Способ получения очищенных ферментных препаратов глюкоамилазы Советский патент 1980 года по МПК A61K38/46 C12N9/26 

pa ультрафильтраци,й без корректировки рН и без стерильной фильтрации с последующей сушкой ферментов на распылительной сушилке со стабилизаторами в виде крахл{ала, продуктов его гидролиза, желатина, полнгликолов и т.п. в до3HpOBkax по весу сухих вапеств в раство ре и досушивание в псевдок1тящем слое.

Недостатками известного способа являются низкий выход и низкое качество продукта.

Глюкоамилазу получают известным способом с большими потерями, и препарат может быть загрязнен спорами.

Применяемые в известномспособе

стабилизаторы недостаточно эффективны, так как снижают выход глюкоамйлазы и стабильность препарата при хранении. Кроме того, дозировка стабилизаторов фермеитатив1ЮЙ активности по содержани сухих веществ в растворе не является достаточно надежным способом для сохранения максимальной активности ферментов.

Целью изобретния является устранение недостатков известного способа, а именно повышение выхода продукта и получение ферментных препаратов высокого качества с заданной степенью очистки.

Согласно изобретению предлагается способ получения очищенных ферментных препаратов глюкоамйлазы с высоким выходом и качеством целевого продукта посредством стерильной фильтрации фе1 ментного раствора последующей ультрафильтрадией при значениях рН 4,0-4,2 и 5,О-6,5 соответственно. В процессе последующей сушки в качестве стабилизатора ферментативной активности применяют смесь углекислого магния и бензойной кислоты в соотношении 5:1 в количестве 15-45 мг на 1ООО единиц активности фермента глюкоамйлазы.

С целью увеличения выхода продукта, интенсификации процесса и повышения качества ферметного препарата по предлагаемому способу предлагается перед ультрафильтрацией проводить осветление и стерильную фильтрацию ферментных

растворов через мембраны, задерживающие бактериальные клетки, при это перед стерильной фильтрацией для ускорения процесса, повышения выхода продукта и уменьшения потерь рН культуральной жидкости необходимо устанавливать в пределах 4,0-4,2, а перед ультрафильтрацией скорректировать рН до 5,О-6,5. В качестве стабилизаторов глюкоамйлазы в процессе сушки необходимо использовать, углокислый магн11й и бензойную кислоту в соотношении 5:1. Дозировку стабилизаторов необходимо осуществлять не по отношению к объему ферментного раствора или весу сухих веществ, содержащихся в растворе (как это принято обычно), а по отношению к единицам активности глюкоамйлазы, содержащейся в улътраконцентрате.

Пример I. Культуральную жидкость после выращивания плесневого гриба Asp. hiCfe Т-33, освобожденную от мицелия на фильтр-прессе ФПАКМ, имеющую концентрацию сухих веществ 7%, глюкоамилазную активность 42 ед/м и значение рН 3,0, концентриру ют методом ультрафильтрации, а засем ультраконцентрат высушивают на распылительной сушилке при температуре суашльного агента 115 С на входе и на выходе. Кратность концентрирования десятикратная, скорость ультрафильтра- ции 5 л/м ч., глюкоамилазная активнос ультраконцентрата 412 ед/мл.

Полученный ферментный препарат имеет глюкоамилазную активность .. 3560 ед/г и обсемененность 2,61О . Общие потери ферментативной .активност составлякэт 23,4%.

