СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКАН-ХИТОЗАНОВОГО КОМПЛЕКСА Российский патент 1995 года по МПК C08B37/08 C12P19/04 

Изобретение относится к процессу получения глюкан-хитозанового комплекса из биомассы (мицелия) микроскопических грибов, применяющегося для решения экологических задач, в первую очередь для создания композиционных материалов, используемых для водоочистки, в медицине, сельском хозяйстве и пищевой промышленности.

В общем объеме биотехнологической продукции значительная доля приходится на промышленную микробиологию. При этом производство большинства производимых ею продуктов антибиотики, ферменты, органические кислоты, основано на процессах культивирования микроскопических грибов. В этой связи особую остроту приобретают вопросы утилизации крупнотоннажных отходов этих производств, в первую очередь, промышленных стоков и грибного мицелия. Несмотря на солидный возраст ряда промышленных биотехнологий вопросы утилизации отходов остаются практически не решенными. В то же время известно, что клеточная стенка многих микроскопических грибов содержит значительные количества хитина и других полисахаридов, что и обуславливает их привлекательность в качестве многотоннажного источника для получения этих продуктов. Однако, в отличие от глубоко проработанных и находящих широкое практическое применение способов получения хитина и его производных из панцырей ракообразных, технологии выделения хитин-содержащих материалов из микроскопических грибов в настоящее время не применяются.

Известно, что первичные аминогруппы хитозана либо его комплексов обеспечивают селективное связывание ряда ионов металлов, что послужило основанием для использования его в качестве сорбента при очистке сточных вод от ионов токсичных металлов и радионуклеидов. Кроме того, установлено, что клеточные стенки грибов Rhizophusarium. Penicillum chryzogenum являются превосходными сорбентами U (3+) и Th (3+), в десятки раз превосходящими по эффективности ионообменные смолы. Хитозан широко применяется в качестве флокулянта для очистки промышленных и муниципальных сточных вод. Так в Японии в 1976 г. на эти цели было использовано более 500 т хитозана.

Известно, что глюкан-хитозановый грибной комплекс активно сорбирует клетки ряда микроорганизмов, что открывает пути его практического использования в медицине.

Представленные материалы указывают на ряд полезных свойств полимеров клеточной стенки микроскопических грибов, позволяющих рассчитывать на их широкое практическое применение, прежде всего при решении экологических задач, в медицине и пищевой промышленности.

Клеточная стенка микроскопических грибов, актиномицетов и дрожжей формируется на основе комплекса полисахаридов у многих видов указанных микроорганизмов, в частности Neurospora crassa, Pennicillum sp. Aspergi llus sp. внутренний слой клеточной стенки представлен микрофибрилламихитина, погруженными в 1-3 глюкановую матрицу. Они являются природным композиционным полисахаридным материалом. Композиционный материал клеточной стенки обеспечивает ряд биологических функций клетки, а в выделенном виде характеризуется комплексом уникальных свойств, в частности большой удельной поверхностью высокой степенью гидрофильности, наличием ионогенных и комплексообразующих групп. Несмотря на то, что часть полисахаридов клеточной стенки может растворяться в горячей воде, феноле и щелочи, значительная их доля не растворима в щелочи. Так щелочеустойчивая фракция в ряде случаев может составлять до 50% от общей массы клеточной стенки и содержать значительные, нередко до 45% количества хитина, как правило, ассоциированного с другими глюканами.

Известны способы выделения производных глюкан-хитина из мицелия микроскопических грибов, актиномицетов и дрожжей.

Известен способ [1] выделения глюкан-хитозанового комплекса из гриба Mucor rouscii путем предварительной отмывки клеточной стенки этанолом, автоклавирования в 1 н.NaOH в течение 15 мин при 121^оС и последующего экстрагирования водорастворимого хитозана соляной, уксусной или муравьиной кислотой.

Недостатком этого метода является то, что таким путем получают водорастворимые полиэлектролиты, которые невозможно использовать в качестве сорбционных материалов без их дополнительной переработки.

Известен способ получения биосорбентов для биосорбции урана (U6+) [2] путем отмывки от цитоплазмы и белков клеточной стенки Rhixopus ashizus, включающий дезинтегрирование биомассы Rhizosus grhizus, последующую обработку 4% -ным раствором додецилсульфата натрия, центрифугирование и отмывку водой.

Недостатком предлагаемого способа является полная дезинтеграция мицелия, то есть разрушение исходной структуры клеточной стенки, что не позволяет обеспечивать высокие сорбционные характеристики, к примеру, биологически активных веществ.

