Рост на агаровой среде Сабуро . (Sebourand) при 25 С очень быстрый: .1 диаметр колонии достигает 6-6,5 см спустя 10 сут после инокуляции, Поверхность колонии очень плоская и базальные и воздушные гифы раэвиваются лучше,fj, чем на картофельноrjHOKosfio-агаровой среде. Число клей стотеций весьма немногочисленно. По верхность колонии по цвету может быть от красновато-желтой до красно вато-коричневой, а обратная сторона от красновато-коричневой до темнокоричневой . Рост на агаре, на отваре из овся ной муки при протекает медленно: диаметр колонии достигает 1,52 см спустя 10 сут после инокуляции Колония плоская- Развитие воздушных гиф и образование клайстотеций весьма слабое. Поверхность и обрат1 сторона колонии по цвету могут быть темно-красной до красновато-корич.невой, Рост на агаровой среде Чапека пр очень медленный: диаметр колоНИИ достигает 1,6-1,8 см спустя 10 сут после инокуляции. Скорости роста на каждой из : приведенных-сред при по существу равны скоростям при 25С. Морфологические признаки. Клейстотации сферические диаметром 30-60 мкм, стенки клёкстотеций тонкие и пленчатые, их нол;ки имеют чашелистиковые стенки и Кс1ждая соетоит из гифы диаметром 3,5-4,5 мкм и длиной 15-70. мкм. Сумка состоит и 8 спор, и она приблизительно сферич,еская и быстро исчезающая. Аскоспо ры бесцветны и,имеют яйцеобразную или овальную форму, размер 4-5Х4-7М поверхности гладкие. Конидии бесцветные , по форме сферические или грушеобразные, размер 6-9 6-11 мкм, их основания плоские, стенки относительно толстые и гладкие. Конидии связаны вместе своими основаниями. Конидиеносцы подобны вегетативншл гифам и являются разветвленными или неразветвленными, причем конидииобразованы на вершине. Мицелий бесцветный и разветвленный, имеет чашелистиковые стенки, большинство из которых диаметром 3-5 мкм. На основании изученных характеристик все рассмотренные микроорганизмы идентифицированы как штаммы Monascus ruber . Получение Молаколина К. . .Honascus ruber штамм 1005 инокул рует на жидкую культуральную среду, содержащую, об.%:глюкоза 6, пептон 2,5, жидкость после замачивания кукурузы 0,5 и хлорид аммония. Культивацию продолжают В аэробных условиях при 28°С в течение 10. сут. Результирующий фильтрат (.5 я) культура;1ького бульона доводят до рН 3 добавлением 6 н. хлористоводородной кислоты, а затем экстрагируют равны;/ объемом этилацетата. Растворитель из экстракта отгоняют при пониженном давлении и остаток раст- воряют в J.OO мл бензола. Нерастворимое вещество отфильтровывают. Фильтрат дважды промывают, каждый раз 100 мл 5 вес/об.% водным раствором бикарбоната натрия. Затем к промытому фильтрату добавляют 100 мл, 0,2 н. водного раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре. После подтверждения исчезновения Монаколина К из бензольного слоя данными ТСХ отделяют водный слой, затем рН водного слоя доводят до 3 добавлением 6 н. хлористоводородной кислоты и результирующий раствор дважды экстрагируют, каждый раз 100 мл этилацетата. Экстракт упаривают до сухого остатка при пониженном давлении, получая 260 мг масла. Масло растворяют в бензоле, дают ему возможность кристаллизоваться, а затем перекристаллизовывают из водного раствора ацетона с получением 87 кг бесцветных игл Монаколина К. Монаколин К характеризуется следУюЩими свойствами: Цвет и форма - бесцветные кристаллы . Т.пл. 157, (с разложением). Элементарный анализ, %: С 71,56; Н 8,85;-О 19,59. Молекулярная масса 404 (по данным масс-спектрометрии). Молекулярная формула . Уф-спектр поглощения (метанол), нм: максимум на 232, 238 и 246. Растворимость. Растворим в низших спиртах (например метаноле, зтаноле и пропаноле), ацетоне хлороформе, этилацетате и бензоле. Нерастворим в петролейном эфире и гексане. Удельное вращение frfjp .