2,7-Бис-(3 @ -карбокси-1 @ ,2 @ ,4 @ -триазол-5 @ -азо)-1-окси-8-аминонафталин-3,6-дисульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях Советский патент 1991 года по МПК C09B39/00 G01N33/52 

Изобретение относится к области органической химии, в частности к новому химическомуазосоединениюряда1,2,4-триазола. конкретно 2,7-бис-(3 -кар- бокси-1 .2 ,4 -триазол-5 -азо)-1-окси-8-эми- нонафталин-З.б-дисульФпкислоте (БКТААК), формулы «ос V,N.NJTN-NHOjS SO,H

-с

N-С-СООН

NH-N

которая может Ьыть использована в качестве реагента для ускоренного обнаружения белков в пониакриламидных гелях.

Цель изобретения - синтез 2.7-бис-(3 -карбокси-1 .2 ,4 у-триазол-5-азо)-1-окси-8- аминонафталин-3,6-дисульфокислоты и ее использование в качестве красителя для белков

Поставленная цель достигается синтезом нового бисазосоединения 1,2,4-триазола (БКТААК)) и применением его в качестве реагента для обнаружения белков.

БКТААК получают азосочетэнием дизот- риазолкарбоновой кислоты с аш-кислотой о две стадии: сначала аш-кислоту обрабатывают в кислой сргде избытком диазотриа- золкарбонооой кислоты, высаждают продукт и сочетают с диазотриаэолклрбоно- вой кислотой в щелочной среде.

БКТААК взаимодействует с белками. Реакцию БКТААК с белками можно использовать для обнаружения белков в полииакрилэмидных гелях.

П р и м е р 1 3,2 г (0,01 М) аш-кислоты растворяют при слабом нагревании в 200 мл дистиллированной воды Смесь быстро охлаждают, интенсивно перемешивая, и по каплям добавляют охлажденный раствор 2,1 г (0,015 М)диазотрилзолкарбоновой кислоты в смеси 22 мл концентрированной HCI и 7.5 мл воды. Все это делается при охлаждении льдом

Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 10 12ч Смесь окрашивается в темно-красный цвет

СО

с

о ч ел

СА)

О 00

Момоазокрэситель высаливают с помощью NaCI Осадок растворяют п 18 мл 5%-ной NaOl I, филы руют рэстиор и дейстпием кон- ценфириаишой IICI осаждают и отделяют осадок красителя Осадок повторно раство рчкл о 10 мл 5%-ного раствора NaOH, фильтруют и к полун иному раствору при иней ионом меррмеширпнии прибавляю чпь ми порциями 2,1 i (0,015 М) диазотри кчпл г арЬ новой кислоты Реакционную смесь оставляют на 2 сут при комнатной температуре Смесь приобретает темно-зеленый цвет Ос.чдок растворяют п 5%-ном растворе МэОН и аждтог 6 н HCI Пере- оса,тд:ют 3 pan Промывают осадок 5 1C раз кригл зллизовывают вещество из сюдпо-сппртогзои смеси (2 1)

А осоед.1не1 in, в особенности биазо соеди клип, п виде рндипидупльного веще- стиа получить трудно Обычно они пнчечлют ч в s и/Г кристаллогидратов со- /I и, адсорбирован ратшчное количество PV Неодно ратпо проведенные анализы показали что всегда остается иеорганиче- r KIM осадог при СОЖЖРНИИ Это подтверж- птм ч го аналнзируочое азосоединение

Чп ОДИТСП В 14 ПР СОЛИ

Результаты лемешного анализа

Найдено % С 23 12, I 2,55; N 1875, oriaio1 28 11

Имчислоно. % С 3 10, Н 2,77; М 18,58 огтаток 29 9

Из полученны результатов анализа можно сыпести следуюи1ую формулу соединения СибНтОпМпЗтГ- а/ 81120, молеку лярнып вес 824

К аООС С Чх9

-N- ,

U -NHJ- 1

UuOjbSOjNa

J- ( -COOMa

8II20

П р и м е р 2 Использование БКТААК в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидных гелях (ПААГ).

Электрофорез белков (гистонов, рибо- нуклеазы, и др ) в полиакриламидных гелях проводили по методу Паниума и Чокли в трубках диаметром 5 мм и высотой 100 мм.

После электрофореза гели окрашивали 02%-ным раствором красителя БКТААК в смеси этанол.вода:СНзСООН в соотношении (551), а также для сравнения окрашивали и 0,2%-ным раствором амидо черного 105 и кумасси голубого Р-250 Гели окрашивали в течение 16 ч

Применение БКТААК для обнаружения белков в полиакриламидных гелях позволяет определять белки при концентрации 10- 10 9 М и не требует многократной отмывки геля от избытка красителя что очень удобно при серийных анализах белков

В случае известных красителей - амидо черного 10Б и кумасси голубого Р-250, требуется длительное время и большой расход уксусной кислоты для отмывки полиакриламидных гелей от избыт ка красителя, что зна- чигельно удлиняет время анализа белков.

В таблице приведены сравнительные данные предлагаемого красителя с извест- н ы м

Формула изобретения

2,7-Бис-(3 г-карбокси-1 2 4 -триазол-5 -азо)-1-окси-8-аминонафталин-3 6-дисульф окислота формулы

HOOOC-N,

II N-NH

H05S ,N- Cсоон

503Н

NH-N в качестве реагента для обнаружения

бепков в полиакриламидных гелях

Изобретение относится к области органической химии, в частности к новому химическому азосоединению ряда триазола - 2,7-бис-(3 -карбокси-1/,2 4 -триазол 5 -азо)- 1-окси-8-аминонафталин-3.6-дисульфокис- лоте (БКТААК), которая может быть использована в качестве реагента для обнаружения белков в полиакрилэмидных гелях. БКТААК требует в 90 раз меньше времени для обнаружения белков и в 10 раз меньше расхода уксусной кислоты для отмывания красителя по сравнению с известными красителями амидочерным 10Б или кумасси голубым R 250. 1 табл.

1

Краситель

Время отмывания фона краси-. теля

БЮААК

Амидо черный 10Б L. / УмаЈРЧ °di PI1 JL250

5-10 мин

15-20ч

15ч

, мл

20

200 300

200 300

БКТЛАК-2 7 fmc (3 карбокси-1 2 41триазол-5 -азо)-1-окси-8-аминона4 талмн 3 К-ди- уль- фокисло а

а краси-.

Расход 7%-ной уксусной кисл рть, мл

20

200 300

200 300