Известен способ выделения глюкан-хитинового комплекса из дрожжей Saecharomyses corevisiаe [3] путем последовательной обработки клеточных стенок 8 М раствором мочевины, 1 М раствором едкого кали и 33 мМ раствором уксусной кислоты.

Недостатком этого способа является получение сорбционных материалов с низким содержанием хитина, не превышающего 5% от веса клеточной стенки, обладающих невысокими сорбционными характеристиками по ионам тяжелых металлов.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения глюкан-хитозанового комплекса [4] Суть его в том, что путем депротеинизации мицелия гриба Аспергиллус нигер отхода производства лимонной кислоты 2,5%-ным раствором едкого натрия в течение 30 мин и последующего деацетилирования 40% -ным раствором NaOH при 128^оС в течение 6 ч с выходом 55% получают глюкан-хитозановый комплекс клеточной стенки гриба.

Получаемый глюкан-хитозановый комплекс является неплохим сорбционным материалом ряда ионов металлов. Так с его помощью удаляют на 67% ионы Сu²⁺ из раствора с концентрацией 10 мг Cu²⁺/л. Авторами также заявлено, что глюкан-хитозановый комплекс можно использовать в качестве флокулянта полианионита альгината натрия, изготавливать из него мембраны и использовать для иммобилизации на нем лизоцима.

Недостатками известного способа получения глюкан-хитозанового комплекса являются:
невозможность получения достаточно чистого глюкан-хитозанового комплекса, поскольку в рамках предлагаемого процесса не удается полностью удалять белки, неорганические соли и пигменты клеточных стенок грибов;
длительная обработка исходного сырья при высокой температуре и концентрации щелочи приводит к деструкции клеточных стенок грибов, что существенно ухудшает сорбционные характеристики получаемых продуктов;
предлагаемые в прототипе параметры проведения процесса щелочного деацетилирования хитина клеточной стенки не позволяет регулировать степень деацетилирования, то есть получать материалы с желаемым содержанием свободных аминогрупп хитозана;
совершенно не подаются обработке по предлагаемому способу образцы актиномицетов и ряда пеницилумов в виде высокой исходной зольности мицелия, а также невысокой механической прочности клеточных стенок. В результате такой обработки происходит полная деструкция клеточных стенок.

Технический результат, получаемый при осуществлении предлагаемого изобретения, заключается в сокращении времени дезацетилирования глюкан-хитинового комплекса, повышении частоты получаемых продуктов, сохранении нативной структуры клеточной стенки, и как результат повышения эксплуатационных характеристик и расширении области практического применения, в том числе при решении экологических задач, в пищевой промышленности и медицине.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что в способе получения глюкан-хитозанового комплекса, включающем депротеинизацию мицелия хитинсодержащего микроскопического гриба обработкой его разбавленным раствором едкого натра и деацетилирование концентрированным раствором едкого натра при повышенной температуре, используют мицелий грибов Aspergillus niger, Blacheslia trispora, Actinomyces roseum, P.Phrysogenum, депротеинизацию осуществляют 2-4 обработками при 60-90^оС, после чего реакционную массу обрабатывают разбавленным раствором соляной, азотной или орто-фосфорной кислоты и отмывают от жиров и липидов органическим растворителем, а дезацетилирование проводят 20-29%-ным раствором едкого натра при 110-125^оС в течение 30-120 мин.

Заявляемый способ отличается от известного новой последовательностью операций и режимами их проведения. Совокупность предлагаемых режимов операций в их последовательности обеспечивает достижение указанного технического результата.

В табл.1 представлены результаты депротеинизации и деминерализации мицелия Асп.нигер.

В этой таблице образцы 1^хх, 2^хх и 3^хх получены после деминерализации образцов 1,2,3, соответственно 2н. соляной кислотой, для депротеинизации использовали 8% -ный раствор NaOH. Содержание белка определяли по методу Лоури, основанному на окрашивании белка реактивом фолина с последующим измерением поглощения раствора при 750 нм (низкие концентрации) или 500 нм (высокие концентрации). Содержание белка в растворе определяли по калибровочному графику. Количество меланинов определяли в щелочных экстрактах фотометрически при длине волны 290-300 нм. Как следует из табл.1, наиболее полная отмывка от белков и меланинов достигается лишь после 2-4-кратной отмывки 2 н. едким натром при 60-90^оС, в зависимости от качества сырья. Отмывка при температуре ниже 60^оС существенно удлиняет время обработки. Обработка при температуре выше 90^оС приводит к сильному пенообразованию и выбросу реакционной массы из реактора.

