Питательная среда для культивирования светящихся бактерий Советский патент 1982 года по МПК C12N9/02 

(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СВЕТЯЩИХСЯ

БАКТЕРИЙ

1

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для выращивания светящихся бактерий - продуцентов фермента люциферазы.

Известна питательная среда для выращивания светящихся бактерий Beneckea harveyi для получения люциферазы из биомассы этих бактерий, состоящая из следующих компонентов: 5 г бактотриптона (Difco), 0,5 г дрожжевого экстракта (Difco), 2 мл глицерина, 200 мл дистиллированной воды, 800 мл морской воды 1.

Однако данная среда не обеспечивает достаточно высокого уровня содержания люциферазы в биомассе бактерий. Удельное содержание лю1шферазы в этой биомассе мало и составляет 0,98 отн.ед/опт.ед.

Наиболее близкой по технической сущности к предложенной является среда для выращивания светящихся бактерий следующего состава, г/л: NaCI 28,0-30,0; Na2HPO4- 8,0-10,0; KHjPO,, UQ-1,1, (NH4)2HPO4 0,50-0,55; MgSOa 7H2О 0,08-0,12; глицерин

3,4-3,6, бактопептон 5,0-5,5, дистиллированная вода до 1 литра 2.

Однако эта среда не обеспечивает достаточно высокий уровень содержания люциферазы в биомассе бактерий. Удельное содержание люциферазы в биомассе бактерий составляет 4,7 отн.ед./опт.ед.

Цель изобретения - повышение выхода бактериальной люциферазы с единицы биомассы.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда, для культивирования светящихся бактерий, содержащая натрий хлористый натрий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, аммоний фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый, глицерин, бактопептон, дистиллированную воду, дополнительно содержит

20 фенобарбитал в количестве 0,2-1,0 г/л при следующем соотношении компонентов, г/л: Фенобарбитал0,2-1,0

Натрий хлористый28,0-30,0 Натрий, фосфорнокислый однозамещенный8,0-10,0 Калий фосфорнокислый одноэамещенный1,0-1,1 Аммоний фосфорнокислый однозамещенный0,50-0,55 Магний сернокислый0,08-0,12 Глицерин3,4-3,6 Бактопептон5,0-5,5 Дистиллированная водаОстальное Фенобарбитал является ангибиторрм синтеза ;альдегидного фактора одного из субстратов люциферазы в клетках бактерий. Пример. В культиватор заливают стерильную питательную среду, г/л: NaCI 29,0 Na2HP04-12H20 10,0;КН2Ю4 1,0; (NH4)2Hro4 0,525; MgSp4i ТНзО 0,08; глицерин 3,5; бактопептон 5,5; дистиллированнаявода до 1 л. Затем вводят инокулят и сразу же добавляют фенобарбитал в концентрации 0,2 г/л. Скорость роста (фиг. Ш, кривая 2) не отличается от контроля (фиг. 1а, кривая I). Удельное содержание люциферазы в биомассе составляет 8,6 отн.ед./опт.ед.(фиг.1б 2). Пример 2. В культиватор заливают стерильную питательную среду, г/л: NaCl 28,0 Na2HPO4-12H2O 8,t); КН2РО4 1,05; (NN4)2 НР04 0,55; MgS04 7H20 0,12; глицерин 3,4 бактопептон 5,25; дистиллированная вода до 1 литра. Затем вводят инокулят и сразу же добавляют фенобарбитал в концентрации 1,0 г/л. При такой концентрации фенобарбитала в среде скорость роста бактерий (фиг.la кривая 3) меньше, чем скорость роста бакдтерий в контроле (фиг. 1е(, кр1шая 1). Удель нее содержание люциферазы в биомассе 9,1 отн. ед./опт.ед. (фиг. 15, кривая 3). .Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить выход люциферазы ,S еди ницы биомассы светящихся бактерий почти в 2 раза по сравнению с прототипом. Формула изобретения Питательная среда дпя культивирования светящихся бактерий, содержащая натрий хлористый, натрий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, аммоний фосфорнокислый однозамещенный, магний сернокислый, глицерин, бактопептон, дистиллированную воду, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью увеличения выхода люциферазы с единицы биомассы, дополнительно содержит фенобарбитал в количестве 0,2-1,0 г/л при следующем соотнощении компонентов, г/л: Фенобарбитал .0,2-1,0 Натрий хлористый .28,0-30,0 Натрий фосфорнокислый однозамещенный8,0-10,0 Калий фосфорнокислый двузамещенный1,0-1,1 Аммоний фосфорнокислый однозамещенный0,50-0,55 Магний сернокислый0,08-0,12 Глицерин3,4-3,6 Бактопептон5,0-5,5 Дистиллированная водаОстальное Источники информации принятые во внимание при экспертизе 1. Gunsalus-Miguei A.,Meighen Е. Д., Nicoli, Nicoli М. Z.; Nealson К. Н., Hastings J. W., Purification and properties of bacterial iuciferases. JournaL of Biol. Chem. 1972, V. 247, № 2, р. 398-404. 2. Воробьева Т. И., Высоцкий Е. С., Заворцев В. В. и Межевикин В. В. Регуляция синтеза люциферазы, - „Микробиология, 1980, т. 49, N 4, с. 517-520 (прототип).