П р и м е р 2. Ферментный препарат глюкоамйлазы получают, как в примере 1, но с целью получения препарата, очищенного от посторонней микрофлоры для удовлетворер)ия требованиям пищевой промышленности, вводят стадию стерильной фильтрации перед ультрафильтрацией культуральной жидкости. Стерильную фильтрацию проводят при исходном значении рН 3,0. Скорость стерильной фильтрации 4О л/м-ч. В очищенном от микроорганизмов фильтрате культуральной жидкости рН до 5,0, а затем проводят ультрафильтрацпю. Скорость ультрафильтрации ДО л/м-ч. Кратность конце 1трирования десятикратная. Глюкоамилазная активность ультраконцентрата 4О8 ед/мл. Потери ферментативной активности при стерильной фильтрации и ультрафильтрации 3%. В ультраконцентрат перед сушкой распылением добавляют стабилизирующую смесь углекислого магния и бензойной кислоты в соотношении 5:1 из расчета 15 мг на 1000 единиц активности глюкоамипазь.. Температура сушильного агента 115 С на входе и 65 С на выходе.

57

11олучо11ПЫ1 формонтш-гй препарат имеет глюко.эмилазную активность 3985 ед/г и обсеме11енпость - следы. Общие потери фepмeнтQTVIвnoй активности 12,7%.

П р и м е р 3. Ферментный препарат получают, как в примере 2, но рН в культуральной жидкости перед стерильной фильтрацией повышают до 4,0. Скорость стерильной фильтрации бО л/м . ч. В фильтрате культуральной жидкости после стерильной фильтрации повышают рН до 6i 5 , а затем проводят ультрафильтра- цию. Скорость ультрафильтрации 10 л/МЧ. При кратности концентрирования в 10 ра активность глюкоамилазы в ультраконцентрате составляет 408 ед/мл. Потери глюкоамилазной активности при стерильной фильтр-ации, ультрафильтрации составляют 3%. Перед сушкой распылением в ультраконцентрат добавляют для стабилизации активности глюкоамилазы смесь углекислого магния и бензойной кислоты в соотношении .5:1 из расчета 45 мг на 1ООО единиц активности. Режим сушки, как в примере 1.

Полученный ферментный препарат имеет глюкоамилазную активность 40О ед/г и обсемененность - следы. Общей потери ферментат1-шной активности 12,4%.

П р и м е р 4. Ферментный препарат глюкоамилазы получают, как в примере З.В фильтрате культуральной жидкости перед стирильной фильтрацией доводят. рН до 4,2, а перед ультрафильтрацией до 5,5. Параметры процессов стерильной фильтрации и ультрафильтрации те же, что в примере 3. В ультраконцентра перед сушкой, распылением добавляют стабилизатор-смесь углекислого магния и бензойной кислоты при соотношении 5:1 в количестве.ЗО.мг на 1ОО единиц активност глюкоамилазы. Режим сушки как в примере

451.6

Полученный ферментный преппрнг имеет глюкоамилазную активность 4ОО ед/г и обсемененность - слепы. Общие потери ферментативной окгивно5 сти 12,4%.

Формула изобретения

Способ получения очищенных фермент0 чьгх препаратов глюкоамилазы путем ультрафильтрации ферментного раствора, добавления в концентрированный ферментный раствор стабилизаторов ферментативной активности и последующей его

5 сушки, отличающи йся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта, ферментный раствор предварительно подвергают стерильной фильтрации, а затем ультра-

0 фильтрации при значениях рН 4,0-4,2 и 5,0-6,5 соответственно, а в качестве стабилизаторов ферментативной активности применяют смесь углекислого магния и бензойной кислоты в соотношении

5 511 в количестве 15-45 мг на 1ООО единиц активности фермента гпюкоамилазы.

. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Авторское свидетельство СССР Хэ 340690, кл. С 07 О- 7/02, 1971.

2.Авторское свидетельство СССР 5 № 495347, кл. С О7 Gr 7/О2, 1975.

3.Патент Франции Kv 2Ш669, кл. С 07 G- 7/02, опублик. 1972 (прототип) .

4.Авторское свидетельство СССР N 343991, кл. С О7 CJ 7/О2, 1971,

5.Авторское свидетельство СССР № 535345, кл. С 07Q- 7/О2, 1975.

6.Авторское свидетельство СССР № 480721, кл. С 07 7/О2, 1974.