Ди-натриевая соль 2-(1,2,4-триазолил-3-азо)-1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты в качестве реагента для обнаружения белков при электрофорезе в полиакриламидном геле Советский патент 1982 года по МПК C07D249/14 G01N33/50 

Ниже приводятся конкретные пример получения и использования динатриево соли 2-(1,2, -триазолил-3-азо)-1,8-д оксинафталин-3,6-дисульфокислоты в качестве реагента для обнаружения бе ков при электрофорезе в полиакрилами ном геле. Пример. 1,68 г (о, 02 моль) З-амино-1,2,4-триазола в 16 мл ледяной уксусной кислоты приливают к 1,16 г 0,02 моль) нитрата натрия в 7 мл концентрированной серной кислот при температуре от О до 5°С. Через 5 мин к смеси Диазотированного 3-ами но-1,2,4-триазола приливают 7,28 г (0,02 моль) хромотроповой кислоты пр быстром перемешивании и охлаждении. Выпадает краситель темно-красного цвета. Получают 5,08 г динатриевой соли 2-(1,2,4-триазолил-З-азо- -1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты. Краситель перекристаллизовывают на 75 уксусной кислоть. Выход 51,7. НайденЬД: С 28,97; Н 2,88, N 13,98 C-j-zH NjS OgNan Вычислено, : t 29,09; Н 2,22; N 4,Ц. Пример 2. Использования соед нения общей формулы в качест| е реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях.

Краситель

Динатриевая соль 1,2,3-тpи aзoлил-(3-aзo-2)-1 ,8-динафталин-3,6-дисульфокислоты

Амидочерный 30-60 10В

Кумасси голубой 15 R-250 формула изобретения Динатриевая соль 2-(1,2, -триазолил-3-азо)-1.,8-диоксинафталин-3,6-дисульфокислоты формулы ОН он .N«N ЦОО/

Время отмывания

Время проявления белковых зон,мин фона красителя

6

О 15 . 30-60

10 50 55 Электрофорез (Зелков (альбумина и гистона J в полиакриламидных гелях проводят по методу Панима и Чокли{ в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм, а также в блоке полиакриламидного геля размером (1x150x150 мм. После электрофореза гели окашивают 0, раствором красителя общей формулы в смеси метанол-вода-уксусная кислота(5:5:1). Гели в трубках окрашивают в течение 16 ч, а в блоках в течение 30 мин. После 6 мин окрашивания на полиакриламидных блоках уже ясно видны окашенные белковые зоны. Применение красителя общей формулы для обнаружения белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации ЮМ и не требует отмывки геля от избытка красителя, что очень удобно при серийном анализе белков. В случае же известных красителей амидо-черного 10 Б и кумасси голубого R-250, проявление белковых зон в ПААГ требует более длительного времени, и необходимо длительное отмывание ПЛАГ от избытка красителя,что значительно удлиняет время анализа белков. В таблице приведены результаты сравнения предлагаемого красителя с известными. в качестве реагента для обнаружени белков при электрофорезе в полиакриламидном геле., . Источники информации, -. принятые во внимание при экспертизе 1. Raymond S., Wang Y.-J., Preparation and properties of acrylamlde gel for use in electrophoresis.Anal. Biochem., I960, v.l, N 2, p.391 396.

59355066

2.Fenner С., Traut R. R., полйакриламидном геле, М., Мир, Mason D.T., Wikman-Coffelt J. QuanUI-1971, c. 90.

fication of coomass e blue stained

proteins In polyacrylamide gels based k. Panylm S., Chalkley R., High

on analyses of eluted dye. Anal.Bio- 5resolution acrylamide gel electropchem., 1975, v.63, N 2, p.595-602.horesls of iiistones.- Arch. Blochem.

3.Maypep Г. Диск-электрофорез.and Blophys., 19б9, v.130, N 2., Теория и практика электрофореза вh..