ГАЛОИДСОДЕРЖАЩИЕ 3'-АМИДОПРОИЗВОДНЫЕ(1'R,5'R)-3' -АЗА-1'- (2-АМИНО-1,6- ДИГИДРО-6- ОКСОПУРИНИЛ-9) -3'- ДЕЗОКСИГЕКСОПИРАНОЗИЛ -6'- БЕНЗОАТА В КАЧЕСТВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ НЕОБРАТИМЫХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ Российский патент 1995 года по МПК C07H19/16 C12N9/99 

Описание патента на изобретение RU2039065C1

Изобретение относится к новым химическим соединениям галоидсодержащим 3'-амидопроизводным (1'R, 5'R) -3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-де-зоксигексопиранозил- 6'-бензоата общей формулы I:
R-O где R1 FSO2 или BrCH2-
R2= или в качестве специфических необратимых флуоресцентных ингибиторов РНК-полимеразы.

Соединение общей формулы I могут найти применение в биохимии, биофизике и молекулярной биологии для изучения строения и механизма действия РНК-полимеразы с помощью спектрофлуориметрии.

Наиболее близким к описываемым является известное соединение (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-дезокси-3'- (2-гидроксибензамидо)гексопиранозил-6'-трифосфат (V), который оказывает специфическое ингибирующее действие на РНК-полимеразу и обладает флуоресцентными свойствами.

Однако данное соединение оказывает недостаточно эффективное ингибирующее действие на фермент и не содержит в составе молекулы реакционноспособной группировки, что существенно ограничивает область его применения.

Целью описываемого изобретения является поиск новых соединений в ряду галоидсодержащих 5'-замещенных 3'-амидопроизводных (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозы оказывающих эффективое ингибирующее действие на РНК-полимеразу и обладающих флуоресцентными свойствами.

Цель достигается описываемыми новыми химическими соединениями галоидсодержащими 3'-амидопроизводными (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксоп- уринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-бензоата вышеприведенной общей формулы I в качестве специфических необратимых флуоресцентных игнибиторов РНК-полимеразы.

Описываемые соединения общей формулы I получают способом, основанным на известной реакции диальдегидного производного, полученного периодатным окислением соответствующего 5'-замещенного рибонуклеозида с моноацилгидразином и заключающимся во взаимодействии окисленных периодатом натрия гуанозин-5'-[4-(фторсульфонил- или бромметил)бензоата] с гидразидами 2-гидроксибензойной или 5-(диметиламино)нафталин-1-сульфокислоты в литий-ацетатном буфере при рН 5.

П р и м е р 1. (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксо-пуринил-9)-3'-дезок- си- 3'-/5-(диметиламино)нафталин-1-сульфамидо/гексопиранозил-6'-/4- (фторсульфонил)бензоат [1]
К раствору 47 мг (0,22 ммоль) периодата натрия в 0,5 мл воды при 4оС и интенсивном перемешивании приливают раствор 94 мг (0,2 ммоль) гуанозин-5'-/4-(фторсульфонил)-бензоата/ в 1 мл смеси вода-диоксан (2:3, об.). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, защищая от света, затем добавляют ≈0,05 мл этиленгликоля и дополнительно перемешивают в течение 0,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляют ≈1 мл безводного этанола, полученную суспензию охлаждают до температуры 4оС и центрифугируют. Супернатант отделяют и упаривают при пониженном давлении до объема ≈0,2 мл. Остаток смешивают с 1 мл охлажденного безводного этанола, выпавший осадок отделяют центрифугированием. Супернатант представляет собой раствор диальдегидного производного аденозин-5'-[4-фторсульфонил)бензоата] который без дополнительной очистки используют на следующей стадии.

К вышеуказанному раствору диальдегидного производного прибавляют ≈0,05 мл 3 М литий-ацетатного буфера (рН 4,5) и затем при интенсивном перемешивании раствор 53 мг (0,204 ммоль) 5-(диметиламино)нафталин-1-сульфогидразида в 2 мл диоксана. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре, упаривают при пониженном давлении до объема ≈1 мл, добавляют 2 мл воды и оставляют при 4оС на 15 ч. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, перекристаллизовывают из смеси диоксан-этанол-вода, высушивают в вакууме в присутствии фосфорного ангидрида. Получают 61 мг целевого продукта (выход 42%).

Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице.

