73 3-/N-/4-/2 -Окси-этил/-бензолсульфонил/-Ь-аланш1окси/-индол, желт товатьй, аморфный порошок; -54,5, с 1% (метанол), ТХ: готовая пластина сипикагеля, элюирунщее средство толуол - этилацетат 1:2j индикация: УФ, ЫН,(гаэ), Rf - значение 0.26. 1,74 3-/N-4 -/2 -/4 -Нитро-бензилокси/ этил/-бензолсульфонил/-Ь-аланилоксииндол;1,75 3-/Н-/4-/2-хлор-этил/-бензолсульфонил/-Ь-аланш1окси/-индол, слао красноватая аморфная пена; 48,3°, с 1% (метанол), ТХ: готовая пластина силикагеля, люирующее средство: толуол - уксусый эфир 5:1; индикация: УФ, NH, (газ); f - значение 0,20. .76 3-/N-/4 -Циано-бензолсульфонил/-аланш1окси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл, 18ГС; -47,0 , с 1 % (ДМФ); 1.773-/N-/4-карбокси-бензолсульфонил/-Ь-аланипокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. : . -51,0°, с 1% (метанол). 1.783-/N-/4 -бензилокснкарбонил-. бензолсульфонилУ-Ъ-аланилокси/-индол бесцветные кристаллы, т.пл. 178°С; : -42,8°, с U (ацетон); t,79 3-/N-/4 -карбомоил-бензолсульфо нил/-1-аланилокси/-индол, бесцветны кристаллы, т.пл. 206°С; d : -58°, с 1% (ацетон), 1.803-/N-/4-/диметил-карбомоил/бензолсульфонил/-Ь-аланш1окси/индолбесцветнь1е кристаллы, т.пл. 170-172 -46,4% с 1% (ДМФ); 1.813-/Ы-метия-Н-/толуол-4 -сульфо нил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветны кристаллы, т.пл. 82°Cf d -42,2°, с 1% (метанол); 1.823-/N-/2 ,4, 6-триметил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 192194С; -63,8°, с 1% (метанол 1.833-/Ы-/бифенил-4-сульфонил(-Ьаланилокси)-индол, бесцветные крист лы, т.пл. 159°С; 42,0°, с 1% (метанол); 1.843-/Н-/нафталин-2 -сульфонил/-Ь аланилокси/-индол, слабо красноваты кристаллы, т.пл. 103-105°С; ТХ: гот вая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол - диоксан 4:1, инди кадаш: УФ, МНз(газ), Rf-значение 0, 1.853-/N-/4 -Ацетиламино-нафталин1 -сульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 129132С; -63.2% с 1% (метанол) . 1.863-/N-/5 -диметиламино-нафталин 1 -сульфонил/-Ь-аланилокси-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 170°С; d : -30,7°, с 1% (метанол); 1.873-/N-/бензилоксикарбонил/-.аланилокси/-бензо-/в/ тиофен, бесцветное, вязкое масло; о( °: -42,2° с 1% (метанол). ТХ: готовая пластина силикагеля элюирующее средство дихлорметан, ин дикация: УФ, NaOH/K,Fe(CN)t; Rf значение 0,13. 1.883-/N-/Toлyoл-4-сульфонил/-Ьаланнлокси/-5-бензил-индол;1.893 /N-/тoлyoл-4 -сульфонил/--,аланилокси/-5-фенш1-индол. Пример 2. 3-/N-/TpeT.-6yилоксикарбонил/-1.--аланилокси/-индол, Для взаимоденстния по карбодиимидому способу 3,23 г (0,017 моль), -трет, -бутилоксикарбонил-1,-аланина 2,27 г (0,017 моль) индоксила расторяют в 100 мл смеси абсолютного иоксана-дихлорметана 1:1. После доавки раствора 3,87 г (0,019 моль) дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) в 20 мл абсолютного диоксана перемешивают в течение 68° ч при комнатной температуре в отсутствие влаги и кислорода. Выделившуюся N,N-дициклогексилмоченину отсасывают, растворитель отгоняют в вакууме и остаток растворяют примерно в 100 мл этилацетата. После отсасывания следующего количеств. вьщелившейся N,Nдициклогексилмочевины прозрачный этилацетатный раствор последовательно пpo п Iвaют по два раза 30 мл 1 н. лимонной кислоты, 20 мл воды, 50 мл 5-10%-ного раствора бикарбоната натрия и 25 мл воды. После высушивания над сульфатом натрия этилацетатную фазу концентрируют в вакууме. Аморфный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью смеси толуол-диоксан (9:1). После концентрирования собранных фракций в вакууме и перекристаллизации остатка из смеси уксусного эфира и эфира (1:10) получают 1,04 г (20%) 3-/М/-трет-бутилоксикарбонил/Ь-аланилокси/-индола: бесцветные кристаллы, т.