Способ определения виснадина Советский патент 1985 года по МПК G01N21/64 

00

о

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения виснадина, и может быть применено для качественного и количественного анализа этого соединения в различном материале для фармацевтических исследований.

Виснадин представляет собой производное фуранохромона и содержится в плодах растения аммизубная.

Целью изобретения является повышение чувствительности и селективности определения и сокращения времени определения.

Пример 1. Качественное определение виснадина.

К 1-2 мг виснадина прибавляют 8- 10 мл дистиллированной воды, 2 капли водного насыщенного раствора брома и встряхивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром Уфе-3 или Уфе-6 наблюдают яркую фиолетовую флуоресценцию.

Пример 2. Качественное определение виснадина в растительном сырье.

1-2 г измельченного сырья экстрагируют 100 мл смеси этилового спирта и хлороформа (3:7). Для выделения виснадина применяют хроматографию на тонком закрепленном слое силикагеля марки LS 5/40 ц. гипса. Пластинки активируют при 110°С в течение 30 мин. 0,1 мй экстракта наносят на пластину и хроматографируют в системе растворителей гексан - этиловый эфир-этилацетат (12:12:1). После этого пластину высушивают и опрыскивают водным насыщенным раствором брома. В УФ-свете наблюдают флуоресцирующее ярко-фиолетовое пятно, что свидетельствует о присутствии виснадина.

Пример 3. Количественное определение виснадина в препарате «Ависан.

Таблетки «Ависан содержат по 0,05 г суммы фурокумаринов и хромонов, выделенных из аммизубной.

Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток «Ависана переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 20 мл 96%-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин и добавляют дистиллированную воду до метки. Энергично встряхивают, растворяя препарат, 5 - 10 мин. Данный раствор «Ависана переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по 10 мл. Аликвотную часть хлороформной вытяжки (10 мл) упаривают досуха на водяной бане и остаток растворяют в 1 мл этилового спирта (96%) и 8,9 мл воды. К полученному раствору добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с содержанием виснадина 10 мкг/мл.

Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Результаты определения виснадина в «Ависане представлены в табл. 1.

Таблица 1

с

1 таблетка препарата содержит 0,00041 г виснадина, т.е около 8%. При данной методике определения другие соединения в растворе с бромом не флуоресцируют, что проверялось опытным путем. Полнота экстрагирования (93-95%) проверялась . хроматографированием оставшегося после экстрагирования хлороформом раствора препарата.

Пример 4. Количественное определение виснадина в препарате «Фловерин.

Таблетки «Фловерин содержат по 0,05 г виснадина и дигидросамидина.

Точную навеску (0,350 г) мелкоизмельченных таблеток «Фловерина переносят в мерную колбу на 100 мл, прибавляют 20 мл 96%-ного этилового спирта, встряхивают в течение 5 мин, добавляют дистиллированной воды до метки. Энергично встряхивают 5-10 мин, растворяя препарат. Данный раствор препарата переносят в делительную воронку и экстрагируют 100 мл хлороформа, приливая его порциями по 10 мл. Аликвотную часть хлороформной вытяжки (25 мл) упаривают досуха на водя-, ной бане и остаток растворяют в 0,2 мл гексана. Это количество наносят микропипеткой на хроматографическую пластину с тонким закрепленным слоем силикагеля LS 5/40/ + 13% гипса. Хроматографируют в системе растворителей гексан- изоамиловый спирт (2:1) Rf виснадина равно 0,58. Зону виснадина, выявленную по величине Rf или по стандартному образцу виснадина, количественно переносят в пробирку и элюируют 9,9 мл дистиллированной воды. Полнота десврбции составляет 98-99%. К раствору, отделенному от осадка после элюирования, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома. Флуориметрируют исследуемый раствор по отнощению к стандартному с содержанием

10 мкг/мл виснадина. Содержание виснадина и образце определяют по калибровочному графику. Таблетки «Фловерина содержат около 48% виснадина.

Пример 5. Количественное определение виснадина в аммизубной.

5 г мелкоизмельченных плодов растения экстрагируют 100 мл смеси 96%-ного этилового спирта и хлороформа (3:7). 0,1 мл этого раствора наносят на хроматограмму из силикагеля марки LS 5/40 i+ + 13% гипса, активированную 30 мин при 110°С. Пластину с нанесенной пробой высушивают и помещают в камеру с системой растворителей гексан-диэтиловый эфир- этилацетат (12:12:1) и хроматографируют восходящим методом. После высущивания

хроматограммы в течение 5 мин на воздухе в ультрафиолетовом свете устанавливают локализацию зоны виснадина н эту зону с ,38, отмеченную по стандарту виснадина, количественно переносят в пробирку, прибавляют 9,9 мл дистиллированной воды, элюируют 5-10 мин и, отделив раствор от осадка силикагеля, добавляют 0,1 мл водного насыщенного раствора брома. Флуориметрируют полученный раствор по отнощению к стандартному с содержанием виснадина 10 мкг/мл. Содержание виснадина определяют по калибровочному графику. Плоды растения содержат 0,008 г виснадина, т.е. около 0,2 %. Подобной реакции не дают близкие по структуре соединения: кумарин, ангелицин, псорален, ксантотоксол, изопимпинелин, ксантотоксин и другие.

Таблица 2

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИСНАДИНА путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом с последующим измерением интенсивности флуоресценции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и селективности определения и сокраи1,ения времени определения, в качестве химического реагента используют водный насыщенный раствор брома и измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора.

Бледно-голубой

Я рко - фиолетовый

Бледно-синий, быстро затухающий

В табл. 2 представлены данные о флуоресценции виснадина и достоверных образцов кумаринов, наблюдаемые при использовании описываемого способа.

Интенсивность флуоресценции виснадина после взаимодействия его с бромом не изменяется в течение 2 ч. Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуБледно-голубой

Ярко-фиолетовый

Бледно-синий

оресценции и концентрацией виснадина лежит в пределах 0,5-10 мкг/мл.

Анализ возможно проводить при достаточно широком диапазоне рН как в нейтральной, так и кислой среде.

Чувствительность известного способа составляет 30 мкг/мл, описываемого -

0,5 мкг/мл, что в 60 раз выше известного.

Использование описываемого способа экономично и требует меньших затрат времени (см. табл. 3).

Таблица 3

Подготовка раствора5

Хроматографирование

Обработка хроматограммы

Добавление реактивов

Продолжение табл. 3

Наблюдение

Из приведенных данных видно, что описываемый способ обладает более высокой чувствительностью, селективностью и экспрессностью, чем известный и позволяет качественно и количественно определять виснадин в субстанции, лекарственных препаратах и растительном сырье. Обладая простотой и экономичностью, предлагаемый способ применим в контрольноаналитических лабораториях и заводских лабораториях фармацевтических предприятий для контроля качества препарата и производства его, а также в фармакогностичёских исследованиях для анализа лекарственных растений, содержаших висна- дин, и поиска новых растений - источников этого соединения.