Способ получения аденозин-5-трифосфата Советский патент 1982 года по МПК C07H19/20 A61K7/00 A61K31/7076 C12P19/32 

1

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения аденозин-5-трифосфата (АТФ), который находит широкое применение в биохимии, косметике и медицине.

Известен способ получения АТФ, , ключаюпшйся в ферментативном фосфоршшровании аденозшш в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, подкисления до рН 4,5-4,8 в сорбции аденозин-5фосфатов на скпьноосновной ионообменной смоле с последующим эяюировапием аденозин-5 монофосфета (АМФ) и аденсйзам-5-дифосфата (АДФ) О,О2 н. раствором хлористого натрия в 0,О1 н. раст воре соляной кислоты, в десорбдин АТФ 0,5 н, раствором хлористого натршГв 0,02 н. растворе соляной кислоты и осаждения целевого продукта этиловым спиртом 1 .

Недостатком известного способа получения АТФ является высокий расход

исходного , так как образуюпшеся при очистке разбавленные элюаты АМФ и АДФ не используются и направляются в производственные отходы.

Целью изобретения является утилизация отходов производства.

Цель достигается тем, что Согласно способу получения АТФ, заключающемуся в фермента-итном фосфорилировании

,(j аденогяна в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных : дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлораастого, в подкисяении до рН 4,5-4,8 в сорбцзш аденозин-5Цюсфатов на сильноосновной ионообменной смоле

15 с последующим элюированием АМФ и АДФ О,О2 н. раствором хлористого натрия в 0,01 н. растворе соляной кислоты в десорбции АТФ 0,5 н. раствором

