Способ получения орторомбической монолитиевой соли @ -никотинамидадениндинуклеотид-дигидрата Советский патент 1982 года по МПК C07H21/00 C12N9/00 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОРТОРОМБИЧЕСКОЙ МОНОЛИТИЕВОЙ СОЛИ -НИКОТИНАМИДАДЕНИНДИНУКЛЕОТИДДИГИДРАТА

1

ИзоЬретение относится к способу полумения нового соединения - орто ромбической монолитиевой соли -никотинамидадениидинуклеотиддигидрата

,) с пространственной группой g Р 2 / 2-f с размерами клетки

0 10,,ООЗА ;Ъг15,, ;

С 17,,осад и углами 0 /Ь Т 90 которое может быть использовано в ферментативном анализе при JQ определении ферментативных активностей и концентраций субстрата для клинической диагностики.

Известно получение кристаллическо |в го никотинамидадениндинуклеотида в виде свободной кислоты flj.

Однако данная кислота очень гигроскопична и быстро расплывается на воздухе, что вызывает определенные 20 трудности при использовании ее в ферментативном анализе при определении активности и концентрации субстрата для клинической диагностики 2.26

Известен также способ получения кристаллических солей и водных растворов путем осаждения целевого про,дукта органическим растворителем 3j«

Цель изобретения - получение нового кристаллического соединения, расширяющего арсенал средства воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения орторомбической монолитиевой соли Р -никотинамидадениндинуклеотиддигидрата с пространственной группой Р 2/f 2 2f „с размерами клетки а 10,,ООЗА ; Ъ 15,839±0,00«А ; С 17,821

0,004А и углами о11- / 90° к разбавленному.водному раствору/ -никотинамидадениндинуклеотида 8 форме свободной кислоты прибавляют гидроокись лития или катионообменных в литиевой форме до рН 3-7, предпочтительно З,7,0 или к водному раствору аморфной монолитиевой солиJJ-никотинамидздениндинуклеоУида прибавляют гидроокись лития до рН 3-7.

предпотительно до рН 3,,0, к полуценному водному раствору при , предпочтительно при комнатной температуре , прибавляют смешивающийся с водой органический растворитель до s начала помутнения раствора и кристаллизуют целевой продукт при 4-30с. В качестве смешиваемого с водой органического растворителя в предлагаемом способе может применяться О , в основном любой растворитель, обладающий этими свойствами. Однако предпочтение отдается низким спиртам, кетонам, нитрилам и циклическим эфирам, в частности метанолу, этанолу, 15 Н-пропанолу, изопропанолу, ацетону, ацетонитрилу или диоксану.

.Пример 1. 1 г соли лития (полученной пропусканием раствора свободной кислоты через 20 C gv-50 в виде лития, с последующей лиофилизацией растворяют в 2 мл воды, при комнатной температуре при перемешивании каплями добавляют 1,2 мл ацетона до начала помутнения. При 25 20-25 С происходит кристаллизация. Выкристаллизованный продукт спустя 30 ч отсасывают, дважды промывают небольшим количеством ацетона с водой

(1:2) и просушивают в вакууме над зо . Р2.05 Выход составляет 900 мг (90 использования лиофилизата).

-

Пример 2. 1г лиофилизированной соли лития р -НАД растворяют в 2 мл воды и при комнатной температуре при перемешивании каплями добавляют 3,6 мл метанола до начала помутнения. аналогично примеру 1. После сушки получают 900 мг { использования) кристаллизованной .соли лития.

Пример 3- 1 г Jb -НАД в виде лиофилизированной свободной кислоты растворяют в 0,75 мл НлО и при перемешивании путем накапыванин 1,3 мл 1-М-гидроокиси лития доводят рН до . Затем добавляют 2 мл метанола и оставляют л/30 ч при 20-25°С. После обработки, аналогичный примеру 1, получают 900 мг (901 использования) крис ° таллизованной соли лития р -НАД.

Пример t. 1г лиофизированной соли лития (Ь -НАД растворяют в 2 мл воды и аналогично примеру 1 добавляют 0,8 мл изопропанола. После 55 отсасывания, промывания и сушки получают 800 мг (80% использования; кристаллизованной соли лития.

Пример 5. 0,5 мг лиофилизированной соли лития /3-НАД растворяю в 1 мл воды и аналогично примеру 1 добавляют 0,85 мл диоксана. Выход кристаллизации составляет 70 от использованного лиофилизата.

