СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Российский патент 1994 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к методам диагностики инфекционных заболеваний у животных.

Известен способ серологической диагностики бруцеллеза с помощью РА, РСК, РДСК.

Известен также аллергический метод диагностики бруцеллеза с помощью бруцеллина ВИЭВ (Результаты изучения и производственного испытания аллергического метода диагностики у крупного рогатого скота и северных оленей. - Материалы к заседанию Научно-технического совета МСХ СССР. Москва, 1982), который рассматривается в качестве прототипа.

Однако известные способы не обеспечивают полного выявления больных и бактерионосителей как в серологическом, так и аллергическом методах.

По источникам патентной литературы аналоги не обнаружены.

Целью изобретения является разработка способа по повышению диагностической эффективности аллергического метода выявления бактерионосителей.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу для выявления бактерионосителей вначале повышают сенсибилизацию организма за счет введения вакцины и до появления поствакциональной аллергической реакции проводят аллергическое исследование, тем самым выявляют скрыто больных бруцеллезом животных.

Способ осуществляется следующим образом. Перед аллергическим исследованием животных, которые ранее не иммунизировались противобруцеллезными вакционами, вводят вакцину из штамма 82 в дозе 1,6 млрд. м. к. свинкам и 100 млрд. м. к. крупному рогатому скоту. Через 3 - 4 дня после иммунизации их исследуют аллергически (см. Наставления по диагностике бруцеллеза животных, стр. 33 - 36. Утвержден ГУВ МСХ СССР 30 декабря 1982 года). У животных больных бруцеллезом и бактерионосителей на месте введения аллергена обнаруживается положительная аллергическая реакция.

П р и м е р 1. Опыты на морских свинках и крупном рогатом скоте по выявлению времени появления поствакциональной аллергической реакции.

В опыт берут 24 морских свинок и 20 телок 4-5-месячного возраста, которых иммунизируют вакциной из штамма 82 в дозах 1.6 и 100 млрд. м. к. соответственно. Через 3, 4, 5 и 6 сут после иммунизации животных исследуют аллергически с помощью бруцеллина ВИЭВ. Одновременно у них берут кровь для постановки РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. Результаты исследования отражены в табл. 1.

Данные, представленные в табл. 1 показывают, что морские свинки и телки, привитые вакциной из штамма 82, при исследовании в течение 6 дней серологически не реагируют. Положительно реагирующих на аллерген животных выявили на 5-е сутки после иммунизации. Так, из 6 морских свинок и 5 телок, исследованных в этот срок, соответственно у 2 реакция была положительная. На 6-е сутки количество положительно реагирующих увеличивается до 60% .

Следовательно, у морских свинок и телок, иммунизированных вакциной из штамма 82 в вышеуказанных дозах, поствакцинальная аллергическая реакция выявляется при постановке кожной пробы через 5 дней после иммунизации.

П р и м е р 2. Опыты на морских свинках по выявлению бактерионосителей.

В опыте используют 62 морских свинок, разделенных на 2 группы. Первую группу животных заражают культурой вирулентного штамма бруцелла абортус 54 в дозе 50, вторую - 500 м. к. Через 3, 6, 11, 16 и 23 сут после заражения животных исследуют аллергически и одновременно берут кровь для исследования в РА и РСК. После читки аллергической реакции проводят иммунизацию вакциной из штамма 82 в дозе 1,6 млрд. м. к. и через 3 дня исследуют повторно по вышеописанной методике. Затем животных убивают и исследуют бактериологически. Посевы проводят на печеночно-пептонной глюкозо-глицериновый агар и бульон из паховых, подчелюстных, заглоточных, парааортального лимфатических узлов, а также из печени, селезенки и костного мозга. Посевы инкубируют в термостате при 37^о в течение 30 дней. Дифференциацию полученных культур проводят с помощью S- и R-гипериммунных сывороток, а также постановкой биопробы на морских свинках. Результаты аллергического и бактериологического исследований представлены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что из 32 морских свинок, зараженных в дозе 50 м. к. при аллергическом исследовании с помощью бруцеллина выявлено положительно реагирующих при исследовании только на 16-е сутки в количестве 2 (6,2% ) голов. При бактериологическом исследовании этих животных была выделена культура бруцелл. При аллергическом исследовании по предлагаемому методу из того же количества исследованных животных реагирующие животные выявлены на 11, 16 и 23-е сутки в количестве 9 (28,1% ). При бактериологическом исследовании животных, положительно реагирующих на аллерген, кроме вакцинного штамма 82 выделена и вирулентная культура. Из 30 морских свинок, зараженных в дозе 500 м. к. , при исследовании по существующему методу положительно реагировало 5 (16,6% ) голов, а при исследовании по новому методу 11 (36,6% ). При бактериологическом исследовании положительно реагирующих на аллерген животных в первом случае также выделили культуру вирулентного штамма, во втором - культура вакционного и вирулентного штаммов.

