СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИАГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1996 года по МПК A61K31/415 

Изобретение относится к области медицины, конкретно, к применению соединения, для которого известна гипогликемическая активность, в качестве средства, обладающего антиагрегационным действием, благодаря чему оно после проведения клинических испытаний может быть предложено для лечения диабета и диабетогенных ангиопатий.

Диабет является одной из наиболее распространенных болезней века. По прогнозам экспертов Всемирной организации здравоохранения к 2000 году в мире будет 120 миллионов больных диабетом. В центре внимания современной диабетологии стоит проблема борьбы с сосудистыми осложнениями диабета. Основным в лечении и профилактике диабетических ангиопатий является стабильная компенсация сахарного диабета независимо от его клинического типа. Однако применяемые в настоящее время антидиабетические средства не позволяют достичь постоянной нормогликемии, в связи с чем факторы риска возникновения и прогрессирования диабетических ангиопатий полностью не устраняются. В случае развившихся ангиопатий используется симптоматическая терапия сосудистых осложнений, в том числе назначение препаратов антиагрегационного действия - трентала и ацетилсалициловой кислоты. Побочные действия последней ограничивают ее широкое и длительное применение.

Особенно перспективны для лечения диабетических осложнений и вызывают обоснованный интерес препараты, оказывающие одновременно влияние на патогенетические звенья как основного (сахарный диабет) заболевания, так и его сосудистых осложнений, т.е. сочетающие гипогликемический эффект с микроваскулярным действием.

К таким препаратам относится мидаглизол. Его сахароснижающее действие отмечается через 0,5-1 ч после введения и сохраняется до 5 ч, максимальный эффект наблюдается через 1-1,5 ч. При недельном введении он ингибирует агрегацию тромбоцитов. Оценивается этот препарат как сахароснижающий препарат короткого действия.

Другим пероральным гипогликемическим средством, обладающим дополнительно антиагрегантным свойством, является гликлазид (диамикрон), который наряду с выраженным сахароснижающим действием оказывает влияние на систему гемостаза: снижает способность тромбоцитов к агрегации, нормализует нарушенный фибринолитический потенциал сосудистой стенки и процесс фибринолиза, замедленный при сахарном диабете. Гликлазид, как сахароснижающее средство, начинает действовать через 1 час после приема, максимум эффекта наблюдается между 4-м и 8-м часом, продолжительность действия немного меньше 20 часов. Ангиопротективное влияние проявляется лишь после 3-х месяцев лечения и еще более отчетливо через 6-12 месяцев.

Таким образом, применяемые в настоящее время в клинической практике гипогликемические препараты, сочетающие сахароснижающий эффект с микроваскулярным действием не являются совершенными, так как у некоторых из них ангиопротективное влияние проявляется только после 3-12 месяцев после начала приема (гликлазид), другие же из-за непродолжительного гипогликемического эффекта можно отнести к препаратам короткого действия (мидаглизол). Поэтому потребность в препаратах, сочетающих сахароснижающий эффект с ангиопротективным действием, но более эффективных, чем уже применяемые в клинической практике, весьма велика, и создание лекарственных средств с подобным оригинальным механизмом действия является актуальным.

Целью настоящего изобретения явился поиск среди соединений, обладающих гипогликемическим действием, вещества с антиагрегантными свойствами, которое может стать основой для создания нового перорольного средства для лечения сахарного диабета, осложненного ангиопатиями, более эффективного, чем применяемые в клинической практике.

Поставленная цель достигается выявлением у известного производного 9Н-2,3-дигидроимидазо[1,2-а] бензимидазола, обладающего гипогликемической активностью, а именно у дигидрохлорида 9-диэтиламиноэтил-2,3-дигидроимидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I:

выраженного антиагрегационного эффекта, превосходящего таковой ацетилсалициловой кислоты, широко применяемой в медицинской практике в качестве антиагреганта, и гликлазида, наиболее эффективного перорального гипогликемического средства для лечения диабета, осложненного ангиопатиями.

Метод получения и свойства дигидрохлорида I описаны в работе [4] Это соединение представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде. Температура плавления его 257- 258^oС.

В ИК-спектре основания соединения I, а именно 9-диэтиламиноэтил-2,3-дигидроимидазо[1,2-а] бензимидазола, снятого в растворе хлороформа, наблюдается полоса поглощения при 1665 см^-1, которая относится к поглощению внутрициклической связи C=N 2,3-дигидроимидазо[1,2-а]бензимидазольного ядра.

