Способ выявления белков Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине , а именно к способам аналитической биохимии,для обнаружения белков в полиакриламидных гелях и npiH анализу белков.

.Известен способ выявления белков путем электрофоретического разделения их в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием красителем Cll.

Однако известный способ требует длительного процесса окрашивания белковых зон в полиакриламидных гелях (ППАГ), длительного процесса отмывания избытка красителя с ПЛАГ, длительного процесса отмываниягелей ведет к вымыванию минорных фракций белков, что снижает качество анализа белков, многократной смены растворителя и в связи с этим большой расход уксусной кислоты и сложного удаления фона красителя, что затрудняет денситометрирование белков.

Цель изобретения - ускорение способа.

.Цель достигается тем, что при осуществлении способа выявления белков путем электрофоретического разделения их в iiojiiiaKpHJiaMHnHOM геле с последующим окрашиванием красителем, в качестве кра.ит.пя используют 1-(5-нитро-2-тиазолилазо)-2-нафтол-3,6-дисульфокислоту.

Способ реализуется следующим образом.

Белки выявляют с помощью электрофоретического разделения их в полиакриламидном геле, после чего проводят окрашивание красителем, при этом в качестве красителя применяют 1-(510-нитро-2-тиазолилазо)-2-нафтогт -3, б-дисульфокислоту

,J-i50a

(1)

15

нОзЗ

20

пример . Электрофорез белков .(алибумина, рибонуклеазы, гистона) в подшамидных гелях проводили .по методу Панима и Чолкли в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм, а также 25 в блоках ПААГ размером (1 150«150) . После электрофореза гели окрашивали 0,2%-ным раствором 1-(5-нитро-2-тиазолилазо)-2-нафтол-3,6-дисульфокислоты. в смеси метанол-вода-уксусная

30 кислота (5:5:1). Параллельно для

сравнения окрашивались гели 0,2%-ными растворами амидо черного 10 Б и кумасси голубого R-25.0. Применение красителя для обнаружения белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10 . После 6 мин окргииивания уже четко видны окрашенные белковые зоны в блоке ПААГ, окрашиваемом красителем, без отмывания избытка красителя с геля. Предложенный способ позволяет (Сократить время выявления белков до 6 мин, в то время как при использовании известного способа требуется 30-60 мин и 15 ч для отмывания фона красителя, предложенный способ исключает пр оцесс отмывания, снижает

расход растворителя и повьпиает производительность.

Формула изобретения

Способ выявления белков путем электрофоретического разделения их в полиакриламидном геле с последующимокрашиванием красителем, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, в качестве красителя используют 1(-5-нитро-2-тиазолилазо)-2-нафтол-З,б-дисульфокислоту.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Маурер Г. Диск-электрофорез. М., Мир, 1971, с. 90.