пл. 158°С; о : -65 0°, с 1% (метанол). В качестве побочного продукта при этом взаимодействии также образуется замещенный в 1-положение 3-оксииндол (см. пример 7), Аналогично получают путем взаимодействия соответственно замещенных индоксильных соединений с соответствующими аминокислотами следующие субстраты, причем также здесь во всех случаях в качестье побочных продуктов образуются соответствущие, замещенные в 1-положение 3-окси-индолы; 2.1 3-/Н-формил-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 121122°С; -2.5°, с 1% (метанол); 2,2 3-/N-/4 -бензилоксикарбонил/-Ьаланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т,пл. 92°С; -42,9, с 1% (метанол); 2.33-/К-/Н-/пиперидино/-оксикарбонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 10Д°С;о р : -24,7°, с 1% (метанол); 2.43-/Н-/тиенил-/2 -метоксикарбвнил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 134°С,а;, ; -55,7°, с 1% (метанол); 2.53-/К-/хинолин-8-сульфонил/-1, -аланилокси/-индол аморфный, слабо красноватый порошок, ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее сред ство толуол - диоксан 4;1, индика-. ция: УФ, ННз(газ), Rf - значение 0,2 2.63-/N-/Дифeнилкapбaмoил/-L-aлaни ЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы, т.пл. 188-190°С; : +22,2°, с 1 (пиридин). Пример 3. 3-/Н-/фурил-2метоксикарбонш1/-Ъ-аланилокси/-индолДля взаимодействия по способу активного сложного эфира 4,26 г (0,02 моль) К-/фурил-2/-метоксикарбонил/-Ь-аланина и 5,4 г (0,04 моль N-окси-бензотриазола растворяют в 50 мл абсолютного тетрагидрофурана (ТГФ), охлаждают до 0°С и смешивают с раствором 4,4 г (0,022 моль) дицик логексилкарбодиимида (ДЦК) в 10 мл абсолютного ТГФ. Для образования активного сложного эфира реакционную смесь перемешивают 1,5 ч при 0°С, за тем 2 ч при комнатной температуре. Затем в отсутствие влаги и кислорода добавляют 2,66 г (0,02 моль) индокси ла и 2,77 г (0,04 моль) абсолютного триэтиламина. Смесь перемешивают в течение 18 ч при комнатной температу ре. Образовавшуюся N,N -дицикломочевину отсасывают, растворитель отгоня ют в вакууме и остаток обрабатывают по примеру 7. Аморфный сьфой продукт очищают с помощью колоночной хроматографии на колонке с силикагелем с помощью смеси толуол - уксусный эфир (5:1). После концентрирования соответствующих собранных фракций и перекристаллизации из смеси уксусного эфира с петролейным эфиром (1:1 получают 3,0 г (45,7%) 3-/К-/фурип/2/-метоксикарбонкл/-Ь-аланилокси/индола бесцветные кристаллы, т.пл, d : -51,9°, с 1% (метанол) Аналогично взаимодействием соответственно замещенных аминокислот или пептидов с соответствуюп ими ичдо ксильными соединениями получают следующие вещества: 3.13-/N-/тoлyoл-4-сульфонил-Ь-ваЛИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветнне кристаллы, т.пл. 125-127С; с р : -24,5°, с 1% (метанол); 3.23-/К-/4-диметиламино-бензолсульфонил/-Ь-аланш1окси/-индол; аморфный слабо красноватый, порошок; ТХ: готовая пластина силикягеля, элюирукщее средство толуол-диоксан 3:1, индикация: УФ, ЫНз(газ), Rf - значение 0,25; 3.33-/N-/4-ацетил-бензолсульфонил/Ь-аланилокси/-индол;3.43-/N/4 -метоксикарбонил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 140-141С; о р : -40,3, с 1 (метанол); 3.53-/N-/4 -карбоксиметил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, аморфная бесцветная пена;о : с 1% (метанол), ТХ: готовая пластина снликагеля, элюирующее средство изопропанол-н-бутилацетат-вода 5:3:2, индикация: УФ, КН,(газ), Rf - значение 0,68. 