Пример 6. 0,5г лиофилизированной соли лития Р-НАД растворяют в 1 мл воды и аналогично примеру 1 медленно добавляют 0, мл ацетонитрила. Кристаллизационную соль лития получают с выходом 80 относительно исполь.зованного лиофилизата.

Пример 7. 0,5 г лиофилизированной соли лития р-НАД растворяют в 1 мл воды и оставляют при комнатной температуре. Спустя су начинается осаждение кристаллов. Для полной кристаллизации оставляют еще на 3- сут при комнатной температуре Выход составляет kO% относительно использования лиофилизата.

Анализ орторомбической соли монолития

Суммарная формула

. 2КгО

Молярный вес 705,

НАД (ферментативный

с АДХ), %- 93,5

Вода,5,5

Литий,1,17

Т.пл., С203-203,5

Элементный анализ:

Найдено,С 35,28;Н 3,99; N 13,59

. Р 8,73.

Вычислено,%: С 35,76; Н 4,28;

N 13.90; Р 8,78. Кристаллографические данные: Система кристаллов Орторомбическая90°

Угол о1 , р , Пространственная

Р2х,, группа о Размеры клетки,А

а 10,,003 Ъ 15,,00+ с 17,821 ±0, Плотность кристаллов, г/см1,65 Кристалл состоит из единицы формулы в ассиметрическом единстве.

Пример 8. (дополнительный для верхнего предельного знамения рН) 1 г Р -НАД лиофилизованной свободной кислоты растворяются в 0,8 мл и при перемешивании с помощью ,k мл 1 н. гидроокиси лития регулируют рН до. 7- После этого добавляют 2,2 мл метанола и раствор оставляют при 20-25 С на 2k-kB ч. 5 После переработки, аналогичной примеру 1, получают 900 мг (90% вво да) кристаллизованной fr- НАД соли лития. Пример 9 дополнительный. 1 г р -НАД( лиофилизованной свобод ной кислоты растворяют в 1 мл HjO при комнатной температуре и при помощи О, .мл 1 н. гидроокиси лития при перемешивании регулируют рН до 3,3- Затем добавляют 1 мл метано ла и смесь оставляют для кристаллизации при 20-25°С в течение дн. После переработки, аналогичной примеру 1 .получают 200 мг (20 ввода кристаллизованной Р- -НАД соли лития Пример 10 дополнительный. 1 г лиофилизованной /J -НАД соли лития растворяют в 2 мл Н„О (величина рН составляет 3,7) и при охлаждении до смешивают с 2 мл метанола. Осажденный приблизительно после 30 ч отстаивания при 20-25 С кристаллизат перерабатывают аналогично примеру 1. Получают 900 мг (90 ввода) кристаллизованной fi-НАД соли лития. Пример 11.дополнительный. 1 г лиофилизованной Jb -НАД соли лития растворяют в Z мл Н-О С величина рН составляет 3,7) , раствор нагревают доч-50 С и в него добавляют при перемешивании 2 мл метанола. Оставляют смесь на 2«-30 ч для кристаллизации при 20-25С и затем перерабатывают аналогично примеру 1 Получают 850 мг (85 ввода) криста .лизованной соли лития. 2 Формула изобретения Способ получения орторомбической монолитиевой соли | -никотинамидадениндинуклеотиддигидрата с пространственной группой Р2 f 2 - S размерами клетки а« 10,073tO,003A; 1 15.839±0,OOW ; С 17,821 f O.OOjA и углами с/. ft 30, отличающийся тем, что к разбавленному водному раствору р-никотинамидадениндинуклеотида в форме свободной кислоты прибавляют гидроокись лития или катионообменник в литиевой форме до рН 3-7, предпочтительно 3,7-,О или к водному раствору аморфной монолитиевой соли р-никотинамидадениндинуклеотида прибавляют гидроокись лития до рН 3-7, предпочтительно 3,7-,О, к полученному водному раствору при 1050 0, предпочгителвнЪ при комнатной температуре, прибавляют смешивающийся с водой органический растворитель до начала помутнения раствсгра и кристаллизуют целевой продукт при . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Winer A.D. Кристаллизация никотинаминадениндинуклеотида.J.Biol. Chem, 239 (Ю) 3598, 196. 2.Dalziel К.Очистка . никотинамидадениндинуклеотида и кинетичес кие эффекты нуклеотидных поимесей.J.Biol.Chem., 238, 1538 {19бЗ). 3.Патент США № 370065, кл. 260-21-1,5, опублик. 1972.