Способ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза Советский патент 1982 года по МПК A61B6/00 

(54) СПОСОБ РАДИОНУКЛИДНОЙ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОСТИ ТЕРМИНАЛЬНОГО ЭРИТРОПОЭЗА

1

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Известен способ определения активности терминального эритропоэза, основанный на подсчете содержания макроцитов в периферической крови 1.5

Однако известный способ имеет низкую точность, так как основной критерий - количество эритроцитов-макроцитов - зависит не только от состояния терминального, но и от.активности неэффективного эритро- ,Q поэза, который характерен для В -дефицитных анемий.

Наиболее близким к предложенному является способ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза путем определения количества меченых эрит- is роидных клеток после инкубации их с радионуклидом и авторадиографии 2 .

Однако известный способ имеет ограниченное применение в клинике при обследовании людей, так как 59Fe с высокой удель- ° ной активностью (непременное условие для авторадиографических исследований) оказывает радиационное действие на организм, при этом способ трудоемок и недостаточно

точен, так как гамма-частицы 59Fe имеют сравнительно невысокую разрешающую способность, что не позволяет точно определить концентрацию метки в эритроидн1 1х клетках и, следовательно, оценить состояние терминального эритропоэза.

Целью изобретения является повышение точности.

Эта цель достигается тем, что согласно способу радиоуклидной диагностики активности терминального эритропоэза путем определения количества меченых эритроидных клеток после инкубации их с радионуклидом и авторадиографии, проводят стернальную пункцию, инкубируют клетки костного мозга с 3-Н-тимидином из расчета 900 беккерелей на 1000 клеток и определяют на авторадиограммах в 100 клетках эритроидного ряда процент полихроматофильных нормобластов, содержащих 6-20 гранул восстановленного серебра, и при 1-4% констатируют сниженную, при 5-10% нормальную и при 11-30% повышенную активность терминального эритропоэза.