3.63-/N-/4-карбоксиметокси-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол, аморфная бесцветная пека,о1 : -47,7, с 1% (метанол), ТХ: готовая пластина силикагеля, злюирующее средство толуол-диоксан-ледяная уксусная кислота 6:2:1, индикация: УФ, NH, (.газ), Rf - значение 0,27; 3.73-/N-/4-карбоксиметиламино-бен3олсульфонил/-L-аланилокси/-ИНДол, бесцветные кристаллы, т.пл. 151153°С (разложение), : -71,5, с 1% (метанол); 3.83-/N-/4 -бензилоксикарбонил-метиламино/-бензолсульфонил/-Ь-алаНИЛОКСИ/-ИНДОЛ, бесцветные кристаллы, т.пл. 110-113°С; otp° : -60,0, с 1% (метанол); 3.93-/N-/4 -фтор-бензолсульфонил/Ь-аланилокси/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 94-95 С; о(§° : -48,5°, с 1% (метанол); 3.103-/N-/4 -фторсульфонил-бензолсульфонил/-Ь-аланилокси/-индол;3.113-/N-/4 -сульфамоил-бензолсульонш1/-Ь-аланилокси/-индол;3.123-/Н-ацетил-К-/толуол-4 -сульонил/-Ь-аланилокси/-индол, бесцветый аморфный порошок; d : -10,6 (метанол). ТХ: готовая пластина силикагеля, люирующее средство толуол-диоксана :1, индикация: УФ, NH, (газ), IRf начение 0,17. , 3.13 3-/Н-/Пиридин 3 -сульфонил/-1аланиловки/-индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 155-157°С; -55, Г с 1% (метанол); 3.14 3-/N-/5, 5-днметил-З-оксоциклогексен- ,-ил/-Ь-аланилокси/индол, бесцветные кристаллы, т.пл. 154°С;о : -272,2% с 1% (метанол) ; 3.15 3-/Н-/ди-/4-нитробензил/-фосфорил/-Ь-аланилокси/-индол;.3.16 3-/Н-/ди-/4-бромбензил/-фосфорил/-Ь-аланилокси/-индол;3.17 3-/Н/толуол-4-сульфонил/-ЬаланШ10кси/-5-метокси-индол;бесцветное вязкое масло;о, -46,8, с 1% (метанол). ТХ: готовая пластина силикагеля, элюирующее средство толуол-этилацета 2:1, индикация: УФ, КН,(газ), Rf значение 0,45. Пример 4. 3-/N-/3, б-Диокса-н-гептилокси-карбонил/-Ь-аланилокси/-индол. Для взаимодействия по способу см шанного ангидрида 3,52 г (0,015 мол -N-/3,6-диокса-н-гептилокси-карбонил/-1-аланина растворяют в 35 мл абсолютного тетрагидрофурана (ТГФ). После добавки 2,1 мл (0,015 моль) триэтиламина смесь охлаждают до -15С, затем для получения смешанно го ангидрида смешивают с 1,43 мл (0,015 моль) этилхлорформиата. Посл перемешивания в течение 1 ч при в отсутствие кислорода и влаг добавляют охлажденный до -15С раст вор 2,00 (0,015 моль) индоксила в 20 мл абсолютного ТГФ. Смесь переме шивают следующие 2 ч при (-15С) (-20°С) и затем оставляют на ночь в холодильнике. Отсасывают образовавшийся триэтиламиногидрохлорид, растворитель удаляют в вакууме и ос таток обрабатывают по примеру 7. Аморфный сырой продукт очищают с по мощью колоночной хроматографии на силикагеле сначала смесью .хлористый метилен- метанол (95:5), затем смесью толуол - металатилкетон (1:2 После обработки собранных фракций активным углем и удаления раствори. теля получают 0,51 г (9,5%) 3-N-(3 6 -диокса-н-гептилокси-карбонил/-1,аланш1окси/-индола, бесцветного вяз кого масла; -40°, с 1% (мета нол); ТХ: готовая пластина силикаге ля, элюирующее средство толуол-мети этилкетон 1:2, индикация: УФ, Nil, (газ), Rf - значение 0,54. Аналогично взаимодействием соответственно замещенных аминокислот с соответствующими индоксильными соединениями получают следующие вещества:4.13-/N-2-нитро-бензолсульфенил/Ь-аланилокси/-индол желтые кристаллы, т.