Среда для определения зараженности почвы грибами FUSаRIUм сULмоRUм (W.L.Sм.) Sacc Советский патент 1982 года по МПК C12N1/06 

(50 СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ ПОЧВЫ ГРИБАМИ FIJSARIUM CULMORUM

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и Литопатологии и может быть использовано для определения зараженности почвы грибами F.culmorum (W.G.Sm,) Sacc.

Известна среда для определения (енности почвы грибами F. oxysporum iSchl, F. solani Appl. et Wr, представляющая собой модификацию среды акстона 1.

Однако эта среда не пригодна для . F. culmorum (W.G.Sn.) Sacc., так как (Не обеспечивает четкой их дифОеренциации.

Известна также питательная среда Малаласекера и Кольхума, предложенная специально для качественной оценки зараменности пшеницы F. culmorum. Среда составлена на основе среды Чапека-Докса и включает сахарозу, натрий азотнокислый, сернокислый магний, калий хлористый, ортоцид, малахито(W.G.SH.) SACC

вый зеленый, стрептомицин, пенициллин 2 .

Однако эта среда мало пригодна для анализа полевой почвы, поскольку антимикробные добавки в рекомендуемых авторами концентрациях слабо подавляют рост сопутствующих грибов, а при увеличении их концентрации ингибируют рост выделяемого гриба.

Цель изобретения - составление

10 среды для количественного определения зараженности почвы F. culnorum и четкой дифференциации данного вида гриба.

5 Поставленная цель достигается тем, что предлагаемая среда, содержащая сернокислый магний, агар, стрептомицин, сахарозу, содержит картофельный отвар в качестве основного источника азота и дополнительного источника углерода, глицин в качестве дополнительного источника азота, калий фосфорнокислый двузамещенный, пентахлорнитро3969бензол и медицинскую желчь при следующем соотношении компонентов, г/л: Калий фосОорнокислый дгаузамещенный - Магний сернокислый 0,5-1,0 Сахароза15-20 Стрептомицин 0,2-0,30 Лгар15-20 Глицин0,03-0,06 Пентахлорнитробензол0,5-1,0 Медицинская желчь, Дл8-10 Картофельный отвар До 1 л Замена минерального азота на органический в форме картойельного отвара .который является источником аминного азота и дополнительным источником, углерода (.крахмал), значительно улуч} шает и ускоряет вегетативный рост и пигментацию. , В среду введен таюхе глицин, отсутствуЮ1Чий в картофельном отваре. Роль этой аминокислоты сводится к образованию токсичных метаболитов, которые контрастируют влияние желчи. В качестве антимикробных добавок введены стрептомицин, пентахлорнитробензол и медицинская желчь, которые полностью подавляют рост бактериальной флоры и большинства видов грибов.Применение в качестве источника фосфора физиологически щелочного его соединения (калий фосфорнокислый двузамещенный ) в повышенной концентрации в сочетании с медицинской желчью и пентахлорнитробензолом усиливает селективность среды. Характерная пигментация колоний в чистой культуре значительно облегчает идентификацию и количестпенный учет. Окраска воздушного мицелия - от телесно-розового С 5 ) до розовато-лилового (ДЗ ) цвета, окраска обратной стороны колоний - от свет ло-малинового СДб до интенсивно малинового (ГП(по шкале цветов А. С. Бо дарцева ). I . Пример 1. Мелко нарезанный картофель в количестве 1 0-160 г отваривают Q течение 15 мин в 1 л воды фильтруют через 2-3 слоя марли, доводят отвар до 1 л, прибавляют сахарозу глицин, минеральные соли, агар, авто, клавируют 20-30 мин при 0,5 эти. В охлажде.нную до С среду перед р зливкой в чашки Петри добавляют пентахлорнитробензол, медицинскую желчь и стрептомицин. Навеску почвы (Q пересчете на 10 г оздушно-сухой почвы) вносят в колбу 90 мл стерильной воды, тщательно збалтывают и готовят последовательые разведения до ItlOQO. 1 мл почвеь ой суспензии в разведении .1:1000 выевают глубинным способом на рекоменуемую среду (по 20 чашек Петри на аждый почвенный образец). Засеянные ашки инкубируют 5-10 сут при 25-27 С а рассеянном свету, что способствует учшей пигментации гриба. Затем подчитывают количество колоний и перечитывают на 1 г воздушно-сухой почвы. Определение зараженности почвы проодят на среде следую1чего состава, /л: Фосфорнокислый двузамещенный калий 3,0 Магний сернокислый 0,5 Стрептомицин0,2 Сахароза15,0 Агар15,0 Глицин0,03 Пентахлорнитробензол 0,5 Пелчь медицинская, мл 8 Картофельный отвар До 1 л Пример 2. Определение зараженности почвы проводят на среде следующего состава, г/л: Калий фосфорнокислый двузамещённый 5,0 Магний сернокислый .1,0 Стрептомицин /0,3 Сахароза .20,0 Агар20,0 Глицин0,06 Пентахлорнитробензол. 1,0 Желчь медицинская10 Картофельный отварДо 1 л Анализ почвенного образца, проведенный на описанных двухвариантах предлагаемой среды, даетидентичные результаты. Оормула изобретения Среда для определения зараженности почвы грибами Fusarlum culmorum (W.G, Sm.) Sacc., содержащая источник фора, сернокислый магний, сахарозу, стрептомицин и агар, отличаю- Л1 что, с целью повышения селективности среды, она содержит в качестве источника фосфора фосфорно кислый двузамещенный калий и дополнительно глицин, картофельный отвар.

пент€чхлорнитробензол и медицинскую желчь при следущем соотношении ком понентов, г/л:

Фосфорнокислый двузамещенный калий 35 Сернокислый, магний 0,5 1.0 Сахароза15-20

Стрептомицин 0,2-0,30 Агар15-20

Глицин0,03-0,06

Пентахлорнитробензол0,5-1,0

Медицинская желчь,f-in 8-10 Картофельный отвар , До 1 л

9697166

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

J1. Степанов М. Ю., Сидорова С. Ф. Метод количественного определения Fusariurn oxysporum Schel. в полевой почве. Микология и фотопатология, 1981, 15, 10 1,60-62.

2. flololasekera f., Gulhoun S. Тгапг,. Br. Hycol. Soc., 1969, 52,2, 187 ( прототип), 15