20 хлористого натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты, в сх аждении целевого продукта этиловым спиртом, подвергакгг хроматографическому концентрированию элюаты, содержащие АМФ и АДФ, на сзильноосновной ионообменной смоле до кошгентрапии 2-3%, в качестве элю- ентаИсхяользуют О, 14-0,16 н. раствор хэторишхэго калия и 0,04-0,06 н. раствор хлористого Тмапшя в 0,05-0,1 н растворе соляной клслоты и котщент)ат вводят в среду фосфошгрования 1.как иоточник аденозина,.ионов калия и мапшя Пример. Берут 25 г аденозина в 1 л демЕнерализовашюй воды. К раствору добавляют 108 г КаНРС4 х KL2 , 25,2 г KH,j,Pq., 1,8 г КСБ. 50 г сахарозы, 1,8 г Щрб 6 , 1,3 л тотных дролсжей, 37,5 мл тсотуола, Реаюшя прогекает 2-4 ч при рН 6,2-7,0 л 37±1°С. По окончаюш, реакшш фосг1юрил.прова1шя подюислпют до рН 4,5-4,8, охлажд.ают до 4С, от(|лшьтровывают дрожновой шламм, и раствор аденозинфосфатов наносят на колонку с сильноосновной анионообмешгой смолой, После сорбшш колошсу промывают во дои, эпюируют фрагаптЕо АМФ н АДФ 0,02 нГ раствором NaCf в 0,01 н. HC десорбируют фращшо АТФ 0,5 н, раствором NaCe в 0,02 н. НС2. Из фраиши АТФ выделяют 30 г нродзгкта - аденози 5-трнфосфат шстотой 99%. 9 л эшоата, содержащего смесь А/МФ и АДФ, нейтрализуют раствором NaCH до рН 6,8-7,5 разбавляют paBiaiM ко личеством воды и пропускают через ко- лошсу, содержащую 60 мл скльноосновной ашюнообмешюй смолы АРА-5П (в СГ форме). После сорбшш колонку тгром вают 300 мл воды, затем сорбируташсиеся АМФ н АДФ элзоируют раствором 0,14 н,КСЕЧ 0,04 н. в 0,05 растворе соляной кислоты. Первые 18Ом элюй а отбрасьта бт, последующие 220мл содерлсат основное количество смеси аданоатшфосфатов. Получают 220 мл раствора, содерлса шего 5 г .АМФ н ЛДФ, 2,3 г КСЕ, 1,8 н. McjCBr.. К полученному раствору добавляют деминерализованную воду до 1 п, 2О г аденоаина, 108 г Na(2HPO4 Л2%О, 25,2 г , 5О г сахашаы. 1,3 г пивных дрожжей, 37,5 мл толуола и ведут фосфоршшрование как ранее. Проводят очистку аденоа(гтфосфатов на колонке с анионообмешюй смолой как описано выше. Выход 32 г аденоаин-б -трифосфа та (92%). Чистота 97 %. П р и м е р 2.. Готовят среду для проведения фосфорилирования, состоящую из воды, 25 г аденозина, 108 г NarjHP04.12H9p, 25,2 г КНаРО4, 1,8 г КСе, 1,8 г , 50 г сахарозы, 1,3 л пивных дрожжей, 37,5 кт тояуола и ведут фосфорилироваяие по примеру 1. Состав аденозинфосфатовпосле фосфорйлмрования, %: АТФ 78, ЛаФ17, АМФ 2, Аденозин 3. Проводят очистку аденоаинфосфатов на колонке с авсионос меннрй. смолой. АТФ въоделяют из элюата и перекристаллизовьгоают динатриевую соль аденозин5Ьгрифосфата. Выход 30 г. Чистота 99%. 9 л элюата, содержащего смесь АМФ и АДФ, нейтрализуют до рН 7,5, разбав,Ййот равным объемом воды и сорбитэуют аденозинфосфаты на колонке с 50 мл aimofflTTa АРА-5П. Колонку промывают 300 млВОДЫ и десорб-ируют смесь АМФ и АДФ 0,16 н. раствором КСЕ и 0,06н. раствором (2 в 0,1 н. НСР. Первые 150 мл эшоата отбрасывают, последующие 160 мл основное количество аденоз шфосфатов. Получают 1вО мл раствора, содержащего. 5 г АМФ и АДФ, 1,9 г КСР, 1,9 г ,6Ee. К полученному раствору добавляют деминерализованную воду до 1 л, 20 г аденоз1ша, 108 г Ha,jiHPO4vl2H,O, 25,2 г , 50 г сахарозы, 1,3 г пиз1Ш1х дрожжей, 37,5, мл толуола и ведут фосфорилирование как ранее. Состав аденоз1шфосфатов после фосфорилирования, %: АТФ 84, АДФ 10, АМФ 3 Аденозин 3, Проводят очистку аденозннфосфатов Ш1. колонке с а1Л1ОНОобменной смолой по примеру 1. Выход 33 г динатриевой соли АТФ. Чисто1 а 96%. ормула изобретения Способ получЕ1Шя аденоззян-б-трифосфата путем ферментативного фосфорилироватшя аденозина в присутствии неорганических фосфатов, углеводов, пивных дрожжей, толуола, калия хлористого и магния хлористого, подкисления до рН 4,5-4,8, сорбции аденозин-5-фосфатов на сильноосновной анионообменной смое с последующим элшированием аденозин-5-монофосфата и аденозян-5-дифоофата 0,02 н. раствором хлористого натрия в 0,01 и. растворе соляной кислоты, десорбции аденозян-5Ьгрифосфата 0,5 н, раствором хлористохх) натрия в 0,02 н. растворе соляной кислоты и осаждения целевого продукта этиловым спиртом, отличающийся тем, гго, с

56413646

Цепью утаиизащш отходов проязюдства,растворе соляной квсяоты я копценгрегг

элюаты, содержаоше аденозин-5-моно-вводят р среду фосфоршярованЕя как

фосфат и аденоашь-5-двфосфат, подверг ь«источинк аденозвва, ионов калия Я мат

ктг хрвматографическому .концентрированиюния. Ва сзльнорснрвной ионообменной смоле sИсточники Информахши,

йо концентрации2-3 %, в качестве элю-принятые во внимание при экспертизе акта используют О,14-О,16 и. раствора1. Авторское свидетельство СССР

хлористого калия и О,О4-О,О6 и. 722920, кл. С 07 Н 19/16,

вор хлористого магния в 0,05-0,1О и,18.O4.78 (прототип).