пл. 133-134°С; : -116,0, с 1% (метанол); 4.23-/N- / 1 -метш1-2 -бензоил-винил/Ъ-аланилокси/-индол, слабо красноватые кристаллы, т.пл. 130-133°С; ТХ: готовая пластина силикагеляу элюиру- . ющее средство толуол-диоксан 4:1, индикация: УФ, NHj(ra3), Rf - значение 0,45. Соединения фсрмулы I служат для получения диагностичных средств для обнаружения протеолитических ферментов, в особенности в жидкостях организма. Эти средства позволяют быстро и просто проводить диагностику. Данные о свойствах полученных соединений. В качестве хромогенов индоксильныё или тиоиндоксильные сложные эфиры аминокислот и пептидов общей формулы I используются в концентрациях 10 - 1 моль/л, предпочтительно 10моль/л пропиточного раствора, наносимой массы или исследуемой жидкости. Другой составной частью диагностического средства для обнаружения протеолитических ферментов, в особенности протеаз лейкоцитов, является пригодная буферная система, например фосфатный, боратный, барбитуратный, трис-/оксиметил/-аминометановый -трис-/2-амино-2-метил-пропан- диол-1,3-овый/ /амедиоловый/ или аминокислотньш буфер, причем рН и объем нужно выбирать так, чтобы в измеряемом растворе или на тест-полосах устанавливалось рН 6-10, предпочтительно 7-9. При приготовлении диагностического средства для обнаружения протеолитических ферментов, в особенности лейкоцитных протеаз.в жидкостях организма, можно дополнительно применять окислитель, чтобы превращать первично образующиеся при ферментативной реакции индоксильные или тиоиндоксильные соединения в окрашенные индигоили тиоиндиго-вещества. Эти окислители, например гексацианоферрат-(111) калия, бромат калия, хромат калия, феназин-метосульфат или соли тетра олия, применяются в кокаентрациях 1 моль/л, предпочтительно 10 - 10 моль/л раствора для -пропитки, наносимой массы или исследуемой жидкости. Составной частью диагностическог средства для обнаружения протеолити ческих ферментов, в особенности лей коцитных протеаз, может быть смачиватель, так как при этом достигается сокращение времени реакций и луч шая окраска. Предпочтительно исполь зуются неионогенные, однако также амфотерные, катионо- или анионоакти ные смачиватели в концентрациях 0,05 - 2%, предпочтительно 0,1-1%. Для приготовления предлагаемого диагностического средства, например поглощающий носитель, предпочтитель но фильтровальную бумагу, целлюлозу или прочее из синтетических волокон пропитывают растворами обычно приме няемымх для приготовления тест-поло реактивов (субстрат, буфер, при известных условиях смачиватель, окислитель и т.д.) в легколетучих растворителях, например вода, метанол, этанол или ацетон. Это целесообразно осуществлять в две раздельные стадии: сначала пропитывают водным раствором, который содержит буфер и другие водорастворимые добавки, затем раствором субстрата протеазы общей формулы I. В специальных -случая можно также применять обратную посл довательность пропитки. Готовую тест-бумагу можно применять как таковую или приклеивать на держатели (an briffen) или предпочтительно запечатывать между пластмассами и мелкоячеистыми сетками. Для приготовления покрытых пленко тест-полос все реактивы вносят в раствор или дисперсию пленкообразующего вещества, например поливинилового эфира или полиамида, и гомогенно смешивают. Смесь наносят тонким слоем на пластмассовый носитель и высушивают. Предлагаемые покрытые пленкой тест-полосы после высушивания разрезают и их можно применять как таковые или известным ,образом их наклеивают на держатели или, например, запечатывают между пластмассами и мелкоячеистыми сетками. 