+307,6 (с 1, метанол). Тонкослойная хроматография: Rf 0,47 5715 Кизельгель 60 Рг54 силикагель (фирма Мерк энд Ко), проявление смесвю 4:1 метиленхлоридацетон, детектирование в виде УФIпоглощающей массы, 50% (об./об.) серная кислота (цвет от бледно-красного до красновато-коричневого проявляется при нагревании) или йодом. Соединение является нейтральным и нерастворимо в нейтральной или кислотной водной среде. Оно переводится в кислотное соединение в результате обработки щелочью и может быть затем растворено в воде. Это кислотное соединение может быть экстрагировано этчлсщетатом или хлороформом при значениях рН, соответствующих кислой среде, и может быть превращено вновь в Монаколин К при .отгонке растворителя. Изучение физиологической активности . Физиологическая активность Монак лина К оценена и определена количес венно с помощью следующих испытаний in vivo и in vitro. Испытание In vivo на кроликах. Измеряют способность Монаколина снижать уровень содержания холестерина в крови кроликов. Вес использу мых животных 2,5-3,0 кг. Непосредст венно перед началом эксперимента из ушной вены каждого кролика берут кровь и измеряют уровень содержания холестерина в сыворотке крови общепринятым методом. Затем определенно количество Монаколина К вводят перо льно непреривно в течение 1-5 сут и измеряют уровень содержания холес .терина в сыворотке крови. Активност Монаколина К или содержащей Монако- ЛИН К культуральной среды определяют количественно на основе данных .по содержанию холестерина, полученных до и после введения Монаколи-на К. Снижение уровня содержания холес терина в крови и печени крыс. Используют - крыс поводы ВйстарИманити, каждую особь весом около 300 г. Испытания проводят на груп/пах крыс из 5 животных Каждому животному внутривенно делают инъекцию 400 мг/кг Тритона WR-1339 (товарное наименование для материала, повышакнцего уровень содержания холестерина в крови) при одновременном введении 10 мг/кг Монаколина К. « внутрибрюшинно. Спустя 14 ч после Гиполипидемический эффе внутрибрюшинного введения крыс умерщвляют путем обескровливания, кровь собирают и определяют уровень содержания холестерина в ней. Как показывают результаты испытаний, уровень содержания холестерина в крови снижается по сравнению с контрольной группой животных на 23,9%. Снижение уровня содержания холестерина в крови у кроликов. , Используют подопытных кроликов, имеющих вес тела 2,7-2,9 кг. Каждому кролику перорально вводят 1 мг/кг Монаколина К дважды в сутки ((утром и вечером J непрерывно в течение 5 сут. Перед введением и на третий и пятый день после введения собирают кровь из ушной вены и определяют содержание холестерина в сыворотке.крови. В результате установлено, что содержание холестерина на третий и пятый день после введения Монаколина К на 15 и 29% соответственно ниже уровня до введения Монаколина К. В дополнение к значительному ингибирующему эффекту в отношении биосинтеза холестерина, Монаколин К характеризуется крайне низкой токсичностью. Так, пероральная токсичность (LOyj,) Монаколина К для мышей составляет 1 г/кг веса тела или еще большую величину. . Сравнение гипохолестеримического действия Монаколина К и его ангшога ML-263 В при проявлении испытаний на крысгос, после введения им Тритона WR-1339, показало, что Монаколин К оказался в четыре-пять раз более активным (см. таблицу). аколина К и ML-236 В
631+19 Контроль 490+16 Монаколин К (-22,,01 422+18 (-33,1%.Р 0,01 640+24 ML-236 В 512+18 (-18,9%.Р 0,02 408+15 (-35,3%.Р.0,001
Среднее значение + станд тная ошибка для пяти крыс;
В скобках приведен процент уменьшения, холестерина по сравнению с контролем и значением достоверности. 4,14+0,1 3,861+165 3,40+0,11 4,020+178 (-17,5%. Р 0,01) 3,19+0,14 3,856+231 (-22,8%. Р -СО,01) 4,00+0,12 3,756+220 4,003+187 3,43+0,01 (-16,72%.Р 0,01) 3,16+0,29 3,960+135 (-23,3%. Р «0,01)
Формула изобретения MoHakoflHH К формулы
9бладающий
гипохолестеримическим действием.
Источники информации, принятые во внимание при экспертиае
