Способ выделения алкалоидов спорыньи из культуральных суспензий Советский патент 1982 года по МПК C12P21/04 

типов алкалоидов спорьшьи в сапрофитной культуре. Найдено, что способные к набухтгаю глиноземы так же, как и бентонит, от беливаюшая глина, фуллерова земля или сукновальная глина, при естественном значении рН культуральной суспензии по казывают чрезвычайно высокую адсор&ционнуго способность не только для эргометрина, но и для всех проверенных алкалоидов спорыньи самых различных структур. Изготовленные таким образом смеси лоща Лий - адсррбент механичеси хорошо разделяются фильтpajциeй или другими способами. Полученные после механического раэделения алкалоидсодержащие смеси мице ЛИЙ - адсорбент отлично консервируются без изомеризашш или разложения алкало идов4 при необычных для них температурах 8О-90 С,. сушкой в псевдоожиженно слое при соблюдении определенных физи ческих условий. Полученная стойкая при :фанении в любых условиях сухая масса мицелий - адсорбент мягко и полностью экстрагируется после набухания в неболь шом количестве слабощелочного водного раствора с помощью органических алротонных растворителей. В дальнейшем устанавливают, что сп соб сушки можно перенести на такие культуры, которые содержт в биомассе все образовавшиеся алкалоиды и тем самы не требуют добавления адсорбентов. После механического разделения и сушки в псевдоожиженном слое получают стойкий при зфанении сухой мицелий, переработку которого можно провести независимб от срока сбора культуры. ,. Сущность изобретения состоит в том, что собранные культуральньте суспен-ч зии, содержащие любой спектр алкало-. вдов спорьшьи, как эргокриптин, эрготамин, эргокристин, эргокорнин, эргометри лизергиновая кислота, аргоклавин, эргознн или ;фугие , при наличии в спектре растворимых в Ьоде частей сначала перемешивают в течение около ЗО мин с 4-5 вес.% (считая на объем урожая), глинозема, способного к набуханию, и разделяют мезсанически, например фильтрованием, твердые и жидкие фазк. Полученный влажный мицелий или смесь влажный мвцелий - адсорбент сушат в псевдоожиженном слое при вО-ЭО С в течение 2 О-40 мин до температуры отходящего воздуха SO-TO C и до оотаточяой влажности максимально 15%. Сухой ьащелий или смесь сухой мицелий - адсорбеигт при необходимости посх ле растирания в пасту с водным слабощелочным раствором, например 15%-ной. амтушачной водой, подвергают экстракцик с апротонным органическим растворителем, например низшим афиром алкилкарбоновой кислоты, ацетоном, или галоге- нирова лгым углеводородом, полученный экстракт в случае необходимости для удаления неосновных балластных веществ подают на жидкостно-жидкостную экстраищю с воднокислой фазой в объеглном соотношении от 2:1 до 1:1. Водный, содержащий все алкалоиды раствор после подщелачивания до значения рН в пределах 8-9,5 реэкстрагируют органическим несмешивающимся с водой растворителем, преимущественно этилацетатом, в соотношении от 1:1 до 3:1. Дальнейшую перепереработку предварительно очшие1шого экстракта осуществляют известным способом, принимая во внимание химические и физические свойства соответствующих алкаловдов. Пример 1. 20О л культуральной суспензии штамма CCcrviceps porpureci (,Fr.)Tue. Л MET PA 130 (хранится в Центральном институте микробиологии и экспериментальной терапии. Йена) пере« мешивают в течение 30 мин с 8 кг бентонита и затем фильтруют через вращающийся ячеистый вакууь4-фильтр с lO-миллиметровым слоем из дигидрата сернокислого кальция. Фильтрат, практически свободный от алкалоидов, выбрасьюают, снятую смесь влажный мицелий бентонит сушат в псевдоожиженном слое при температуре приточного воздуха 90 С до тех пор, пока температура отход йщего воздуха не достигнет 60 С (лродол кительность около 30 мин). Получают 2О-24 кг смеси сухой мицелий бентонит с остаточной влажностью 3-5%, которая содержит 95-1ОО% эрготоксина, определенного в культуральной суспензии и 92-96% эргометрина. П р и м е р 2. 100 л культуральной суспензии штамма CBaviceps риг риг ed перемешивают в течение 1 ч с 5 кг отбеливающеЙгглины, фильтруют, и смесь влажный мицелий - отбеливаквцая глина сушат в псевдоожиженном слое в течение 15 мин при 8О-90 С до те лпературы отходящего воздуха 50°С. Получают 12 кг смеси сухой мицелий - отбеливающая глина с остаточной влажностью 10-12% и содержанием алкалоида 92-100%, считая на культуральную суспензию.