Спектр ПМР основания (CDCl₃), м.д. 0,96 (6Н, т, 2СН₃), 2,55 и 2,73 (6Н, частично накладывающиеся друг на друга квартет и триплет, и CH₂N), 3,78 (4Н, м, циклич. (СН₂)₂), 4,2 (2Н, т, CH₂), 6,82 (4Н, м, ароматич. Н).

Спектр ПМР дигидрохлорида I (D₂O), м.д. 1,29 (6Н, т, 2СН₃), 3,34 (4Н, к, ), 3,68 (2Н, т, CH₂), 4,41 (4Н, с, циклич. (CН₂)₂), 4,6 (2Н, т, сливающийся с сигналом D₂O, CH₂), 7,41 (4Н, м, ароматич. Н).

УФ-спектр 0,0025-ного спиртового раствора соединения I, нм: 217±2, 279±2 и плечо при (282-286)±2.

рН 2,5% -ного водного раствора соединения I (рН-метрически): от 3,7 до 4,2.

Ниже приведены результаты фармакологических исследований соединения I.

Влияние дигидрохлорида I и препаратов сравнения на агрегацию тромбоцитов проводили в опытах in vitro и in vivo.

Агрегационную способность тромбоцитов in vitro изучали методом, заключающимся в регистрации изменения оптической плотности обогащенной тромбоцитами плазмы кроликов (от 2,5 х 10^-8 до 3,0 x 10^-8 кровяных пластинок в 1 мл) при добавлении к последней веществ, индуцирующих агрегацию тромбоцитов, в условиях постоянного перемешивания. В качестве индуктора агрегации использовали динатриевую соль АДФ ("Реанал", Венгрия) в конечной концентрации 2 мкг/мл (3,6 x 10-6 М).

Для оценки антиагрегационного действия вещества к 0,5 мл обогащенной тромбоцитами плазмы крови кроликов породы "Шиншилла" добавляли 0,02 мл вещества, после 5-минутной инкубации с веществом вносили индуктор агрегации. В контрольных экспериментах вместо раствора вещества вносили 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

Антиагрегационный эффект вещества оценивали по величине ЭК₅₀ (концентрация в моль, в которой вещество ингибировало склеивание кровяных пластинок на 50% ). Величину ЭК₅₀ определяли расчетным способом по графику "доза эффект".

Проведенные опыты in vitro позволили установить наличие выраженного антиагрегационного эффекта у исследованного соединения. Как следует из приведенных в таблице 1 данных, соединение I по своей абсолютной антиагрегационной активности превосходит ацетилсалициловую кислоту в 16,4 раза и гликлазид в 37 раз.

Для исследования in vivo проводили моделирование внутрисосудистой агрегации тромбоцитов. Опыты были выполнены на белых нелинейных крысах обоего пола массой 250 350 г, наркотизированных нембуталом (50 мг/кг внутрибрюшинно). Через 30 сек после введения в бедренную вену АДФ (1 мг/кг) из брюшной аорты забирали две порции крови, одну из них стабилизировали формалиновым фиксатором для предотвращения распада тромбоцитных агрегатов, другую фиксатором без формалина. В надосадочной жидкости подсчитывали число тромбоцитов фазовоконтрастным методом. Уровень внутрисосудистой агрегации тромбоцитов определяли по уменьшению числа тромбоцитов в первой пробе по сравнению со второй. Для оценки влияния исследуемого соединения на внутрисосудистую агрегацию кровяных пластинок вещество вводили внутрижелудочно за 30 мин до наркоза животных. Показателем антиагрегационной активности была выбрана величина ЕД₅₀ доза, в которой вещество ингибирует агрегацию тромбоцитов на 50%
В результате исследований установлено, что соединение I оказывает дозозависимое антиагрегационное воздействие, превосходящее по выраженности эффекта в 23,3 раза ацетилсалициловую кислоту (табл.2).

Как известно [4] соединение I обладает гипогликемическим действием. Были дополнительно проведены опыты по сравнению этого эффекта с таковым гликлазида. В результате проведенных экспериментов установлены величины ЕД₃₀ (доза, в которой вещество снижает содержание глюкозы в крови на 30%) для соединения I и гликлазида, а также для гипогликемических препаратов манинила и адебита (табл. 3). Из данных, приведенных в табл. 3, следует, что соединение I по величине ЕД₃₀ соответствует влиянию гликлазида на содержание глюкозы в крови, активнее в 1,5 раза манинила и в 2,4 раза адебита. Оно оказывает длительное сахароснижающее действие: при внутрижелудочном введении в дозе ЕД₃₀ (25 мг/кг) снижает содержание глюкозы в крови на 26-41% в течение более 44 часов.

