Способ определения эстрона или этинилэстрадиола Советский патент 1982 года по МПК G01N31/00 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу ко личествённого определения стероидных гормоноз эстрона и этинилзстрадяола, и может быть использовано при анализе эстроге нных препаратов, которые широко используются в медицинской практике.

Известен способ определения эстрона или этинилэстрадиола, который состоит в том, что в бутыль с порошкообразным гидрофобным адсорбентом вводят эстрогенсодержащую жидкость, после адсорбции эстрогена из бутыли удаляют жидкость, промывают адсорбент, после чего вводят жидкость, растворяющую эстроген, полученный раствор удаляют из бутыли, добавляют к нему сложный или простой эфир гидрохинона и с помощью серной кислоты хроматографируют l.

Недостатком известного способа является относительно невысокая точность и большая продолжительность определения.

. Известен способ определения эстрогенов путем экстрагирования анализируемой прое5ы спиртом, получения при отгонке растворителя сухого остатка и взаимодействия его с раствором солянокислого гидрохинона и п-нитрофенола с образованием окрашенного раствора, КОТО1Ж1Й анализируют колориметрическим методом f2j.

Недостатком известного способа является сложность определения за счет необходимости предварительного получения окрашенного производного гормон а.

Цель изобретения - упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно .способу определения эстрона или этинилэстр диола анализируемую пробу растворяют в кумоле, добавляют азобисизобутиронитрил через полученную, смесь пропускают кислород, термостатируют ее при 6065°С и измеряют скорость поглощения кислородаj при этой же температуре.

Па чертеже показан график зависимости поглощенного кислорода от времени в реакции инициированного окисления кумола в присутствии ингибитора.

В основе способа количественного определения стероидных гсзрмонов лежит кинетический метод определения 30 их концентрации, осутесггвляег лй пу

тем проведения реакции инициированного окисления кумола кислородом.

Введение ингибитора в окислительную систему приводит к резкому снй жению скорости реакции окисления, что обусловлено участием молекул ин гибитора в стадии обрыва цепи. После полного израсходования ингибитора скорость реакции окисления значительно возрастает и принимает характерно для нее значение. Время действия ийгибитора (период индикации) пропорционально его начальной концентрации

Стероидные ГСОМОНЫ ( и этинилэстрадиол) являются ингибиторами реакции инициированного окисления ку мола кислородом.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят реакцио нную смесь, содержащую (1,0-1,3) Ю мсль/л анализйруемого препарата, и определенное количество инициатора азобисизобутиронитрила (для эстрона 18-25 мг, для этиленэстрадиола, 12-15 цг) в кумоле с таким расчетом, чтобы общий объем ее составлял 5 мл. Сосуд с реакционной смесью продувают кислородом, присоединяют к газометрической устано-вке, термостатируют, .перемешивают и измеряют поглощение кислоро,да во времени. Газометрическая установка состоит из измерительной бюретки, соединенной с помощью резиновой трубки через нижнее отверстие с уравнительной склянкой и через верхнее отверстие - с реакционным сосу1Дом. Бюретка заключена в стеклянную термостатируемую () рубашку.

На полученной .кинематической кривой поглощения кислорода определяют периодом индикации по точке пересечения двух прямых, связанных соотнесением tgc v 2tgc/2.- Первая прямая является прямой, на которую выхо,дит кинематическая кривая после израсходования ингибитора, а вторая есть касательная к кривой в точке, для которой скорость реакции в два раза меньше скорости после израсходо вания ингибитора. По найденному значению периода индикации рассчитывают содержание гормона в препарате по формуле

r-VV /A-V-V tr.W,-.M.5V ., -- v,..v,.a 2.у,.а f

где т - период индикации за вычетом эффективного времени лрогрева реакционного сосуда (2 мин), с;

W- скорость инициирования, соответствующая взятой в опыт навеске азобисизобутиронитрила

моль/л с (WJ 6 .27 . Ю моль/л

соответствует 5,05 мг инициатора при 60°С и ,3в мг . при );,

f - коэффициент ингибирования, равный числу обрываемых цепей одной ингибирующей группой (для рассматриваекых гормонов f равен 2); п - число ингибирующих групп в

молекуле ингибитора (для рассматриваемых эстрогенных гормонов п равно 1); М - молекулярная масса гормона; V - общий объем реакционной смес

равный 5 мл;

V( - объем исходного раствора прпарата, мл,

у - объем раствора препарата, i взятый на реакцию, мл, а - навеска препарата, мг. Пример. Количественное определение эстрона.

В сухой реакционный сосуд через стеклянную воронку помещают- 17,4 мг азобисизобутиронитрила 0,1 мл предварительно приготовленного раствора препарата (14,2 мг в 10 мл ацетона марки ОС4) и 4,9 мл кумола. Сосуд с реакционной смесью продувают кислородом, присоединяют к газометрической установке, термостатируют при 60 с и спустя 3-5 мин снимают кинетическую кривую поглощения кислоро.да при постоянном перемешивании. По кине.тической кривой определяют с учетом эффективного времени прогрева реакционной смеси период индукции, равный 16,0 iviHH. Содержание эстрона рассчитывают по формуле ()..

Пример 2. Количественное определение этинилэстрадиола.

В сухой реакционный сосуд помещаю 11,9 мг азобисизобутиронитрила, 0,1 мл раствора препарата (19,3 мг в 10 мл ацетона) и 4,9 мл кумола. Дальнейшее определение ведут по методике, описанной в примере 1 при 65°С. Период индикации 14,0 мин.

Содержание этинилэстрадиола.101 % Ошибка определения указанных гормональннх препаратов составляет 1-2 %

Формула изобретения Способ определения эстрона или этинилэстрадиола, отличаюnj и и с я тем, что, с целью упрощения способа, анализируемую пробу растворяют в кумоле и добавляют азобисизобутиронитрил, через полученную смесь пропускают кислород, термостатруют ее при 60-65 С и измеряют скорость поглощения кислорода при этой ж,е температуре.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент Японии 54-35118, кл. 113Е6, опублик. 1979.

2.Патент ФРГ 2049526 ,кл. G 01 N 33/1 опублик. 1971 (прототип).

u(lf