ШТАММ ВИРУСА ГЕРПЕСА КУР КАК КОМПОНЕНТ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 A61K39/255 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве вакцин против болезни Марека (БМ).

Для профилактики болезни Марека используют жидкую и лиофилизированную вакцины, изготовленные из штамма "ФС-126" вируса герпеса индеек (ВГИ), которые предохраняют птицу от заболевания (эффективность вакцинации 76 85%).

Применение вакцин из штамма ВГИ предотвращает развитие опухолей у птиц до 100 120 дневного возраста.

Целью настоящего изобретения является получение нового вакцинного штамма вируса герпеса кур "50-ДЕП", способного увеличить иммуногенную активность штамма "ФС-126" ВГИ при использовании его в качестве второго (усиливающего) компонента при изготовлении бивалентной вакцины против БМ, при этом длительность иммунитета у кур против вируса БМ возрастает в два раза.

Штамм вируса герпеса кур получен в благополучном птицехозяйстве от здоровой птицы 200 дневного возраста, не имеющей антител к ВЕИ, но имеющий антитела к вирусу герпеса второго серотипа.

Штамм вируса герпеса кур "50"-ДЕП, введенный внутримышечно СПФ-цыплятам суточного возраста, выделенный на 21 сут из эпителия перьевых фолликул, адаптирован к культуре клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур, с последующей идентификацией в ИФА со специфической сывороткой.

Штамм вируса герпеса кур депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов под номером 50, семейство Herpesviridae род Thetalymphocryptovirus вид вирус герпеса кур 2 серотипа.

Штамм вируса герпеса кур "50"-ДЕП характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. На основании сравнительного электронно-микроскопического изучения производственного штамма "ФС-126" ВГИ и штамма ВГК "50"-ДЕП при репродукции их в культуре клеток установлена идентичность характеристик обоих штаммов. Эти вирусы проходили онтогенетический цикл развития в нуклеоплазме, а в цитоплазме завершающие стадии морфогенеза. Внутриядерный цикл развития, включая стадии виропласта, нуклеоида, сборку нуклекапсида, формирование наружной суперкапсидной мембраны. Наиболее частой формой, присутствующей на всех стадиях культивирования, является нуклеокапсидд с нуклеоидом, представленным плотным образованием, заключенным в капсидную белковую оболочку.

При электронно-микроскопическом исследовании штамма "50"-ДЕП представлен типичными для вирусов герпеса группами В вирионами, имеющими икосаэдрическую симметрию, нуклеокапсид содержит ДНК. В ядре пораженной клетки вирион имеет величину 150 170 нм, в цитоплазме размер его увеличивается за счет белковой оболочки до 200 250 нм.

Культуральные признаки. Штамм "50"-ДЕП активно размножается в первичной культуре фибрибластов СПФ эмбрионов кур, проявляя при этом ярко выраженный цитопатический эффект образование характеристик фокусов, состоящих из рефрактильных округлых клеток /поликариоцитов/. Размеры фокуса достигают 0,2 - 0,5 мм. При проведение последовательных пассажей в культуре фибробластов СПФ-эмбрионов кур инфекционный титр вируса увеличивался и достигал передов 1•10³ 1•10⁵ ФОЕ/мл (фокусообразующих единиц).

При заражении 6-суточных СПФ-эмбрионов кур в желточный мешок штамм "50"-ДЕП вызывает их гибель до 20% на 3 5 сут инкубации. У павших эмбрионов отмечают отставание в росте, гепатиты, увеличение селезенки и почек. На хориоаллантоисной оболочке образуются бляшки серовато-белого цвета звездчатой формы размером 1 2 мм. При последующих пассажах в эмбрионах вышеперечисленные признаки не проявляются.

Вирусные свойства. Штамм "50"-ДЕП апатогенен для суточных цыплят.

Антигенные свойства. Штамм "50"-ДЕП антигенно родственные с герпес-вирусами группы В 1 и 3 серотипов.

При введении в организмы вызывает латентно протекающую вирусемию. Антитела к данному вирусу обнаруживаются в крови цыплят к 60 90-дневному сроку с дальнейшим нарастанием к 120 180 дн, что усиливает иммунный ответ птицы при использовании данного штамма при вакцинации цыплят вирусом герпеса индеек.

Иммуногенные свойства. Штамм "50"-ДЕП не обладает иммуногенными свойствами при вакцинации цыплят, но если использовать его в качестве компонента для бивалентной вакцины, то иммуногенность штаммов ВГИ увеличивается и эффективность вакцинации возрастает до 100%
Пример. Проведение сравнительной иммуногенности вакцин против болезни Марека.

Иммуногенность определяют на суточных цыплятах в неблагополучном по болезни Марека птицехозяйстве, для чего формируют 3 группы цыплят по 1200 голов в каждой.

Цыплята первой группы прививаются вакциной из штамма "ФС-126" (лиофилизированная коммерческая вакцина) в дозе 2000 ФОЕ/гол. Вторую группу прививают бивалентной вакциной, состоящей из штамма "ФС-126" в дозе 2000 ФОЕ/год и штамма "50"-ДЕП в дозе 300 ФОЕ/гол. Третью группу прививают вирусом штамма "50"-ДЕП в дозе 300 ФОЕ/гол.

За опытной партией ведется наблюдение в течение 240 дн, учитывая гибель птицы с признаками болезни Марека.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице.

Из представленный в таблице данных видно, что бивалентная вакцина из штамма "ФС-126" и штамма "50"-ДЕП имеет более высокую иммуногенность '(100,0% ), чем вакцина из штамма "ФС-126" (80,0%), а вакцина из штамма "50"-ДЕП иммуногенность практически не обладает.

Использование: ветеринарная вирусология и биотехнология. Сущность изобретения: получен новый вакцинный штамм вируса герпеса кур 50"-ДЕП, способный увеличить иммуногенную активность штамма "ФС-126" вируса герпеса индейки при использовании его в качестве второго (усиливающего) компонента при изготовлении бивалентной вакцины против болезни Марека. Штамм депонирован в коллекции ВГНКИ под номером 50. 1 табл.

Штамм вируса герпеса кур ВГНКИ N 50 как компонент для изготовления бивалентной вакцины против болезни Марека.