СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН Российский патент 1998 года по МПК A61K39/135 G01N33/53 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу определения иммуногенной активности противоящурных универсальных (эмульсионных) вакцин.

Известен способ определения иммуногенной активности универсальных противоящурных вакцин с масляным адъювантом, включающий иммунизацию животных вакцинным препаратом с последующим заражением их контрольным вирусом ящура и определением 50%-ной иммунизирующей дозы (ИМД₅₀КРС ИМД₅₀С) [1, 2, 3].

Недостатком данного способа является его длительность, большие затраты труда и средств. Кроме того, работа с живым вирусом ящура является экологически далеко не безопасной.

Известен также способ определения иммуногенной активности универсальных вакцин против ящура сельскохозяйственных животных, включающий извлечение специфического антигена из сложной смеси хлороформом или четыреххлористым углеродом и установление его активности в реакции связывания комплемента [4] .

Недостатком данного способа является то, что он не позволяет достоверно определить иммуногенную активность противоящурных вакцин при замене масляного адъюванта.

Целью изобретения является повышение достоверности способа и снижение трудозатрат при его осуществлении.

Указанная цель достигается тем, что установление активности антигена в реакции связывания комплемента осуществляют с инактивированными при 62 - 64^oC сыворотками крови, полученными от кроликов на 10 - 14 сутки после их иммунизации, причем специфический антиген, извлеченный из сложной смеси перед постановкой реакции связывания комплемента, разводят до титра, двукратно превышающего его предельный титр.

Пример 1.

Взрослых кроликов, массой 2,5 - 3,0 кг иммунизируют вакциной серии 286, универсальной, моновалентной против ящура типа O, с иммуногенной активностью на свиньях 125 ИмД₅₀ в 1 см³. Через 12 дней кроликов обескровливают, сыворотки крови, полученные обычным методом, разводят стерильным физиологическим раствором 1 : 2 и инактивируют при температуре водяной бани 62^oC в течение 30 мин.

В реакции связывания комплемента полученные сыворотки исследуют в разведении от 1 : 4 до 1 : 128 с антигеном, выделенным из данной вакцины хлороформом, взятом в разведении до титра, двукратно превышающего его предельный титр.

Иммунизирующая активность сывороток крови кроликов, вакцинированных данной серией вакцины в РСК, составляет 1 : 24 или 4,5 лог₂.

Таким образом данная серия вакцины является иммуногенной и пригодной для использования.

Пример 2.

Взрослых кроликов массой 2,5 - 3,0 кг иммунизируют вакциной серии 282 универсальной, моновалентной против ящура типа O с иммуногенной активностью на свиньях 125 ИмД₅₀ в 1 см³.

Через 14 дней кроликов обескровливают, получают сыворотки крови, которые разводят стерильным физиологическим раствором 1 : 2 и инактивируют при температуре водяной бани 63^oC в течение 30 мин.

В РСК сыворотки крови исследуют в том же разведении, что и в примере 1 с антигеном, выделенным из данной вакцины четыреххлористым углеродом, в удвоенном разведении от предельного титра.

Иммунизирующая активность сывороток крови кроликов, вакцинированных данной серией вакцины в РСК, составляет ниже 1 : 2, что говорит об отсутствии иммунитета у животных и непригодности ее для использования.

Для подтверждения непригодности вакцины проводят повторную проверку иммуногенной активности данной серии на подсвинках живой массой 40 - 50 кг путем их заражения на 14 день после иммунизации, контрольным вирусом ящура типа O (адаптированного к свиньям) в 2 точки венчика одной из конечностей, в дозе 10⁴ ГД₅₀.

На 3 - 4 сутки у всех вакцинированных животных отмечают генерализацию процесса с афтозным поражением всех конечностей, что указывает на плохое качество данной серии вакцины.

При выяснении причин брака производственной серии вакцины устанавливают ее непригодность из-за замены в ее составе масляного адъюванта на аректогенный и не стимулирующий образование иммунитете как у естественно восприимчивых, так и лабораторных животных.

Проведенные исследования говорят, что предложенный способ проверки иммуногенной активности при смене масляного адъюванта в составе вакцины позволяет сделать заключение намного быстрее и с меньшими затратами на лабораторных животных - кроликах.

Пример 3.

Взрослых кроликов, массой 2,5 - 3,0 кг иммунизируют вакциной серии 306, универсальной бивалентной против ящура типа O и A с иммуногенной активностью на свиньях по типу O 200 ИмД₅₀ в 1 см³ и по типу A 79 ИмД₅₀ в 1 см³.

Через 10 дней после иммунизации кроликов обескровливают, сыворотки крови, полученные обычным методом, разводят стерильным физиологическим раствором 1 : 2 и инактивируют при температуре водяной бани 64^oC в течение 30 мин.

Антигены, входящие в состав вакцины, отделяют от масляного адъюванта путем ее обработки хлороформом с последующим определением их предельных титров в РСК со штаммоспецифичными сыворотками, полученными на 75 - 140 S компонент. Выделенные антигены разводят до титра, двукратно превышающего их предельные титры, и используют в РСК с сыворотками, полученными от кроликов, взятыми в разведении как в примере 1.

При проверке сывороток крови с антигеном A, полученным из вакцины, установлена его иммунизирующая активность 1 : 16 или 4 лог₂, и типа O 1 : 32 или 5 лог₂.

Приведенные данные полностью коррелируют с данными PH и соответствуют количеству ИмД₅₀ в 1 см³ при проверке на свиньях.

Таким образом 306 серия исследуемой вакцины достаточно активна и пригодна для применения животным.

Использование нового способа определения иммуногенной активности универсальных противоящурных вакцин на лабораторных животных - кроликах с использованием антигенов, выделенных из вакцины, позволяет проводить широкомасштабные исследования в любые сроки, в наиболее доступной реакции связывания комплемента с более высокой степенью достоверности их качества.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается определения иммуногенной активности противоящурных (универсальных) вакцин. Способ позволяет установить активность антигена в реакции связывания комплемента при использовании инактивированных при 62 - 64^oС сывороток крови, полученных от кроликов на 10 - 14 сутки после их иммунизации и антигена, извлеченного хлороформом или четыреххлористым углеродом из сложной смеси. Антиген перед постановкой реакции связывания комплемента разводят до титра, двукратно превышающего его предельный титр. Использование нового способа определения иммуногенной активности универсальных противоящурных вакцин на лабораторных животных кроликах с использованием антигенов, выделенных из вакцины, позволяет проводить широкомасштабные исследования в любые сроки в наиболее доступной реакции связывания комплемента с более высокой степенью достоверности их качества.

Способ определения иммуногенной активности универсальных противоящурных вакцин, включающий извлечение специфического антигена из сложной смеси хлороформом или четыреххлористым углеродом и установление его активности в реакции связывания комплемента, отличающийся тем, что установление активности антигена в реакции связывания комплемента осуществляют с инактивированными при 62 - 64^oC сыворотками крови, полученными от кроликов на 10 - 14 сутки после их иммунизации, причем специфический антиген, извлеченный из сложной смеси перед постановкой реакции связывания комплемента, разводят до титра, двукратно превышающего его предельный титр.