П р и м е р 3. 10 кг приготовленной по примеру 1 или 2 смеси сухой мицелий - адсорбент смешивают с 1,5 л разбавленной 1:2 аммиачной воды, пооле 5-1О мин вабуханвя перемешивают с 4О л этиладетата в двух порциях по 15 мин с VPfra-Turrdx и отсасывают. Общий экстрат вместе с 20 л 3%-ной водной фосфорной кислоты пропускают : через сепаратор. К тяжелой фазе прнба&ляют 8 л этилацетата, при веремеишвании устанавливают рН 8,5-9,0, добавляя концентрированную аммиачную воду и 1О ми перемешивают. После разделения фаз процесс повторяют с 6-8 л этилацетата еше два раза. Обший экстракт концентрируют до 0,3-О,б л в вакуумном циркуляционном испарителе, в выпарном аппарате с нисзоэдяпшм потоком управляемой жадкости или другим мягким методом , смешивают с двойным объемом хлороформа и отделяют эргометрин в форме труднорастворимого хлороформного аддук та. Из фильтрата получают после очист кй адсорбционной яроматографией или периодическим способом эрготоксин а виде бензольного или толуолыного аддукта. Оба аддукта очишеюя тонкослойной хроматографией и содержат алкалоида в расчете на бималеинат. Выход составляет 58,6 г эрготоксин- олуо№-аддукта (72%) в расчете на культуральную суспензию и 4О,5 г эргометри -хлороформ-аддукта (82%) в расчете на культуральную суспензию.

П р и м е р 4. 6О кг полученной по примеру 1 или 2 смеси сухой мицелий адсорбент смеШивают с 7,5 л раабавле ной 1:1 аммиачной воды, экстрагируют в экстракторе с мешалкой 15О л хлороформа или хлористого метилена в течение 45 мин, экстракт фильтруют под давлением и экстракцию повторяют с тем же объемом растворителя в течение ЗО мин.

Общий экстракт пропускают через сепаратор с 5%-ной водной винной кислотой в соотношении 1:1, водную фазу непрерывно устанавливают на рН -9 и ситарируют )й раз с тем же растворителем или с этилацетатом в соотношении 2:1. Пооле выпаривания, отделения эргометрина, 0 осаждения эрготоксина получают продукты с выходом и качеством, указанным в примере 3.

П р и м е р 5. ЗО л культурального раствора штамма CgdViceps рогригеа бмЕТ РА 134, образующего эргозив перемешивают при естественном значении

рН 5-6 в течение 30 мин с 1,2 кг бев тонита, отсасывают через слой дигид рата сернокислого кальция в фильтрат выбрасывают. Сушка смеси влажный мвцелий - бентонит по примеру 1 дает 2 кг стойкой при :фанешш смеси сухой мицелий - бентонит, которая ccvдержит аналитически определенные в ; культуратшой суспензии алкалоиды (э| гозин, эргозинин, следы ханоклавнна) практически 1(JO%. I

Экстракционный эффект при экстракции с перемешиванием с 1О-12-кратным количеством этилацетата составляет в среднем 90% в расчете на содержание смеси сухой мицелий - беитонит.

Примере. 2О л культуральной суспензии штамма, приведенного в примере 5, фильтруют без добавления адсррбента через 2 О миллилитровый спой дигидрата сернокислого кальция, фильтрат, содержаший только следы эргозвна и часть сопутствующих алкалоидов, выбрасывают. Выделенный влажный м целий сразу сушат в псевдоожиженном слое при 90С до темпе{затуры отх(дяжего воздуха 60 С (продолжительность около 4О мии). Получают 0,8-1,0. кг стойкого при хранении сухого мвцелвя, кotppый содеришт 96-1ОО% определевного в культуральной суспензии эргозвва I а также следы сопутствующих алкалоипов.,

Для получения алкалоида сухой мицеяий после смешивания с 150 мл аммиачной воды экстрагирую прв перемешивании с 8 л хлороформа в двух порциях и после перевода в водво. квелую фазу, реэкстракции и выпаривания из полученного концентрата осаждают винной кислотой в виде тартратасьфца.

Формула изобретения .

1. Способ выделения алкалоидов спорыньи из культуральных суспензий, о t личающнйся тем, что собранную культуральную суспензию в естественном состоянии пос;ю перемешивания с гл ноземом, способным к вабуханию, механ чески разделяют, например фильтрацией, смесь влажный мицелий - адсорбент с)шат в пеевдоожиженном слое, смешивают для набухания с аммиачной водой, э|к трагируют органичес1Й ми апротонными растворителями и экстракт перераб(айРыА вают известным образом.

2.Способ по п,1, отличаю-щ и и с я тем, что в качестве глинозомв, способного к набуханию, применяют 4-5 вес.% бентонита н перед механичеокнм рааиеленнем культуральную суспензию перемешивают с адссфбентом в теч&нне ЗО мин.

3.Способ по П.1, отличаюш я и с я тем, что сушку смесн влажный мицелвй адсорбент осуществляют в псездоожвокенном слое при 8О-90 С в течение 2О-40 мин до температуры отходящего воздуха 5О-7О С и остаточной влаги ае более 15%.

4 Способ по П.1, отличающийся тем, что в качестве ахфотонных растворителей для экстракции твердое вещество - жидкость применя1рт низ щие эфиры алкилкарбоновой кислоты, преимущественно этилацетат, аиетон, или галогенированные углеводороды, пр& имущественно хлороформ или хлористый метилен, и смесь сухой мицелий - адсорбент перед экстракцией смещивают для набухания с 1О-2О вес.% аммиачной воды и экстракт-сьфец перерабатывают известным способом.

Признано изобретением по результатам Экспертизы, осуществленной ведомством по изобретательс гву Германской Демократический Республю5;и,