Электронно-микроскопические исследования показали, что после щелочной обработки сохраняется целостность мицелия, однако не удается избавиться от ряда солей (технологической природы), что подтверждается высокой зольностью полученных образцов. Деминерализацию образцов проводили 2н, раствором соляной кислоты в течение 3 ч при комнатной температуре и перемешивании. Как следует из табл. 1, после такой обработки зольность образцов существенно уменьшалась.

В табл. 2 представлены данные по деацетилированию полученного глюкан-хитинового комплекса A.niger, P.chrysogenum. Blakeseia taspora, Actinomycea sp.

Повышение концентрации щелочи выше 29% экономически нецелесообразно. Снижение концентрации щелочи ниже 20% значительно удлиняет процесс деацетилирования. Так же и снижение температуры ниже 110^оС значительно удлиняет процесс деацетилирования. Повышение температуры выше 125^оС приводит к вскипанию раствора и выбросу реакционной массы из реактора. Степень деацетилирования хитина определяется временем реакции деацетилирования и природой исходного сырья и может варьироваться в широком пределе от 37 до 89% в пересчете на количество хитина в образце. Как следует из данных, представленных в табл. 2, увеличение времени реакции более 120 мин приводит к заметной деструкции клеточных стенок при 180 мин и практически полному их разрушению при проведении процесса в течение 360 мин, как это предлагается в прототипе. Из табл. 2 также следует, что с увеличением степени деацетилирования хитина возрастает доля кислоторастворимой фракции глюкан-хитозанового комплекса. Из данных потенциометрического титрования и ЯМР-спектрометрических измерений следует, что этим компонентом является поли(Д-глюкозамин) хитозан.

Строение и состав полученного глюкан-хитозанового комплекса доказано методами ЯМР- и ИК-спектроскопии, потенциометрического и кондуктометрического титрования.

На фиг. 1 и табл.3 представлены спектр ЯМР С-13 и Н-1, а также химические сдвиги ядер С-13 и Н-1 глюкозамина и глюкан-хитин-хитозанового комплекса Асп.нигер.

Химические сдвиги при С-2 углеродном атоме глюкопиранозного кольца (55,54 м. д. и 58,07 м.д.). характерны для углеродного атома, связанного с аминогруппой. На фиг. 2 представлен ИК-спектр глюкан-хитин-хитозанового комплекса Асп.нигер. Колебательный спектр хитозан-глюканового образца представляет из себя наложение спектра полимера, содержащего NH- и CONH-группы, на спектр, характерный для целлюлозы. Так, область частот 3500-3200 см^-1 соответствует NH и ОН-валентным колебаниям, область 3200-3000 см^-1 колебаниям, вызванным резонансом Ферми между амид-1 и амид-II. Область 2970-2920 см^-1 соответствует валентным колебаниям СН-групп. Интенсивные полости в области 1650-1550 см^-1 амид-1, амид-II, вызваны валентными колебаниями амидных группировок. Взаимодействию амид-III с валентными СН₂-группами соответствует поглощение в области (1400-1300)см^-1. Спектр глюкан-хитин-хитозанового комплекса в области меньших частот соответствует спектру, характерному для декстрана и целлюлозы. Приведенные данные подтверждают соответствие химической природы получаемого полисахаридного комплекса данным колебательной спектроскопии.

П р и м е р 1. 150 г влажного мицелия Асп.нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8% -ного водного раствора NaOH. Нагревание при температуре 90^оС и перемешивании (60 об/мин) продолжают в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют, а полученный на фильтре осадок вновь переносят в реактор, куда приливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при 90^оС и перемешивании повторяют в течение 60 мин. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20.

Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течении 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96% этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 1: 5. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 90-95 г (сухого 18-19 г). 95 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1: 10. Выход глюкан-хитозанового комплекса 65 г (сухого 17 г). Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 2. 150 г влажного мицелия Аспергиллус нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревают при температуре 60^оС при перемешивании (60 об/мин) в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют. Данную процедуру повторяют 4 раза. Далее обработку ведут как в примере 1. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20. Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течение 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96%-ным этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 15. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 100-105 г (сухого 20-21 г).

