ШТАММ ВИРУСА ГЕРПЕСА КУР КАК КОМПОНЕНТ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 A61K39/255 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве вакцины против болезни Марека (БМ).

Для профилактики болезни Марека используют жидкую и лиофилизированную вакцины, изготовленные из штамма "ФС-126" вируса герпеса индеек (ВГИ), которые предохраняют птицу от заболевания (эффективность вакцинации 76-85%).

Применение вакцин из штамма ВГИ предотвращает развитие опухолей у птиц до 100-1200-дневного возраста.

Целью настоящего изобретения является получение нового вакцинного штамма вируса герпеса кур "42"-ДЕП, способного увеличить иммуногенную активность штамма "ФС-126" ФГИ при использовании его в качестве второго (усиливающего) компонента при изготовлении бивалентной вакцины против БМ, при этом длительность иммунитета у кур возрастает в два раза.

Штамм вируса герпеса кур получен в благополучном птицехозяйстве от здоровой птицы 200-дневного возраста, не имеющей антител к ВГИ, но имеющей антитела к вирусу герпеса второго серотипа.

Штамм вируса герпеса "42"-ДЕП, введенный внутримышечно СП -цыплятам суточного возраста, выделенный на 16 сут из эпителия перьевых фолликул, адаптирован к культуре клеток фибробластов СПФ-эмбрионов кур с последующей идентификацией в ИФА со специфической сывороткой.

Штамм вируса герпеса кур депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов под номером 42, семейство Herpesviridal род Thetalymphocryptovirus вид вирус герпеса кур 2 серотип.

Штамм вируса герпеса кур "42"-ДЕП характеризуется следущими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. На основании сравнительного электронно-микроскопического излучения производственного штамма "ФС-126" ВГИ и штамма ВКГ "42"-ДЕП при репродукции их в культуре клеток установлена идентичность характеристик обоих штаммов. Эти вирусы проходили онтогенетический цикл развития в нуклеоплазме завершающие стадии морфогенеза. Внутриядерный цикл развития включал стадии виропласта, нуклеоида, сборку нуклеотида, формирование наружной суперкапсидной мембраны. Наиболее частой формой, присутствующей на всех стадиях культивирования, является нуклеокапсид с нуклеоидом, представленным плотным образованием, заключенным в капсидную белковую оболочку.

При электронно-микроскопическом исследовании штамм "42"-ДЕР представлен типичными для вирусов герпеса группы B вирионами, имеющими икосаэдрическую симметрию, нуклеокапсид содержит ДНК. В ядре пораженной клетки вирион имеет величину 150-170 нм, в цитоплазме размер его увеличивается за счет белковой оболочки до 200-250 нм.

Культуральные признаки. Штамм "42"-ДЕП активно размножается в первичной культуре фибробластов СПФ-эмбрионов кур, проявляя при этом ярко выраженный цитопатический эффект образование характерных фокусов, состоящих из рефрактильных округлых клеток (поликариоцитов). Размеры фокуса достигают 0,2-0,5 мм. При проведении последовательных пассажей в культуре фибробластов СР -эмбрионов кур инфекционный титр вируса увеличивается и достигает пределов 1х10³ 1x10⁵ ФОЕ/мл (фокусообразующих единиц).

При заражении 6-суточных СПФ-эмбрионов кур в желточный мешок штамм "42"-ДЕП вызывает их гибель до 20% на 3-5 сут инкубации. У павших эмбрионов отмечают: отставание в росте, гепатиты, увеличение селезенки и почек. На хориоаллантоисной оболочке образуются бляшки серовато-белого цвета звездчатой формы размером 1-2 мм. При последующем пассажировании в эмбрионах вышеперечисленные признаки не проявляются.

Вирулентные свойства. Штамм "42"-ДЕП апатогенен для суточных цыплят.

Антигенные свойства. Штамм "42"-ДЕП антигенно родственен с герпес-вирусами группы B 1 и 3 серотипов.

При введении в организм вызывает латентно протекающую вирусемию. Антитела к данному вирусу обнаруживаются в крови цыплят к 60-90-дневному сроку с дальнейшим нарастанием к 120-180 дню, что усиливает иммунный ответ птицы при использовании данного штамма при вакцинации цыплят вирусом герпеса индеек.

Иммуногенные свойства. Штамм "42"-ДЕП не обладает иммуногенными свойствами при вакцинации цыплят, но при использовании его в качестве второго компонента для бивалентной вакцины, иммуногенность штаммов ВГИ увеличивается и эффективность вакцинации возрастает до 98,2%
Пример. Проведение сравнительной иммуногенной активности вакцины против болезни Марека. Иммуногенность определяют на суточных цыплятах в неблагополучном по болезни Марека птицехозйстве, для чего формируют 3 группы цыплят по 1200 голов в каждой.

Цыплята 1 группы прививаются вакциной из штамма "ФС-126" (лиофилизированная коммерческая вакцина) в дозе 2000 ФОЕ/гол. Вторую группу прививают бивалентной вакцинной, состоящей из штамма "ФС-126" в дозе 2000 ФОЕ/гол и штамма "42"-ДЕП в дозе 300 ФОЕ/гол. Третью группу прививают вирусом штамма "42"-ДЕП в дозе ФОЕ/гол.

За опытной птицей ведется наблюдение в течение 240 дн, учитывая гибель птицы с признаками болезни Марека.

Результаты проведенных исследований представлены в таблице.

Из представленных в таблице данных видно, что бивалентная вакцина из штамма "ФС-126" и штамма "42"-ДЕП имеет более высокую иммуногенность (98,2% ), чем вакцина из штамма "ФС-126" (80,0%), а штамм "42"-ДЕП иммуногенностью практически не обладает.

Использование: ветеринарная вирусология и биотехнология. Сущность изобретения: получен новый вакцинный штамм вируса герпеса кур "42"-ДЕП, способный увеличить иммуногенную активность штамма "ФС-126" вируса герпеса индейки при использовании его в качестве второго /усиливающего/ компонента при изготовлении бивалентной вакцины против болезни Марека. Штамм депонирован в коллекции ВГНКИ под номером 42. 1 табл.

Штамм вируса герпеса кур ВГНКИ N 42 как компонент для изготовления бивалентной вакцины против болезни Марека.