СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИТАЗОЛА В БИОСУБСТРАТАХ Российский патент 1997 года по МПК G01N30/06 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для определения концентрации препарата в организме больного и в лекарственных формах.

Известен способ определения нитазола в лекарственной форме, включающей проведение трех качественных реакций: на ацетогруппу, на нитрогруппу и на серу.

Однако данный способ обладает низкой специфичностью, так как качественное определение нитазола включает проведение комплекса реакций, каждая из которых подтверждает наличие лишь одной функциональной группы.

Наиболее близким к предлагаемому является способ количественного определения нитазола, включающий обработку пробы и ее анализ.

Известный способ осуществляется следующим образом.

0,2 г исследуемого препарата растворяют в 20 мл диметилформамида и нейтрализуют по индикатору тимоловому синему. Затем проводят титрование 0,1 н. едким натром в смеси этанол бензол /1:4/ до появления зеленого окрашивания. 0,1 г гидроксида натрия, пошедшего на титрование, соответствует 0,1872 г препарата.

К недостаткам данного способа следует отнести низкую чувствительность (равную 0,374 мг) и невозможность его использования для количественного определения нитазола в биосубстратах.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа.

Сущность изобретения заключается в том, что в отличие от прототипа пробу биосубстрата обрабатывают ацетонитрилом в соотношении 1:1, центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 15-20 мин, хроматографирование проводят на колонке с обращенной фазой нуклеосил С-18 при использовании в качестве элюента 30-50% -ного водного раствора метанола с pH 3,2-3,3, со скоростью 100 мкл/мин и детектируют при λ 348 нм со скоростью сканирования 0,6 с. Содержание нитазола определяют по калибровочной кривой.

Пример. Для анализа взята кровь животного (крыса), которому за 30 мин до исследования было введено 10 мл 0,12%-ного водного раствора нитазола парентерально. Образец центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин. Для депротеинизации к 0,5 мл отобранной сыворотки добавляют 0,5 мл ацетонитрила, повторно центрифугируют. Аликвоту супернатанта хроматографируют на колонке с обращенной фазой нуклеосил С-18 (5 мкл), элюирование проводят в изократическом режиме водным метанолом (1: 1) с pH 3,27, скорость элюирования 100 мкл/мин. Детекцию выходящих веществ проводили при l 348 нм, время сканирования 0,6 с. По объему удерживания (V_уд), равному 485 мкл, и полной записи УФ-спектра пика, выходящего с колонки, идентифицируют исследуемое вещество - нитазол. V_уд был предварительно установлен при хроматографировании чистого вещества (нитазола) концентрации 50 мкг/мл. После чего подсчитана площадь пика нитазола на хроматограмме, равная 138 мм. По калибровочной кривой определена концентрация (С) нитазола, равная 64,55 мкг/мл. Используя ранее установленный коэффициент осаждения нитазола с белками, равный 1,13, подсчитывают количество нитазола в пробе 72,94 мкг/мл.

Ошибка определения составила 4,0%
Высокая специфичность предлагаемого изобретения достигается записью полного УФ-спектра при идентификации исследуемого вещества. К преимуществам данного способа следует отнести возможность его использования в антибактериальной терапии больных аэробной и анаэробной инфекцией для контроля эффективности проводимого лечения путем установления соответствия концентрации препарата в биосредах организма больного необходимой бактериальной концентрации.

Использование: для количественного определения нитазола в биосубстратах. Сущность изобретения: способ включает обработку пробы и ее анализ. Пробу обрабатывают ацетонитрилом в соотношении 1:1, центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 15-20 мин, хроматографируют на колонке с обращенно-фазовым селикагелевым сорбентом нуклеосил С-18 при элюировании 30-50%-ным водным раствором метанола с pH 3,2-3,3 со скоростью 100 мкл/мин. Детектируют при λ = 348 нм со скоростью сканирования 0,6 с, а содержание нитазола определяют по калибровочной кривой.

Способ количественного определения нитазола в биосубстратах, включающий обработку пробы и ее анализ, отличающийся тем, что пробу обрабатывают ацетонитрилом в соотношении 1 1, центрифугируют со скоростью 3000 об/мин в течение 15 20 мин, хроматографируют на колонке с обращенно-фазовым селикагелевым сорбентом нуклеосил С-18 при элюировании 30 50%-ным водным раствором метанола с рН 3,2 3,3 со скоростью 100 мкл/мин и детектируют при λ = 348 нм со скоростью сканирования 0,6 с, а содержание нитазола определяют по калибровочной кривой.