Способ получения 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфатов Советский патент 1983 года по МПК C07F9/09 A61K31/675 A61P31/12 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 9-(2-ОКСИЭТОКСИМЕТИЛ) ГУАНИНФОСФАТОВ Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно к способу получения новых 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанинфосфатов обшей формулы НгК / К-СНаОСН2СНгОР где W HZ- одинаковые или разные и представляют собой водород или катион натрия, калия, лития или аммония, которью обладают противовирусной активностью и могут быть использованы для лечения вирусных заболеваний у млекопитающих. ИзвёотнЬГ что 9-(2-оксиэтокси)метильные производные пуринов обладают антивирусньм действием против вирусов простого и опоясываквдего лишая к ветряной оспы у млекопитающих, которые вызывают такие заболевания, как герпетический кератит у кроликов и герпетический энцефалит у мышей 1. Известен способ получения гуанози -З ФРсфата путем, фосфорилирования гуанозяна хлорокисью фосфора в среде .пиридина при (-40) - (-10) 2. Известно также, что 9-(р -D-арабйнофуранозил)-бигенин-З -фосфат получают путем взаимодействия 9-(р -D-арабиг нoфypaнoзил)aдeниffaс хлорокисью фосфора в среде ледяной уксусной кислоты в присутствии третичного амина 13. Известен способ получения первичных аминов аммонолизом соответствующих хлоридов в спиртовой среде в. зам кнутой системе при нагревании до температуры выше 100°С 4. Однако 9-(2-оксизтоксиметил)гуанинфосфаты формулы 1 известньфли способами получены не были. . Целью изобретения является разра- ботка способа получения новых 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанинфосфатов. Поставленная цель достигается описанным способом получения 9-(2-окси-. зтоксиметил)гуанинфосфатов формулы 1, который основан на известной реакции аммонолиэа (41 и заключается в том, что соединение общей формулы и/он (2) К -К-сНгОСНгСНгОГх ,

где G - галоид, подвергают взаимодействию с аммиаком в спиртбэой среде с последующим выделением целевого продукта в виде кислоты или ее соли.

. -

Пример. Получение 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата, 0,03 мл хлорокиси фосфора добавлякгг к перемешиваемой суспензии 20 мг 2-хлор-9 (2--оксйэтоксиметил) гипоксантина в 0,3 мл триэтилфосфата при . Затем в течение 30 мин температуре дают подняться до О С. Далее реакционную смесь перемешивают при О С в течение 40 мин и при в течение 50 мин. Реакционную смеск выливают на лед и рН смеси доводят до 7 с помощью 2 н. раствора гидроокиси калия. Полученный раствор дважды экстрагируют хлороформом (2x2 мл). рН водной фазы доводят до 8-8,5 с помощью 2 н. раствора гидроокиси и добавляют 105 мг ацетата бария. Образовавшийся осадок фосфата бария отфильтровывают.Фильтр обрабатывают большим избытком этанола, при этом вьшадает сырой 2-хлор-9(2-оксиэтоксиметил)-гипоксантинбарийфосфат. Твердое вещество отфильтровывают и с успендируют в этаноле. Этанольную суспензию нагревают на паровой бане в течение нескольких, минут, охлаждают и фильтруют. Полученный осадок промывают безводным эфиром и сушат. Получают 26 мг 2-хлор-9(2-оксиэтоксиметил) гипоксантинбарийфосфата.

К перемешиваемой суспенэии 7 мг 2-хлор-9(2-оксиэтахсиметил) гипоксантинбарийфосфата в 0,5 мл воды Добавляют 3,96 мг сульфата аммония. Смесь перемешивают при комнатной, температуре в течение 15 мин, затем охлаждают на ледяной бане. Вьшавший осадок сульфата бария отделяют фильтрованием и промывают I мл воды и 10 мл метанола. Соединенные фильтрат и промыв ные воды выпаривают при пониженном давлении, образовавшийся при этом ос таток растворяют в 3 мл метанола. Метанольный раствор переносят в футерованную тефлоном бомбу из нержавеклцей стали. В бомбу также загружают 8 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком при температуре ледяной бани. Закрытую бомбу псялещают на 4 ч в печь при 122°С, затем ее охлаждают и открывают. Растворитель отгоняют до минимального объема. Оставшуюся реакционную смесь каплями наносят на целлюлозные листы для тонкослойной хроматографии ИСтмен Хроматограм, которые затем проявляют в смеси пропанол: вода (70:30 по объему). Полосы при R 0,16 и 0,34 вырезают, суспендируют в 0,6 мл буферного раствора Трис при рН 8 и целлюлозу удаляют фильтрованием. „

В этих полосах содержится 9-(2-оксиэтоксиметнл) гуанинфосфат и 2-хлор-9-(2-оксиэтоксиметил) гипоксантинфосфат, как это показано энзимным дефосфорилированием щелочной фосфатазой до 9-(2-оксиэтоксиметия) гуанина и 2-хлор-9-(2-оксиэтоксиметил) гипоксантина соответственно.

К фильтрату добавляют 2 мкл щелочной фосфатазы из Е. coli и смесь нагревают при З2с в течение 2 ч. Затем ее исследуют тонкослойной хроматографией на целлюлозных листах Истман Хроматограм в трех смесях растворителей :

1)пропанол:вода (70:30 по объему)

2)вода

3)пропанол:концентрированный раствор гидроокиси аммония:вода (60: 30:10 по объему).

Для каждой смеси имеется по два пятна, соответствующие 9-(2-оксиэтоксиметил) -гуанинфосфату (А) и 2 хлор9-(2-оксиэтоксиметил) гипоксантину (В).

Смесь раст- -д, , Rг продукта ворителей i реакции

0,51 0,04 О,,51 и 0,65 0,68 0,97 0,67 и 0,97 0,51 0,71 0,51 и 0,71

Целевой продукт начинает разлагаться при 210С.

Элементарный анализ. найдено, %: С 31,23; Н 3,85;

,

N 23,00 Р 10,09. Вычислено, %: С 31,49; Н 3,69

N 22,95; Р 10,15. Пример 2. Получение 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.

0,28 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата растворяют в 30 мл воды и рН раствора доводят до 6 с пс 101цью 6 н. водного раствора соляной кислоты. Продукт сорбируют 14 мл уплотненного угля (Фишер 5-690В, 50-200 меш, промытый кислотой и дезактивированный толуол9М) , УГОЛЬ хорошо прсмлывают вогдой и элюируют 70 мл 50%-ного водного этанола,содержащего 2% концентрированного раствора гидроокиси гиФгания.Растворитель отгоняют при пониженном давлении и получают 0,048 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.Выход 15%.Rj, 0,30 на целлюлозе Истмена в смеси пропанол:вода (70:30 по объему) . Продукт начинает разлагаться при 210°С.

Пример 3. Таблетки. 9-(2-Оксиэтоксиметил) гуаниннатрийфосфат, мг 100 Лактоза, мг200

Крахмал, мг50

Поливинилпирролидон/ мг 5 Стеарат магния, мг4

Общий вес359