На модели аллоксанового диабета изучено антидиабетическое действие соединения I и показано, что при однократном введении (внутрижелудочно) вещества в дозе 25 мг/кг максимальное снижение глюкозы на 38% наблюдается на 6-м часу эксперимента. При длительном внутрижелудочном введении вещества I (10 дней, введение 1 раз в сутки в дозе 25 мг/кг) прослеживается тенденция к усилению его гипогликемического действия. Под его влиянием снижение содержания глюкозы в крови опытных животных составило в среднем 47%
Для установления механизма гипогликемического действия соединения I было изучено его влияние на секрецию и сахароснижающий эффект инсулина. В результате проведенных опытов выявлено, что исследуемое вещество увеличивает секрецию инсулина, потенциирует и пролонгирует сахароснижающее действие этого гормона.

Среднесмертельная доза для вещества I, определенная при однократном введении его в желудок белым крысам обоего пола массой 160-200 г, составила
ЛД₅₀ самки 2321,25 мг/кг
ЛД₅₀ самцы 2740,31 мг/кг,
что позволяет отнести это соединение к малотоксичным веществам.

Таким образом, соединение I обладает выраженным антиагрегантным действием. По своей абсолютной антиагрегационной активности (опыты in vitro) оно в 16,4 раза превосходит ацетилсалициловую кислоту и в 37 раз гликлазид. В экспериментах, проведенных по изучению влияния на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов, соединение I оказывает дозозависимое антиагрегационное воздействие, превосходящее по выраженности эффекта в 23,3 раза ацетилсалициловую кислоту.

Кроме того, соединение I проявляет также гипогликемическое действие, которое по выраженности сахароснижающего эффекта соответствует влиянию гликлазида, в 1,5 раза активнее манинила и в 2,4 раза адебита. Отмечено отчетливое антидиабетическое действие этого вещества на животных с экспериментальным аллоксановым диабетом при однократном и длительном (в течение 10 дней) введении его. Установлено, что под влиянием этого вещества происходит увеличение секреции инсулина, потенциирование и пролонгирование его сахароснижающего действия.

Сочетание выраженной антиагрегантной активности соединения I с гипогликемическим действием, увеличение под его влиянием секреции инсулина, потенциирование и пролонгирование сахароснижающего действия этого гормона, низкая токсичность соединения служат обоснованием его применения для лечения сахарного диабета, осложненного ангиопатиями. ТТТ1 ТТТ2

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения диабета и диабетогенных ангиопатий. С целью разработки нового перорального средства для лечения сахарного диабета, осложненного ангиопатиями, изучено антидиабетическое и антиагрегантное действие дигидрохлорида 9-диэтиламиноэтил-2,3-дигидроимидазо[1,2-а] бензимидазола, обладающего гипогликемической активностью. Соединение при однократном введении в дозе 25 мг/кг снижает содержание глюкозы у животных с аллоксановым диабетом на 38%. При 10-дневном введении (ежедневно по 25 мг/кг) гипогликемическое действие соединения увеличивается в 1,5 раза. По силе гипогликемического действия вещество равно гликлазиду, в 1,5 раза превосходит манинил и 2,4 раза адебит, известные сахароснижающие препараты. Продолжительность сахароснижающего действия предлагаемого препарата соответствует длительности гипогликемического действия производных сульфонилмочевины - гликлазида и манинила и в 3 раза превосходит этот параметр производного бутилбигуанида-адебита. Сахароснижающий эффект вещества обусловлен его стимулирующим действием на секрецию инсулина из β-клеток поджелудочной железы, а также потенциирующим (в 2,7 раза) и пролонгирующим (в 1,5 раза) влиянием его на гипогликемическое действие этого гормона. Соединение является активным ингибитором агрегации тромбоцитов и по выраженности антиагрегантного действия в опытах in vitro в 37 раз превосходит гликлазид и в 16,4 раза ацетилсалициловую кислоту. В экспериментах по изучению влияния на внутрисосудистую агрегацию тромбоцитов, соединение оказывает дозозависимое антиагрегационное воздействие, превосходящее по выраженности эффекта в 23,3 раза ацетилсалициловую кислоту. 3 табл.

Антиагрегационное средство, отличающееся тем, что оно представляет собой дигидрохлорид 9-диэтиламиноэтил-2,3-дигидроимидазо (1,2-а)бензимидазола.