СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯШУРНЫХ ВАКЦИН Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности, к способу определения иммуногенной активности вирусных вакцин, преимущественно, масляных и эмульгированных против ящура сельскохозяйственных животных.

Для проверки иммуногенной активности вирусных вакцин с масляным адъювантом, в частности, против ящура сельскохозяйственных животных, в настоящее время применяют способ, включающий иммунизацию животных вакцинным препаратом с последующим заражением их контрольным вирусом ящура и определением пятидесятипроцентной иммунизирующей дозы /ИмД₅₀КРС, ИмД₅₀С/.(1)
Недостатком данного способа является его длительность, большие затраты труда и средств. Кроме того, работа с живым вирусом ящура является экологически далеко небезопасной.

Известен также способ определения иммуногенной активности вакцин против ящура сельскохозяйственных животных, в состав которых входит гидрат окиси алюминия /ГОА/ и адъювант сапонин, включающий извлечение специфического антигена из сложной смеси путем замораживания-оттаивания, связывания со штаммоспецифической сывороткой с последующим его отделением от адъюванта центрифугированием и установлением его активности в реакции связывания комплемента /РСК/ (2).

Недостатком данного способа является его неэффективность из-за невозможного извлечения специфического антигена из сложной смеси масел, входящих в состав вакцинного препарата.

Целью изобретения является разработка высокоэффективного и экологически безвредного способа, позволяющего определять иммуногенную активность биопрепарата на любом этапе его хранения в коротко-сжатые сроки с высокой достоверностью полученных результатов.

Указанная цель достигается тем, что извлечение специфического антигена из сложной смеси проводят путем тщательного встряхивания с хлороформом или четыреххлористым углеродом, которые добавляют к вакцине в количестве 50 70% от объема.

Примеры осуществления способа.

Пример 1
К эмульсионной бивалентной вакцине против ящура типа О, А серии 242 добавляют хлороформ в количестве 50% к объему вакцины. Смесь тщательно встряхивают, а затем с целью отделения специфического антигена от адъюванта центрифугируют при 6 тыс. об/мин. в течение 30 мин. Недостаток декантируют и в нем устанавливают активность антигена в РСК со штаммоспецифическими сыворотками, полученными на 75 140 компонент. В данном примере титр комплементсвязывающей активности антигена типа О составил 1:128, а антигена типа А 1: 64, что соответствует содержанию в вакцине 50 70 мкг/см³ антигена типа О и 35 40 мк/гсм³ антигена типа А. Проведенные исследования говорят об иммуногенной активности проверенной серии вакцин и пригодности ее для использования.

Пример 2
В универсальную бивалентную вакцину против ящура типа 0 и A серии 286 добавляют четыреххлористый углерод в количестве 60% к объему вакцины. Смесь тщательно встряхивают, а затем для отделения специфического антигена от адъюванта центрифугируют при 5 тыс. об/мин. в течение 30 мин. Иммуногенную активность специфического антигена в надосадке устанавливают аналогичным путем в РСК, как в примере 1.

Комплементсвязывающая активность извлеченного специфического антигена для обоих типов составила 1 256, что соответствует их содержанию в 1 см³ биопрепарата в количестве 60 80 мкг.

Для подтверждения достоверности полученных результатов данной серией вакцины иммунизируют 4 кроликов породы шиншилла, живой массой 2,5 3,0 кг, внутримышечно в дозе 1,0 см³.

Спустя 10 дней после иммунизации кроликов обескровливают, получают сыворотки, которые исследуют в реакции нейтрализации /РН/ и реакции связывания комплемента /РСК/ на наличие вируснейтрализующих и комплементосвязывающих антител.

Иммунизирующая активность сыворотки крови кроликов, вакцинированных данной серией вакцины в pH составила 1,5 1,8 и в РСК 1 8 1 16 соответственно.

Приведенные данные говорят, что данная серия вакцины иммуногенна и пригодна к использованию, причем, предложенный способ позволяет сделать заключение о ее качестве намного быстрее и с меньшими затратами.

Пример 3
В универсальную бивалентную вакцину против ящура типа O и A серии 252 добавляют хлороформ в количестве 70% к объему вакцины. Извлечение специфического антигена и установление его иммуногенной активности проводят аналогично, как в примере 1, а достоверность полученных результатов проверяют на кроликах, как в примере 2.

Комплементсвязывающая активность извлеченного специфического антигена для обоих типов O и A при исследовании в реакции связывания комплемента составила 1 16, что соответствует их содержанию в 1 см³ биопрепарата в количестве 0,5 1,0 мкг, что недостаточно для концентрированного препарата.

Иммунизирующая активность сывороток крови кроликов, вакцинированных данной серией вакцины в РН составила 0,8 1,0 и в РСК 1 2 1 4 соответственно.

Таким образом, данная серия вакцины обладает низкой иммуногенной активностью и не пригодна для использования.

Предложенный способ определения специфического антигена в масляных и эмульгированных противоящурных вакцинах не трудоемок, прост в исполнении, экономически дешев и экологически безвреден.

Использование предложенного способа в ветеринарной практике позволит повысить эффективность проводимых мероприятий по проверке иммуногенности вирусных вакцин с масляным адъювантом на любом этапе их хранения.

Использование: ветеринарная вирусология. Сущность изобретения: для реализации способа вакцину смешивают с масляным адъювантом, с хлороформом или четыреххлористым углеродом, которые добавляют к ней в количестве 50 - 70% от объема, тщательно встряхивают, центрифугируют и получают надосадок, который исследуют в РСК со штаммоспецифическими сыворотками, полученными на 75 - 140 S компонент.

Способ определения иммуногенной активности противоящурных вакцин, включающий извлечение специфического антигена из сложной смеси, последующее его отделение от адьюванта центрифугированием и установление его активности в реакции связывания комплемента, отличающийся тем, что извлечение специфического антигена из сложной смеси проводят путем тщательного встряхивания с хлороформом или четыреххлористым углеродом, которые добавляют к вакцине в количестве 50 70% от объема.