Способ получения препарата глюкоамилазы Советский патент 1982 года по МПК C12N9/96 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПгеПАРАТА ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

Изобретение относится к микробнологичес кой промышленности, а именно к производству ферментных препаратов. Известен Способ получения высоленного препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вымораживанием и последующее высаливание фермента сульфатом аммония 1. Однако этот способ включает энергоемкий и малопроизводительный процесс вымораживания (на 1 ккал холода затрачивается энергия значительно больше, чем на 1 ккал тепла), требующий специального уникального оборудования. Наиболее близким к предлагаемому является способ получения препарата глюкоамилазы предусматривающий концентрирование культу ральной жидкости вакуум-выпариванием н по следующее высаливание фермента сульфатом аммония или спиртом. Активность глюкоал илазы, полученной после 12-15 ч культивирова ния продуцента - Efxkjmycopsis fibuliger, составляет 8120 ед (21 : Недостатком известного способа является значительная потеря активности фермента в процессе вакуум-концентрнрования. Цель изобретения - снижение потерь активности, а также получение более очищенного препарата. Поставленная цель достигается тем, что в способе получения препарата глюкоамнлазы, предусматриваютцем концентрирование культуральнЫ1 жидкости вакуум-вьп1ар1гоанйем и последующее высаливание фермента сульфатом аммония, процесс высаливания осуществляют в две стадии, причем первую проводят в процессе вакуум-коицентрнровання путем введения в фильтрат культуральной жидкости сульфата аммония в количестве 5-15% от. иасьацения, после чего определяют выпавший осадок и проводят стадию введением остального количества сульфата аммония до 60-65% от насышения. Сущность способа в том, что дрожжеподобный микроортаюсзм Endomycopsis species 20-9 выраоотают глу&шным способом, после чего культурапьную жидкость отделяют от биомассы. 39 В фильтрат культуральной жидкости вносят 5-159Ь аг насыщения сульфатааммония, раствор концентрируют методом вакуум-вьтаривакия при повышенной температуре. Концентрат культуральной жидкости после выпаривания, содержащий 25-30% от насыщения сульфата аммония, охлаждают до 5- и вносят дополнительно, если необходимо сульфат аммония до 30% от насыщения . йБщерживатет 1-5 ч и отделяют осадок, содержащий балластные вещества и остатки гликойшггрансферазы, К центрифугату добавляют сульфат аммония до 60% от насыщения , полученный осадок отделяют центрифугированием высушивают в вакуум- сушильном шкафу и на распылительной сушилке. Пример. ДрожжеподобньШ организм Endomycopsls species 20-9 выращивают в 20 ферментере, содержащем 10 л оптимальной питательной среды следующего состава, %: кукурузный жстракт 3,0; кукурузная мука 1,5; олеиновая кислота 0,2; рН среды 4,0 Время стерилизации 1 ч при . Длительность культивирования 32-36 ч при величине аэрации 1 лОг/ЛЧ и перемешивая 180 об/мин. По окончании выращивания культуральную жидкость с глюкоамилазной ак тивно тью 50 ед/мл отделяли от биомассы сепарированием. В фильтрат культуральной жидкости внося сульфат аммония в количестве 15% от насыщения при постоянном перемешивании и смес подают на вакуум-вьшариую установку. Температура выпаривания , степень концентрирования 2. Получают 4,5 концентрата с гл крамилазиой активностью 38,3 ед/мл. Выход 95,7% с содержанием сульфата аммония 30% от насьпцення. Полученный концентрат охлаж ют до 10-15°С, выдерживают 1-2 ч и выпавцшй осадок отделяют сепарированием. В фильтрат 4,1 л с глюкоамилазной активностью 37,1 ед/мл вносят при непрерывном перемешивании необходимое количество сульфата аммония до 60% от насыщения, смесь вьщерживают 5-10 ч. Вьшавший осадок отделяли сепарированием, высушивают в вакуум-сушильном щкафу. Выход препарата 32 г с глюкоамилазной активностью 2878 ед/мл. Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить активность глюкоамилазы и получить более очищенный препарат. Формула изобретения Способ получения препарата глюкоамилазы, предусматривающий концентрирование культуральной жидкости вакуум-вьшариванием и последующее высаливание фермента сульфатом аммония, Гт личающийся; тем, что, с цепью снижения потерь активиости, а также получения более очищенного препарата, hpoцесс высаливания осуществляют в две стадии, причем первую проводят в процессе вакуумконцентрирования путем введения в фильтрат культуральиой жидкости сульфата аммония в количестве 5-15% от насьЕцения, после чего отделяют выпавший осадок и проводят вторую стадию введение остального количества сульфата аммония до 60-65% от иасьпцения. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Авторское свидетельство СССР N 402541, кл. С 12 D 13/10, 1973. 2.Авторское свидетельство СССР № 340690, кл. С 12 D 13/10, 1970 (прототип).