Таким образом, иммунизация морских свинок вакциной из штамма 82, ранее зараженных вирулентной культурой бруцелла абортус 54, повышает аллергизацию организма и путем аллергического исследования через 3 дня после иммунизации (до появления поствакцинальной аллергической реакции) можно выявить дополнительное количество больных бруцеллезом животных, нереагирующих по существующему методу.

П р и м е р 3. Опыты на крупном рогатом скоте по выявлению бактерионосителей. Опыты проводят на 90 телках в возрасте 6 - 10 мес, разделенных на 3 группы. Первую группу животных в количестве 10 голов заражают культурой вирулентного штамма бруцелла абортус 54 в дозах 25, 100 и 250 млн. м. к. Через 25 дней после заражения животных исследует аллергически и берут кровь для исследования на бруцеллез в РА, РСК по общепринятой методике. После читки телок иммунизируют вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд. м. к. согласно наставления по применению вакцины. Через 3 дня после иммунизации телок вновь исследуют аллергически и берут кровь для серологического исследования. После этого животных убивают и исследуют бактериологически. Посевы проводят из лимфатических узлов (подчелюстные, околоушные, заглоточные, предлопаточные, подколенные, надвымянные, средостенные, тазовые и крестцовые) печени, селезенки, почек, яичников и костного мозга на печени-пептонный глюкозо-глицериновый бульон и печеночно-пептонный глюкозо-глицериновый агар.

Вторая группа телок в количестве в количестве 45 голов была получена из неблагополучного по бруцеллезу хозяйства. Третью группу (35 голов) составляли телки из благополучного по бруцеллезу хозяйства. Животных этих групп также исследовали аллергически с помощью бруцеллина ВИЭВ и серологически до и через 3 дня после иммунизации вакциной из штамма 82. Результаты исследований отражены в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что из 10 телок, зараженных разной дозой культуры вирулентного штамма 54 при аллергическом исследовании по существующему методу положительно реагировало 5 (50,0% ) голов, при исследовании по новому методу из того же количества исследованных положительно реагировало 8 (80,0% ), голов, т. е. в последнем случае выявлено дополнительно 30,0% животных, при бактериологическом исследовании которых кроме вакцинного штамма выделена и вирулентная культура бруцелла абортус 54. Во второй группе из 45 телок, полученных из неблагополучного по бруцеллезу хозяйства, при аллергическом исследовании по существующему методу положительно реагировало 1 (2,2% ) голов, по предлагаемому методу 4 (8,8% ). При бактериологическом исследовании органов убитых телок (2 головы из 4-х) была выделена кроме вакцинного штамма 82 и вирулентная культура бруцелл. Серологически животные не реагировали. Телки, полученные из благополучного по бруцеллезу хозяйства (третья группа), при аллергическом и серологическом исследовании реагировали отрицательно.

Таким образом, предлагаемый способ выявления бактерионосительства, основанный на аллергическом исследовании животных через 3 дня после иммунизации их вакциной из штамма 82 (до появления поствакцинальной аллергии) дает возможность выявить дополнительное количество больных бруцеллезом животных (6,6 - 33,3% ) нереагирующих на бруцеллин при исследовании по существующему методу (прототип).

Технико-экономическая эффективность предложения заключается в том, что своевременное выявление бактерионосителей и изоляция их в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота с применением предложенного способа в комплексе оздоровительных мероприятий пробив бруцеллеза, позволяет более ускоренно ликвидировать бруцеллез в неблагополучных хозяйствах. Одновременно повысится эффективность вакцинации за счет того, что в вакцинированных стадах не будут скрыто больные бруцеллезом животные, которые, как правило, после отела коров начинают положительно реагировать на бруцеллез. (56) Наставление по применению сухой живой вакцины из штамма 82 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота. 10.11.88.

Результаты изучения и производственного испытания аллергического метода диагностики у крупного рогатого скота и северных оленей.

Материалы к заседанию Научно-технического совета МСХ СССР, М. , 1988.

Использование : ветеринария. Сущность изобретения : невакцинированных животных иммунизируют вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд. микробных клеток. Через 3 - 4 дня проводят обычное аллергическое исследование. Считают положительно реагирующих скрытыми бактерионосителями. 3 табл.

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА путем аллергического исследования невакцинированных животных, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, животных предварительно иммунизируют вакциной из штамма 82, а аллергическое исследование проводят через 3 - 4 дня.