Способ получения глицеральдегидфосфатдегидрогеназы из скелетной мышцы млекопитающих Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для попу-,, чения глицеральдегидфосфатдёпидрогеназы из скелетной МЬЙУЦЫ млекопитающих, f. Известен способ получения глицеральдегидфосфатдегидрогеназы из скелетной мышцы млекопитающих путем ее гомогенизации с последующей экстракцией белков раствором фосфатнокислого калия, постепенного повышения насыщенности экстракта сульфатом aMf«) ния и отделения балластных белков lj Однако известный способ не позволяет получить фермент в высокоочйщенном виде. Цель изобретения - повышение чист тоты фермента и выделение его в кристаллическом виде. Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа получения глицеральдегидфоофатдегидрогеназы из скелетной мышцы млекопиющих путем ее гомогенизации с последующей экстракцией белков раствором фосфорнокислого калия, постепенного повышения насыщенности экстракта сульфатом аммония и отделения балластных белков, насыщение экстракта доводят до 0,68 и выдерживают его при комнатной температре до получения кристаллов фермента. Способ осуществляется следующим образом. Мышечную ткань при посмертной биопсии рсвобождают от жировой, соединительной ткани, гомогенизируют, взвешивают, добавляют 0,03 М раствор К2НРйц. в,соотношении 1:2, экстрагируют на холод в течение 60 мин при периодическом перемешивании, Затем отжимают, плотный остаток мышщ отбрасывают. К экстракту добавляют мелкодис персный порошок сульфата аммония из расчета 39i6 г на 100 мл экстракта. Сульфат аммония добавляют небольшими порциями при тщательном перемеши