Способ определения наличия афлотоксинов в и G в продуктах растительного сырья Советский патент 1982 года по МПК G01N33/10 

(5А) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АФЛОТОКСИНОВ В И G В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

I , .

Изобретение относится к анализу микроколичеств органических соединений и может быть использовано для определения токсичных и канцерогенных веществ в объектах окружающей среды, в частности в пищевых продуктах и кормах для сельскохозяйственных животных „

Установлено, что в различных продуктах зерновых, бобовых, масличных и др. могут содержаться продуцируемые плесневыми грибами афлотоксины, обладающие выраженной канцерогеннрй активностью и высокой токсичностью„ Установлено, что в пищевых продуктах допустима предельная концентрация афлотоксинов в пищевых продуктах.

Наиболее близким к .предлагаемому по решаемой задаче и достигаемому Э(1)фекту является способ определения наличия афлотоксинов В и G в продукт х растительного сырья, BKJWчающий проведение хромоТографии экстракта из продуктов растительного

сырья на хроматогра(})ической пластинке, подтверждение наличия афлотоксинов на этой пластинке путем выявления флуоресцирующих пятен в исследуемом образце и сравнение их со стандартным образцом. При этом выявления флуоресцирующих пятен ведут с помощью трифторуксусной кислоты 111 Недостатком в известном способе является то, что при его применении получаются недостаточно точные результаты, из-за присутствия загрязненных частиц на пластинке, часть которых также как афлотоксины обладают флуоресцирующей способностью. При использовании трифторуксусной кислоты образуются соединения флуоресцирующие в той же области, что и продукты, образующиеся из афлотоксинов В и G, что делает подтверждение в этом случае недостоверным, на хроматограммах получаются широкие поло сы фона и размытые пятна Gij,, что резко затрудняет определение, нижняя часть хроматографической пластинки сильно загрязнена примесными веществами, что мешает обнаружению пятен образующихся Gr, лежащих в этой области. Цель изобретения - повышение точности определения. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения наличия афлотоксинов в продуктах растительного сырья,включающему прове дение хроматографии экстракта из продуктов растительного сырья на хромато графической пластинке, подтверждения наличия афлотоксинов на этой пластинке путем выделения флуоресцирующих пятен в исследуемом образце и сравнение их со стандартным образцом, после проведения хроматографии экстракта продуктов растительного сырья отсекают загрязненную примесями часть пластины ниже уровня пятен афлотоксинов G, а выявление флуоресцирующих пятен в исследуемом образце ведут продуктами бромирования. При этом в качестве продуктов бромирования может быть использован раствор брома в диоксане. Установлено, что при использовании для бромирования афлотоксинов В, и G раствора брома в диоксане в результате реакции, протекающей как в растворе, так и непосредственно на хроматографической пластинке, образуются только продукты присоединения брома по двойной связи терминального фуранового кольца, например;

Строение дибромидов афлотоксинов В и G,,, обладающих интенсивной флуоресцендией, установлено масс-спектрометрически.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Экстракт из продуктов растительного сырья подвергают очистке хроматографией и концентрируют его 0,050,J мл. На хроматографическую пластинку наносят по 2-20 мкл два пятна очищенного концентрата и два пятна смеси стандартов В и G и хроматографируют, подсушивают и рассматривают в УФ при ЗбО нм. Отмечают флуоресцирующие пятна стандартов и соответствующие пятна концентрата. Обрезают часть пластинки на 10-12 мм. ниже пятен афлотоксинов. Затем по одному отмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10-15 мкл 5-10%-ного раство эа брома в диоксане, выдерживают 1-3 мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той же системе. Совпадение Rf флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так и R соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.

Пример 1. Экстракт афлотоксинов из продукта подвергают очистке колоночной хроматографией и концентрируют до 0,05-0,1 мл. На пластинку силуфол наносят по 10 мкл два пятна очищенного концентрата и два пятна

смеси стандартов В и G и хроматографируют в системе хлороформ-бензолацетон 9:1:1, подсушивают и рассматривают в УФ при ЗбО нм. Отмечают флуоресцирующие пятна стандартов и соответствующие пятна концентрата. Обрезают часть пластинки на 10 мм ниже пятен афлотоксинов. Затем по одному отмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10 мкл 5 -ного

раствора брома в диоксане, выдерживают 1 мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той же системе. Совпадение R флуоресцирующих ; пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так Вл соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.

Пример 2. Экстракт афлотоксинов из продукта подвергают предварительной очистке, например обработкой водным раствором сульфата аммония и гексаном, водный слой