3 Диагностическое средство для обнаружения протеолитических ферментов, в особенности лейкоцитньгх протеаз, в форме порошкообразных смесей или таблеток реактивов можно Hsioтовлять так, что указанные составные части теста смешивают с обычными галеновыми добавками и гранулируют. Добавками такого рода являются, например, углеводы, например моно-, олиго- или полисахариды, или сахарные спирты, например маннит, сорбит или ксилит, или другие растворимые инертные соединения, как полнэтиленгликоли или поливинилпирролидон. Порошкообразные смеси или реактивные таблетки обладают конечным весом примерно 50-200 мгу предпочтительно 50-80 мг. Для приготовления лиофилизатов с общим весом примерно 5-20 мг, предпочтительно примерно-10 мг, высушивают вымораживанием раствор, который содержит наряду со всеми необходимыми для теста реактивами обычные образователи каркаса, например поливинилпирролидон, и при известных условиях другие наполнители, например маннит, сорбит или ксилит. Диагностическое средство в форме раствора содержит предпочтительно все необходимые для теста реактивы. В качестве растворителей принимают во внимание воду или смесь воды с водорастворимыми органическими растворителями, например метанол, этанол, ацетон или диметилформамид. Для устойчивости (при хранении) можно распределять необходимые для теста реактивы на два или более растворов, которые объединяют вместе лишь при непосредственном исследовании. Таким образом, полученные диагьостические средства позволяют обнаруживать наличие протеолитических ферментов, в особенности лейкоцитных протеаз. Образовавшуюся окраску можно оценивать визуально или фотоетрически, например ремиссионнофотометрически или в кювете. Так как ктивность лейкоцитных протеаз на летку можно рассматривать по суеству как постоянную величину, то а Интенсивности образования окраси можно определять концентрацию ейкоцитов в исследуемой жидкости рганизма. При этом с помощью пред17-115659.0

лягаемого диагностического средства Ж-Ткоцитных протеаз также после лиохватьшаются интактные и лиэироваи- зиса лейкоцитов полностью сохраняетные лейкоциты, так как активность ся.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДОКСИЛЬ НЫХ ИЛИ ТИОИНДОКСИЛЬНЫХ СЛОЖНЫХ ЭФИ РОВ АМИНОКИСЛОТ или ПЕПТИДОВ общей формулы I 0-А-В где . - одинаковые или различны и означают водород, гал ид, низпгую . алкильную, а коксильную, арильную, ар кильную, аралкоксильнуго, гидроксильную, карбоксил ную, карбокси (низший) ал ксильную, аралкоксикарбонильную, аралкоксикарбоНШ1 (низший) алкоксипьную, нитро- или низшую ациламиногруппу, или два соседних заместителя означают бензоаннелирован- ный остаток; X - сера или незамещенная иминогруппа или замещенная алкильным, аралкильньм, арильным или ацильным остатком, иминогруп- па; А - моноаминокарбоновая кислота или аланинсодержащий ди- или три-пептидный остаток; В - N-защитная группа в пептидной части (остатке), чающийся тем, что ие общей формулы И имеют указанные значения, ют взаимодействию с галоидани или смешанными ангидридами, вированными сложными эфирами бщей формулы III Н - О - А - В В имеют указанные значения.