П р и м е р 2. (1'R, 5'R)-3'-Аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-дезок-си-3'-/5- (диметиламино(нафталин-1-сульфамидо/гексопиранозил-6'-/4-(бромметил) бензоат/ (II).

В условиях, аналогичных описанным в примере 1, используя 96 мг (0,2 ммоль) гуанозин-5'-[4-(бромметил)бензоата] получают 76 мг целевого продукта (выход 51%).

Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице.

П р и м е р 3. (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-дезок-си-3'- (2-гидроксибензамидо)гексопиранозил-6'-/4-(фторсульфонил)бензоат/ (III).

В условиях, аналогичных описанным в примере 1, используя 32 мг (0,21 ммоль) 2-гидроксибензамида, получают 49 мг целевого продукта (выход 38%).

Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице.

П р и м е р 4. (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6-дигидро-6-окопиринил-9)-3'-дезокси-3'- (2-гидроксибензамидо)гексопиранозил-6-[4-(бромметил)бензоат] (IV).

В условиях, аналогичных описанным в примере 1, используя 96 мг (0,2 ммоль) гуанозин-5'-/4-(бромметил)бензоата/ и 32 мг (0,21 ммоль) 2-гидроксибензамида, получают 54 мг целевого продукта (выход 43%).

Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице.

Изучение ингибирующего действия описанных соединений на РНК-полимеразу проводили следующим образом.

ДНК-зависимую РНК-полимеразу фага Т7 выделяли из штамм-продуцента E.Coli известным способом. Активность фермента определяли по образованию [32P] РНК из [32P] нуклеозид-5'-трифосфатов.

Смесь для преинкубации фермента с ингибитором (общий объем 10 мкл) содержит 50 мМ Трис-НСl (рН 7,8); 10 мМ 5 мМ LiCl; 10 мМ меркаптоэтанол; фермент 0,2-0,5 мкг в пробе; изучаемое соединение в виде 10 мМ раствора в диметилформамиде вносят в среду для получения раствора требуемой концентрации (0,4 мМ). Параллельно ставят контрольную пробу на ингибирующее действие диметилформамида в отсутствие ингибитора. Преинкубацию фермента с ингибитором проводят при комнатной температуре. Через определенные промежутки времени (5-30 мин) к пробам добавляют по 15 мкм смеси, содержащей (в том же буферном растворе): плазмиду PGEM-2 ("Promega Biochem, США) 20-40 мкг/мл АТФ УТФ, ЦТФ и ГТФ по 0,4 м/моль/мл [α-32P] АТФ или [α-32Р] УТФ (200000 имп./мин на пробу). Реакцию проводят при 37оС в течение 20 мин. Определение количества образовавшейся РНК (кислотонерастворимого материала) проводят известным способом.

Значение Ккаж определяли из графика зависимости ln Ai/Ao от времени преинкубации t, где Ai и Aо активность фермента в присутствии и в отсутствие ингибитора, соответственно.

Используемый препарат ДНК-зависимой РНК-полимеразы фага Т7 имеет активность 130000-160000 ед. и характеризуется следующими значениями Кm для нуклеозид-5'-трифосфатов: Km ГТФ 0,16 мМ, Km АТФ 0,04 мМ, Km ЦТФ 0,08 мМ, Km УТФ 0,06 мМ. Инициирующим реакцию нуклеозидтрифосфатом является ГТФ.

Эффект ингибирования РНК-полимеразы описываемыми соединениями увеличивается с течением времени и не уменьшается после их удаления из среды преинкубации (диализ), что указывает на необратимое связывание ингибитора с ферментом, При совместной преинкубации соединений I-IV с ГТФ (субстрат РНК-полимеразы) наблюдают защитный эффект от действия ингибиторов, что указывает на их специфическое взаимодействие с активным центром фермента. Ингибирование РНК-полимеразы соединениями I-IV в концентрации 0,4 мМ охарактеризовано константами Ккаж.

Для описываемых соединений I,II,III и IV Ккаж 0,14, 0,10, 0,04 и 0,08 мин-1 соответственно.

Описываемые соединения I-IV оказывают выраженное необратимое ингибирующее действие на РНК-полимеразу. Известное соединение V является обратимым ингибитором данного фермента (К10,9 мМ).