92 г полученного глюкан-хитинового комплекса Аспергиллус нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1 л 20%-ного водного раствора NaOH. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивание ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1: 10. Выход глюкан-хитозанового комплекса 18 г. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 83%
П р и м е р 3. 150 г влажного мицелия Аспергиллус нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при температуре 75^оС и перемешивание (60 об/мин) ведут в течение 60 мин. После чего содержимое реактора фильтруют. Данную процедуру повторяют 3 раза. Далее обработку ведут как в примере 1. Полученный продукт фильтруют, промывают на фильтре водой 3 раза при соотношении мицелий-вода 1:20. Полученный продукт загружают в реактор и заливают 1,5 л 2н. соляной кислоты. Деминерализацию продукта кислотой ведут при комнатной температуре в течение 3 ч, затем полученный продукт фильтруют и промывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральных значений рН промывных вод. Для обезжиривания полученный продукт экстрагируют в реакторе 96%-ным этиловым спиртом при комнатной температуре и перемешивании в течение 18 ч. Соотношение мицелий-этиловый спирт 1:5. Полученный продукт фильтруют и отправляют на деацетилирование. Выход влажного глюкан-хитинового комплекса 95-100 г (сухого 19-20 г). 100 г полученного глюкан-хитинового комплекса Аспергиллус нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29% -ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 120 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 5 л и добавляют при перемешивании 4 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 ч постепенно приливают 4%-ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода (1:10). Выход глюкан-хитозанового комплекса 17,5 г (сухого). Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе 85%
П р и м е р 4. 150 г в
лажного мицелия Асп.нигер, отхода производства лимонной кислоты, загружают в химический реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного водного раствора NaOH. Далее обработку ведут как в примере 1, только вместо соляной кислоты используют 3%-ный водный раствор орто-фосфорной кислоты, а деацетилирование проводят при 110^оС. Выход глюкан-хитозанового комплекса составляет 16 г. Внешний вид-цельный нативный мицелий. Степень диацетилирования хитина в комплексе составляет 87%
П р и м е р 5. 150 г влажного мицелия гриба Асп.нигер отхода производства лимонной кислоты загружают в реактор емкостью 2 л и заливают 1,5 л 8%-ного NaOH, нагревают при температуре 90^оС в течение 1 ч. Далее обработку ведут как в примере 1, только вместо соляной кислоты используют 3%-ный раствор азотной кислоты. Выход глюкан-хитозанового комплекса составляет 16,5 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 6. Аналогичен примеру 1 до стадии деацитилирования. Далее 95 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы ведут при 125^оС в течение 60 мин. Далее обработку ведут как в примере 1. Выход конечного глюкан-хитозанового комплекса составил 18,5 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 60%
П р и м е р 7. Процесс получения глюкан-хитин-хитозанового комплекса ведут как в примере 6, только время деацетилирования составляет 30 мин. Выход конечного сухого глюкан-хитозанового комплекса составил 20 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 37%
П р и м е р 8. Процесс получения глюкан-хитозанового комплекса ведут как в примере 1, только время деацетилирования составляет 180 мин. Выход конечного сухого продукта составил 14 г. Внешний вид частично разрушенный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 89%
П р и м е р 9. Процесс получения глюкан-хитозанового комплекса ведут как в примере 1, только при деацетилировании используют 20%-ный NaOH. Выход конечного сухого продукта составил 19 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацитилирования хитина в комплексе составляет 60%
П р и м е р 10 (прототип). 95 г глюкан-хитинового комплекса, полученного при обработке 2,5%-ным раствором NaOH мицелия в течение 30 мин, помещают в реактор емкостью 2 л и приливают 1,0 л 40%-ного водного раствора NaOH. Далее обработку в течение 360 мин ведут при температуре 128^оС. Выход глюкан-хитозанового комплекса составил 50 г. Внешний вид полностью разрушенный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 80%
П р и м е р 11. В реактор емкостью 80 л загружают 6 кг мицелия гриба Асп. нигер и приливают 60 л 8%-ного водного раствора NaOH. Нагревание при 90^оС и периодическом перемешивании проводят в течение 60 мин. Полученную биомассу фильтруют на вакуум-фильтре и промывают на фильтре 150 л воды. Осадок переносят в реактор и операцию отмывки щелочью повторяют. Полученный продукт фильтруют на вакуум-фильтре и промывают водой до значения рН промывных вод 8,8-7,5. Осадок переносят в реактор и приливают 60 л 2н. соляной кислоты. При периодическом перемешивании проводят обработку продукта в течение 120 мин при комнатной температуре. Реакционную массу фильтруют и промывают дистиллированной водой до значения промывных вод 6,5-7,0. 4,9 г полученного глюкан-хитинового комплекса Асп.нигер помещают в реактор емкостью 80 л и приливают 50 л 29%-ного водного раствора едкого натра. Нагревание реакционной массы при 125^оС и перемешивании ведут в течение 90 мин. Затем содержимое реактора фильтруют, используя в качестве фильтрующего материала стеклоткань либо хлопчатобумажную ткань Бельтинг. Полученный осадок переносят в емкость объемом 90 л и добавляют при перемешивании 75 л дистиллированной воды. К полученной суспензии в течение 4 часов постепенно приливают 4% -ный раствор соляной кислоты, доводя значение рН раствора до 6,5-7,0. Нейтрализованный продукт фильтруют и промывают дистиллированной водой при соотношении мицелий-вода 1:10. Полученный на фильтре продукт сушат методом распылительной сушки. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 4,2 кг, сухого 0,8 кг. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет 80%
П р и м е р ы 12-20 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий P.Chrysogenum отход производства антибиотиков. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 63-65 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет от 37 до 89%
П р и м е р ы 21-29 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий Blakeclia trispora отход производства каротина. Выход влажного глюкан-хитозного комплекса составил 65-70 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет от 37 до 71%
П р и м е р ы 30-38 аналогичны примерам 1-9 соответственно, но в процессе используют влажный мицелий Actinomyces roseum отход производства антибиотиков. Выход влажного глюкан-хитозанового комплекса составил 65-68 г. Внешний вид цельный нативный мицелий. Степень деацетилирования хитина в комплексе составляет до 37% Характеристики сорбционной способности сорбентов на основе глюкан-хитозанового полимерных комплексов Асп.нигер, P.Chrysogenum. B.trispora, A.roseum представлены в табл. 4.