Способ осуществляют следующим образом. Проводят пункцию грудины, клетки костного мозга инкубируют ин витро с 3-Н-тимидином при 37°С в течение 3 ч. Изотоп вводят в инкубационную среду из расчета 900 беккерелей на 1000 клеток, готовят мазки костного мозга для авторадиографии и при микроскопии мазков подсчитывают 100 клеток эритроидного ряда и определяют, сколько среди них полихроматофильных нормобластов, ядра которых содержат 6-20 гранул восстановленного серебра. Эта величина, выраженная в процентах, является показателем активности терминального эритропоэза и при 1-4% констатируют сниженную, при 5-10% нормальную, при 11-30°/о повышенную активность терминального эритропоэза. Это позволяет использовать способ для дифференциальной диагностики макроцитарных анемий. Пример 1. Больная Р. А. Ф., 30 лет, поступила с диагнозом: анемия. Анализ крови, гемоглобин 7,8 , эритроциты 2200000, ц. п. 1,1; ретикулоциты 1,0% (22 тыс. мкл). Эритроцитометрическая кривая со сдвигом вправо, процент макроцитов составлял 36. Содержание эритроидных клеток в миелограмме 42%. Мегалобласты - 9. Копровоскопические исследования отрицательные. Для выяснения причины макроцитоза эритроцитов провели исследование активности терминального эритропоэза по предложенному способу. С этой целью сделали пункцию грудины,0,5 мл пунктата смешали с 1,0 мл цитратной аутоплазмы. При подсчете в камере Горяева установили, что 1 мкл клеточной суспензии содержит 41 тыс. миелокариоцитов. Путем повторного добавления аутоплазмы содержание клеток в 1 мкл довели до 20000. 3-Н-тимидин с удельной ак1ивностью 2,5 кюри/ммоль использовали для при готовления рабочей концентрации изотопа, соответствующей 5 микрокюри на 1 мл 0,5%-ного раствора глюкозы. В силиконированную пробирку поместили 1 мкл клеточной суспензии костного мозга, содержащей 20000 миелокариоцитов, и 0,1 мкл рабочего разведения 3-Н-тимидина. При этом конечная концентрация изотопа в инкубационной среде составила 900 беккерелей. на 1000 клеток. Инкубацию проводили в термостате при 37°С в течение 3 ч. По истечеНИИ этого срока надосадочную жидкость удалили, а из осевших на дно пробирки клеток приготовили мазки, которые обработали для авторадиографии. При микроскопии (ок. х10, об. х90) в мазке определили 100 клеток эритроидного ряда и определили среди них количество полихроматофильных нормобластов, ядра которых содержали от 6 до 20 гранул восстановленного серебра. У обследуемой больной среди 100 клеток эритроидного ряда обнаружили только 2 полихроматофильных нормобласта, ядра которых содержали соответственно 6 и 8 гранул восстановленного серебра. Следовательно, активность терминального эритропоэза составила 20, что свидетельствует о его торможении, наиболее частой причиной которого является дефицит витамина Вц. На фоне интенсивной BIJ -терапии больной провели дегельминтизацию: отошло 43 экземпляра дифиллоботриид. Через неделю больная была выписана в удовлетворительном состоянии. Пример 2.. Больная Ю. 3. Т., 28 лет, поступила с диагнозом;анемия. Анализ крови: гемоглобин 8,0 г%, эритроциты 2000000, ц. п. 1,2; ретикулоциты 1% (20 тыс./мкл). Количество лейкоцитов 7200, формула Б-0, Э-25, П-3, С-36, Л-25, М-П. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса со сдвигом вправо. В миелограмме содержание эритроидных клеток 41/о. Гельминтоовоскопические исследования отрицательны. Применение предложенного способа позволило определить активность терминального эритропоэза (ТЭ), которая составила 2%. Наличие микроцитоза при низкой активности ТЭ свидетельствует об активации неэффективного аэритропоэза, одной из причин которого является дефицит В 2-витамина, развивающийся на севере Тюменской области, где живет обследуемая больная, вследствие дифиллоботриоза. Назначение многократных копровоскопических исследований позволило обнаружить яйца дифиллоюотриид. На фоне В,2-терапии провели дегельминтизацию. Отошли дифиллоботрииды в большом количестве. Больная выписана в удовлетворительном состоянии. Пример 3. Больной П. В. В., 30 лет. поступил с диагнозом: анемия. Анализ крови: гемоглобин 8,1 г%, эритроциты 2200000, ц. п. 1,1; ретикулоциты 2% (48 тыс. мкл). Количество лейкоцитов 7800, формула Б-О, Э-1, , С-70, Л-23, М-2. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса со сдвигом вправо. В миелограмме эритроидные клетки составили 45%. По данным, полученным предложенным способом, активность ТЭ составила 29%, что свидетельствует о его стимуляции, и дало основание предполагать у больного скрытое кровотечение. При целенаправленном обследовании обнаружили полип прямой кишки. После операции больной выписан в удовлетворительном состоянии. Показатели периферической крови и костного мозга достигали нормального значения. Предложенный способ применен в эксперименте на .60-ти крысах и в клинике на 10-ти больных. При этом установлено, что предложенный способ обеспечивает более высокую точность (ошибка в 12 раз меньше, чем в известном), сокращает время исследования в 4 раза за счет сокращения количества операций при анализе, устраняет радиационное действие изотопа на организм и позволяет проводить дифференциальную диагостику макроцитарных анемий, сопровождающихся стимуляцией терминального или неэффективного эритропоэза.

Формула изобретения

Способ радионуклидной диагностики активности терминального эритропоэза путем определения количества меченых эритроидных клеток после инкубации их с радионуклидом и авторадиографии, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, проводят стернальную пункцию, инкубируют клетки костного мозга с 3-Н-тимидином из расчета 900 беккерелей на 1000 клеток и определяют на авторадиограммах в 100 клетках эритроидйого ряда процент полихроматофильных нормобластов, содержащих

гранул восстановленного серебра, и при 1-4% констатируют сниженную, при 5-10°/о нормальную, и при 11-30% повышенную активность терминального эритропоэза.

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе 1. Stohlman F. Humoral regulation of erylhropoiesis VII. Shortened survival of erythrocYtes produced by erYthropoietinfor severe anemia. Prbc. Soc. Exp. Biol. Mtd-. 1961, V 107, p. 884.

2. Alpen E., Cranmore D., Cellular kinetics and iron utilization in bone marrow as observed bY Fe radioay.tographY. Ann. N.Y. Acad. Sci. 1959, v. 77, p. 753.