Похожие патенты RU2039065C1

название год авторы номер документа
АЗИДОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФОНИЛГИДРАЗИНЫ В КАЧЕСТВЕ ПОЛУПРОДУКТОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИЛИТИЕВЫХ СОЛЕЙ (1`R, 5`R) -3`-АЗА-1` -(2-АМИНО -1,6-ДИГИДРО-6-ОКСОПУРИНИЛ-9) -3`-ДЕЗОКСИ-3`- (АЗИДОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФАМИДО) -ГЕКСОПИРАНОЗИЛ -6`- ТРИФОСФАТОВ - СПЕЦИФИЧЕСКИХ ФОТОАКТИВИРУЕМЫХ НЕОБРАТИМЫХ ИНГИБИТОРОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ 1991
  • Хропов Ю.В.
  • Мишин А.А.
  • Селиверстов В.О.
  • Кулагин С.В.
  • Кочетков С.Н.
RU2036903C1
ТРИЛИТИЕВЫЕ СОЛИ (1`R,5`R)-3`-АЗА-1`- (2-АМИНО-1,6-ДИГИДРО -6-ОКСОПУРИНИЛ-9) -3`-ДЕЗОКСИ-3`- (АЗИДОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФАМИДО) ГЕКСОПИРАНОЗИЛ-6`-ТРИФОСФАТОВ В КАЧЕСТВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ФОТОАКТИВИРУЕМЫХ НЕОБРАТИМЫХ ИНГИБИТОРОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ 1991
  • Хропов Ю.В.
  • Мишин А.А.
  • Селиверстов В.О.
  • Кулагин С.В.
  • Кочетков С.Н.
RU2036928C1
4-АЗИДОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФОНИЛХЛОРИД КАК ПОЛУПРОДУКТ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИЛИТИЕВОЙ СОЛИ (1`R,5`R)-3` -АЗА-1`-(2-АМИНО -1,6-ДИГИДРО -6-ОКСОПУРИНИЛ-9) -3`-ДЕЗОКСИ -3`-(4-АЗИДОНАФТАЛИН -1-СУЛЬФАМИДО) ГЕКСОПИРАНОЗИЛ -6`-ТРИФОСФАТА - СПЕЦИФИЧЕСКОГО ФОТОАКТИВИРУЕМОГО НЕОБРАТИМОГО ИНГИБИТОРА РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ 1991
  • Кулагин С.В.
  • Селиверстов В.О.
  • Хропов Ю.В.
  • Мишин А.А.
  • Кочетков С.Н.
RU2036902C1
СОЛИ 3'-АМИДОПРОИЗВОДНЫХ (1'R,5'R)-3'-АЗА-1'-(6-АМИНОПУРИНИЛ-9)-3'- ДЕЗОКСИГЕКСОПИРАНОЗИЛ-6'-ДИФОСФАТА В КАЧЕСТВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ МИОЗИНОВОЙ АДЕНОЗИН 5'-ТРИФОСФАТАЗЫ 1997
  • Баранова Л.А.
  • Хропов Ю.В.
  • Пронько Г.М.
  • Петушкова Е.В.
RU2131435C1
ПРОИЗВОДНЫЕ 5`-БЕНЗОИЛГУАНОЗИНА В КАЧЕСТВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ НЕОБРАТИМЫХ ИНГИБИТОРОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ 1990
  • Хропов Ю.В.
  • Пинчук Н.Я.
  • Баранова Л.А.
  • Туницкая В.Л.
  • Кочетков С.Н.
RU2035468C1
ЛИТИЕВЫЕ СОЛИ (1'R,5'R)-3'-АЗА-3'-(АЗИДОНАФТАЛИН-1-СУЛЬФАМИДО)-1'-(6-АМИНОПУРИНИЛ-9)-3'- ДЕЗОКСИГЕКСОПИРАНОЗИЛ-6'-ДИ-ИЛИ-ТРИФОСФАТОВ КАК СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФОТОАКТИВИРУЕМЫЕ НЕОБРАТИМЫЕ ИНГИБИТОРЫ NA,К-АДЕНОЗИНТРИФОСФАТАЗЫ 1997
  • Хропов Ю.В.
  • Мишин А.А.
  • Селиверстов В.О.
  • Кулагин С.В.
  • Лопина О.Д.
RU2130943C1
ИНГИБИТОР NO-ЗАВИСИМОЙ АКТИВАЦИИ РАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ ГУАНИЛАТЦИКЛАЗЫ 2001
  • Пятакова Н.В.
  • Хропов Ю.В.
  • Бусыгина О.Г.
  • Северина И.С.
  • Преображенская М.Н.
RU2188865C1
2-(2-АМИНО-1,6-ДИГИДРО-6-ОКСОПУРИН-9-ИЛ)-МЕТОКСИ-3-ГИДРОКСИ-1-ПРОПАНИЛ-L-ВАЛИНАТ, ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ СОЛЬ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ГИДРОКСИ- И/ИЛИ АМИНОЗАЩИЩЕННЫЙ 2-(2-АМИНО-1,6-ДИГИДРО-6-ОКСОПУРИН-9-ИЛ)-МЕТОКСИ-3-ГИДРОКСИ-1-ПРОПАНИЛ-L-ВАЛИНАТ 1995
  • Джон Дж.Нестор
  • Скотт В.Вомбл
  • Ханс Мааг
RU2133749C1
Литиевая соль @ -хлорацетилгидразона оксогуанозин-5-трифосфата для специфического ингибирования аденилатциклазной активности,стимулируемой гуаниловыми нуклеотидами 1981
  • Хропов Юрий Валентинович
  • Скурат Александр Владимирович
  • Богомолова Ольга Аркадьевна
  • Гуляев Никита Николаевич
SU1028675A1
Способ получения производных 8-азапурин-6-она 1974
  • Барбара Джойс Браутон
  • Бриан Джон Лардж
  • Стюарт Малькольм Маршалл
  • Дэвид Лорд Пейн
  • Кеннет Роберт Гарри Вулдридж
SU526292A3