Примечание к табл.4.

Сорбцию ионов металлов проводили из растворов солей Pb (NO₃) Hg(Ac)₂, K₂Cr₂O₇, CuSO₄, с исходной концентрацией 0,52 мг/мл, красителей 70 мг/мл, белка 1,0 мг/мл.

2) АЗ глюкан-хитозановый комплекс Асп.нигер, номер соответствует примеру.

3) ПЗ глюкан хитозановый комплекс P.chrysogenum, номер соответствует примеру;
4) БЗ глюкан-хитозановый комплекс В.trispora, номер соответствует примеру.

5) СП глюкан-хитозановый комплекс А.roseum, номер соответствует примеру.

6) краситель активный синий и активный красный.

7) белок бычий сывороточный альбумин.

Предлагаемый способ получения глюкан-хитозанового композиционного материала позволяет сохранять нативное строение клеточной стенки, регулировать степень деацетилирования хитиновых волокон без их заметной деструкции, что позволяет получать материалы с высокими эксплуатационными характеристиками.

Получаемый по разработанному методу глюкан-хитозановый комплекс является высокоэффективным сорбционным материалом ионов металлов, органических красителей и полупродуктов, пестицидов, нуклеиновых кислот и других биологически активных веществ. Его можно использовать в качестве флокулянта, носителя для иммобилизации ферментов и клеток микроорганизмов, в качестве диэтарной пищевой добавки, при создании полимерных композиционных материалов, в медицине, в ветеринарии.

Использование: в качестве сорбентов ионов металлов при водоочистке, в медицине, сельском хозяйстве и пищевой промышленности. Сущность изобретения: осуществляют депротеинизацию мицелия /биомассы/ хитинсодержащих микроскопических грибов Aspergillus niger, blakeslia trispora, Actinomyces roseum, P. chrysogenum обработкой последовательно 2-4 раза разбавленным раствором едкого натра при 60-90°С, затем проводят деминерализацию разбавленным раствором соляной, азотной или орто-фосфорной кислот, отмывку от жиров и липидов и деацетилирование полученного продукта 20-29%-ным водным раствором едкого натра 30-120 мин при 110-125°С. 2 ил. 4 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКАН-ХИТОЗАНОВОГО КОМПЛЕКСА, включающий стадии депротеинизации мицелия хитинсодержащего микроскопического гриба обработкой его разбавленным раствором едкого натра и деацетилирования концентрированным раствором едкого натра при повышенной температуре, отличающийся тем, что используют мицелий грибов, выбранных из группы, включающей Aspergillus niger, Blakeslia trispora, Actinomyces roseum, P. chrysogenum, а депротеинизацию осуществляют двумя четырьмя обработками при 60 90^oС, после чего реакционную массу обрабатывают разбавленным раствором соляной, азотной или ортофосфорной кислот и отмывают от жиров и липидов органическим растворителем, а деацетилирование проводят 20 29%-ным раствором едкого натра при 110 - 125^oС в течение 30 120 мин.