Способ определения активности полиеновых антибиотиков Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПОЛИЕНОВЫХ Изобретение относится к медицине в частности к тест-методам определе ния биологической активности антибиотиков. Известен способ определения акти вности полиеновых антибиотиков пу тем их прямого воздействия на колонии микробов 1. Однако известный способ является длительным. Цель изобретения - ускорение способа. Поставленная цель достигается тем что согласно способу предварительно формируют бислойную липидную мембрану на отверстии тефлоновой ячейки, далее на мембрану наносят раствор исследуемого антибиотика, измеряют проводимость мембраны и по ее уровню определяют активность полиенового антибиотика. Способ осуществляется следующим образом. АНТИБИОТИКОВ Для формирования мембраны готовят раство0 20 мг/мл фосфолипидов + 10 мг холестерина в гептане. Мембрану формируют на отверстии тефлоновой ячейки площадью растворе 100 мМ KCL, рН 7,0, t 23°С. Готовят раствор стандартного амфотерицина В с концентрацией 0,1 мг/мл в диметилсульфоксиде. Микрошприцом на 1 мкл вводят раствор стандарта с обеих сторон мембраны для получения концентрации 1-10 мг/мл. Растворы перемешивают магнитной мешалкой и измеряют проводимость мембраны. Затем последовательно доводят концентрацию стандарта до 210, ЗЮ 5-10-, б-Ю, 5-10-, 10-5, 2-10-5, 2,5-10 мг/мл и раз измеряют проводимость мембраны электрометрическим усилителем УБ-Э-. Результаты измерений приведены в таблице, где обозначено : проводимость мембраны, концентрация стандарта.

По данным таблицы строят калибровочную кривую.

Приг(повляют раствор в диметилсульфоксиде исследуемого образца амфотерицина В концентрации 0,1 мг/млГ Формируют мембрану в тех же условиях. Вводят исследуемый амфотерицин В до концентрации 2-10 мг/мл. Измеряют проводимость мембраны. Она была равна 1,58-10ч)м-см Я По калибровочной кривой находят соответствующую концентрацию стандарта, равную 1 .t-10 мг/мл. Вычисляют содержание активного вещества в исследуемом образце амфотерицина В по формуле

г СА стаНА

100,

СА исслел

С -содержание активного вещества, %;

Су РШд-концентрация стандарта; г -концентрация исследуемого Аисслед образца.

Подставляют в эту формулу Сдстс(нл 1, 10 мг/мл, Сд„ссл 2-10- мг/мл и определяют С :

1 }0

70%.

Предлагаемый способ может быть ис пользован для экспресс-определения активности антибиотиков на заводах медпрепаратов и в лабораториях, так как он проще и осуществляется за время менее 1 ч, что примерно в 20 раз быстрее известного способа.Обработка результатов также предельно упрощена, так как однократно строят универсальную калибровочную кривую

для каждого антибиотика.

Формула изобретения Способ определения активности полиеновых антибиотиков, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью ускорения способа, предварительно фор мируют бислойную липидную кэмбрану на отверстии тефлоновой ячейки, далее на мембрану наносят раствор исследуемого антибиотика, измеряют проводимость мембраны и по ее уровню определяют активность полиенового антибиотика. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Микогептин и его клиническое применение. М., 1973, с. 61-64.