Иллюстрации к изобретению RU 2 039 065 C1

Реферат патента 1995 года ГАЛОИДСОДЕРЖАЩИЕ 3'-АМИДОПРОИЗВОДНЫЕ(1'R,5'R)-3' -АЗА-1'- (2-АМИНО-1,6- ДИГИДРО-6- ОКСОПУРИНИЛ-9) -3'- ДЕЗОКСИГЕКСОПИРАНОЗИЛ -6'- БЕНЗОАТА В КАЧЕСТВЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ НЕОБРАТИМЫХ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ

Использование: в качестве специфических необратимых флуоресцентных ингибиторов РНК-полимеразы. Сущность изобретения: продукт (1′R, 5′R)-3′ аза 1′ (2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9) 3′ дезокси 3′ [5-(диметиламино)нафталин-1-сульфамидо)гексопиранозил 6′ (4-фторсульфонил)бензоат] выход 42% БФ C29H29FN80O8S2, т.пл. 170 172°С (разл.); продукт: (1′R, 5′R)-3′ аза 1′ (2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9) 3′ дезокси 3′ [5-(диметиламино)нафталин-1-сульфамидо]гексопиранозил 6′ [4-(бромметил)бензоат] выход 51% БФ C30H31BrN8O8S, т.пл. 176 178°С (разл.); продукт: (1′R, 5′R)-3′ аза 1′ (2-амино-1,6-дигидро-6-оксопуринил-9) 3′ дезокси 3′ (2-гидроксибензамидо)гексопиранозил 6′ [4-(фторсульфонил)бензоат] выход 38% БФ C24H22FN7O10S, т.пл. 160°С (разл.). Продукт: (1′R, 5′R)-3′ аза 1′ (2-амино-1,6-дигидро 6′ оксопуринил-9) 3′ дезокси 3′ (2-гидроксибензамидо)гексопиранозил 6′ [4-(бромметил)бензоат] выход 43% C25H24BrN7O8, т.пл. 168 170°С (разл.) 1 табл.

Формула изобретения RU 2 039 065 C1

Галоидсодержащие 3'-амидопроизводные (I', R, 5' R)-3'-аза-1'-(2-амино-1,6- дигидро-6-оксопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил-6'-бензоата общей формулы

где R1 FSO2 или BrCH2;


в качестве специфических необратимых флуоресцентных ингибиторов РНК-полимеразы.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1995 года RU2039065C1

Акбаров А.Х., Туницкая В.Л
и др
Способ восстановления хромовой кислоты, в частности для получения хромовых квасцов 1921
  • Ланговой С.П.
  • Рейзнек А.Р.
SU7A1

RU 2 039 065 C1

Авторы

Хропов Ю.В.

Баранова Л.А.

Туницкая В.Л.

Кочетков С.Н.

Даты

1995-07-09Публикация

1991-01-24Подача