(54) СПОСОБ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ ЭРИТРОЦИТОВ
1
Изобретение относится к иммунохимическим исследованиям.
Известен способ сенсибилизации эритроцитов путем инкубации их в среде, содержащей производное холестерина 1.
Однако известный способ не обеспечивает высокой стабильности конечного продукта.
Цель изобретения - повышение стабильности конечного продукта.
Эта цель достигается тем, что инкубацию эритроцитов ведут при О-10°, рН 8- 8,5 забуференным трис-буфером изоосмотическом физиологическом растворе, а в качестве ее производного холестерина используют хлорформиат холестерина в концентрации М0 510 ммоль на 1,8-10 эритроцитов.
Пример 1. К суспензии 1 мл 100%-ных эритроцитов барана (1,8-10 клеток) в 40 мл изоосматического физиологического раствора, забуференного трис-буфером до рН 8- 8,5 (0.02 М трис, О,15 М хлористый натрий, рН 8-8,5) добавляют при О-10°С раствор 2 мг (1-10 ммоль) хлорформиата холестерина в 0,03 мл диоксана. Смесь инкубируют в течение 18 ч при 4°С. Затем полученные сенсибилизированные ковалентным связыванием с холестерином эритроциты барана отмывают центрофугированием от непрореагировавших низкомолекулярных продуктов реакции физиологическим раствором до получения прозрачного супернатанта и .хра5 нят в виде 2,5%-ной суспензии в растворе, содержащем на 1 объем нормальной декомплементированной кроличьей сыворотки 74 объема раствора, приготовленного из расчета 100 ммоль глюкозы, 80 ммоль хлористого калия и 20 ммоль двузамещенного фосфата натрия на 1 л дистиллированной воды, причем рН этого раствора доводят до рН 8- 8,5 добавлением 1 М раствора соляной кислоты. Устойчивость сенсибилизированных холестерином эритроцитов определяют визуально по появлению помутнения и окраски в надосадочной жидкости, в которой хранят эритроциты. Окрашивание надосадочной жидкости наблюдают только на 7-8 день с момента их приготовления.
20 Пример 2. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8-10°эритроцитов проводят с 5-10 ммоль хлорформиата холестерина. Окрашивание надосадоч-
ной жидкости не наблюдают в течение 7 дней с момента их получения.
Предлагаемый способ позволяет получить стабильный конечный продукт, который используют для определения титров антител к холестерину.
Формула изобретения
Способ сенсибилизации эритроцитов путем инкубации их в среде, содержащей производные холестерина, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности конечного продукта, инкубацию эритроцитов ведут при температуре t О-10°, рН 8-8,5 забуференном трис-буфером изоосматическом физиологическом растворе, а в качестве производного холестерина используют хлорформиат, холестерина в концентрации 1-10 -5-10 ммоля на 1,8-10 эритроцитов.
Источники информации, принятые во йнимание при экспертизе 1. Ковалев И. Е. , Шайдаров В. В. Рубцова Е. Р. и Полевая О П. «Фармакология и токсикология, № 3, с. 331-333, 1975.
