ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА MORGANELLA ОТ ДРУГИХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ Российский патент 1996 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к области биотехнологии и медицинской микробиологии и может быть использовано для дифференциации бактерий рода Morganellа от других энтеробактерий при лабораторной диагностике вызываемых ими заболеваний.

Известна питательная среда для дифференциации бактерий рода Proteus и Providencia от других энтеробактерий, содержащая дрожжевой экстракт жидкий (сухой) 100 мл (3 г), хлорид натрия 5 г, натрий гидрофосфат 1 г, L-фенилаланин (LD-фенилаланин) 1 г (2 г), агар 12 г, вода дистиллированная до 1 л (Энтеробактерии. Руководство для врачей. Под ред. Покровского В.И. М. Медицина, 1985, с. 277 278).

Принцип действия среды основан на способности указанных микроорганизмов расщеплять аминокислоту фенилаланин до фенилпировиноградной кислоты и аммиака. Кислота эта бесцветна и для ее обнаружения применяют тест-реактив, содержащий хлорид железа, который присоединяется к фенилпировиноградной кислоте, вызывая зеленое окрашивание.

Недостатком известной среды является невозможность использования ее для непосредственного высева материала от больного (необходима только чистая культура) и отсутствие возможности дифференциации бактерий рода Proteus и Providencia от морганелл.

Технической задачей изобретения является создание питательной среды для дифференциации бактерий родов Proteus, Providencia от морганелл и других энтеробактерий.

Технический результат изобретения заключается в возможности использования предлагаемой среды для непосредственного высева материала больного и ее способности дифференциации бактерий рода Morganella от бактерий родов Proteus, Providencia и других энтеробактерий.

Питательную среду для дифференциации бактерий рода Morganella от других энтеробактерий готовят путем внесения и размешивания в 1 л холодной дистиллированной воды дрожжевого экстракта 2 3 г, хлорида натрия 4 5 г, гидрофосфата натрия 0,5 1 г и агара 30 40 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 1 2 г, гистидин 9 10 г. Стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску. Срок хранения при 4^oC 1 2 недели.

Способ применения данной среды заключается в том, что высевают исследуемый материал или подозрительные колонии, выросшие на дифференциально-диагностических средах, в чашу Петри с предлагаемой средой, равномерно растирая круговыми движениями по поверхности агара, инкубируют посевы при 37^oC в течение 18 24 ч. Через сутки на чашку наносят 5 10 капель 10% водного раствора хлорида железа (трехвалентного). При этом колонии Morganellа окрашиваются в желтый цвет, колонии Proteus и Providencia в темно-зеленый, другие виды энтеробактерий не окрашиваются.

Пример 1. Готовят среду по прописи: в 1 л холодной дистиллированной воды дрожжевого экстракта 2 г, хлорида натрия 4 г, гидрофосфата натрия 0,5 г, агара 30 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 1 г, гистидин 9 г. Стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску.

Проводят высев 60 штаммов Morganella morganii методом бляшек. Инкубируют сутки при 37^oC. После нанесения тест-реактива (хлорид железа) установлено появление желтого окрашивания.

Пример 2. Готовят среду по прописи: в 1 л холодной дистиллированной воды вносят дрожжевой экстракт 3 г, хлорида натрия 5 г, гидрофосфата натрия - 1,0 г, агара 40 г, доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют L-фенилаланин 2 г, гистидин 10 г, стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску.

Проводят высев 117 штаммов различных видов Enterobacteriaceae. После нанесения культур, инкубации в течение суток при 37^oC и внесения тест-реактива установлено появление желтого окрашивания над колониями Morganella, темно-зеленого над колониями Proteus и Providencia, отсутствие изменения цвета над колониями других энтеробактерий. При этом наличие колоний видов Enterobacteriaceae, помимо Proteus и Providencia, не сказывалось на результатах опытов, поскольку у них отсутствует способность продуцировать фенилаланиндезаминазу.

Использование: биотехнология, медицинская микробиология, питательная среда, дифференциация бактерий рода Morganellа от других энтеробактерий. Сущность изобретения: питательную среду для дифференциации бактерий рода Morganella готовят путем внесения и размешивания в 1 л холодной дистиллированной воды дрожжевого экстракта 2 - 3 г, хлорида натрия 4 - 5 г, гидрофосфата натрия - 0,5 - 1 г и агара 30 - 40 г. Доводят до кипения и профильтровывают. Добавляют фенилаланин 1 - 2 г, гистидин 9 - 10 г. Стерилизуют при 112^oC 30 мин. Среда имеет розово-фиолетовую окраску. Исследуемый материал высевают на чашку со средой, инкубируют при 37^oC в течение 18 - 24 ч. Через сутки на чашку наносят 5 - 10 капель 10%-ного водного раствора хлорида железа. При этом колонии Morganellа окрашивают в желтый цвет, колонии Proteus и Providencia - в темно-зеленый, другие виды энтеробактерий не окрашиваются.

Питательная среда для дифференциации бактерий рода Morganella от других энтеробактерий, содержащая дрожжевой экстракт, хлорид натрия, гидрофосфат натрия, агар, фенилаланин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит гистидин при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:
Дрожжевой экстракт 2 3
Хлорид натрия 4 5
Гидрофосфат натрия 0,5 1,0
Фенилаланин 1,5 2,0
Агар 30 40
Гистидин 9 10
Дистиллированная вода 1 л