СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТЕРОИДНЫХ ГЛИКОЗИДОВ РЯДА СПИРОСТАНА, ОБЛАДАЮЩИХ ГИПОХОЛЕСТЕРИНЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1998 года по МПК A61K31/705 C07J71/00 

Изобретение относится к способу получения стероидных гликозидов ряда спиростана из растительного сырья семян красавки обыкновенной (Atropa belladonna), обладающих гипохолестеринемической активностью.

Известно применение неочищенных сумм стероидных гликозидов невыясненной структуры, выделенных из различных видов диоскорей под названием "полиспонин" и "диоспонин" [1-3]
Задача данного изобретения упрощение процесса получения спиростаноловых атропозидов, обладающих более высокой гипохолестеринемической активностью по сравнению с официнальным препаратом полиспонином, и расширение арсенала веществ, проявляющих данную активность.

Получение ведут экстракцией растительного сырья смесью хлороформа и метанола при нагревании. Экстракт разбавляют водой, водно-метанольный слой отделяют, концентрируют до водного остатка. При помощи перколяции разделяют фракции фуростаноловых и спиростаноловых гликозидов.

Фуростаноловые гликозиды подвергают ферментолизу, переводя и спиростаноловые аналоги, извлекаемые бутанолом. Бутанольные вытяжки концентрируют, промывают и высушивают.

Таким образом, имеем высокий выход целевого продукта, который контролируют в ТСХ в системе растворителей хлороформ и метанол 4:1, проявляя реактивом Санье.

Сумма спиростаноловых гликозидов из семян красавки представляет собой порошок белого цвета, хорошо растворимый в метиловом, этиловом и бутиловом спиртах, пиридине и метилсульфоксиде, нерастворимый в ацетоне, хлороформе и эфире. После полного кислотного гидролиза суммы веществ в качестве агликона физико-химическими методами идентифицировали диосгенин и тигогенин (4:1), в олигосахаридной части глюкозу, рамнозу и галактозу. В тонком слое сорбента проявляются реактивом Санье 4 пятна розовой окраски с Rf 0,87; 0,62; 0,43; 0,27.

Пример. 1 кг воздушно-сухих семян красавки измельчают, экстрагируют смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1 (3 р по 4 л) при нагревании. Экстракт разбавляют водой и в делительной воронке отделяют водно-метанольный слой, который затем концентрируют в вакууме до водного остатка. При помощи перколяции разделяют фракции фуростаноловых и спиростаноловых гликозидов.

Фуростаноловые гликозиды подвергают ферментолизу, переводя их в спиростаноловые аналоги, которые экстрагируются бутанолом. Бутанольные вытяжки высушивают в вакууме до сухого остатка, который промывают ацетоном, отфильтровывают и высушивают в вакууме.

Выделенный целевой продукт контролируют при помощи ТСХ в системе растворителей хлороформ и метанол 4:1, проявляя реактивом Санье.

Выход суммы спиростаноловых гликозидов (нативных и полученных после ферментолиза) составил 29 г (2,9% на абсолютно сухое сырье).

Определение гипохолестеринемического и гипотриглицеринемического действия атропозида.

Опыты по определению гипохолестеринемического и гипотриглицеринемического действия проводили на нелинейных белых крысах, у которых экспериментальная гиперлипидемия вызывалась внутрибрюшинным введением твина-80 в дозе 200 мг на 100 г массы животного [4] Одновременно с твином-80 опытной группе животных перорально зондом в дозе 10 мг/кг массы животного вводили исследуемое вещество в виде водного раствора в объеме 1 мл.

Контрольная группа животных в аналогичных условиях вместо исследуемого соединения получала 1 мл воды. Для сравнительной оценки активности исследуемого вещества еще одной группе животных в тех же условиях вводили официальный противоатеросклеротический препарат полиспонин в дозе 10 мг/кг массы животного.

У всех животных через 12 ч после введения вещества, а также в группе интактных животных исследовалось после декапитации в сыворотке крови содержание холестерина по Ильку [5] и триглицеридов по Готтфрид и Розенверг [5]
Как видно из таблицы атропозид обладал гипохолестеринемическим и гипотриглицеринемическим действием. Показатель токсичности составлял LD 10=10 мг/кг. По сравнению с контролем под влиянием атропозида уровень холестерина в крови понизился на 50% (R<0,001), а триглицеридов на 54,6% (R<0,001). Эффект атропозида превосходил влияние полиспонина препарата сравнения, содержащего водорастворимые гликозиды.

Таким образом, исследованный атропозид обладает выраженной гипохолестеринемической активностью, превосходящей активность официнального препарата полиспонина; гипохолестеринемическая активность его сочетается со столь же высоким гипотриглицеринемическим действием. Эти свойства дают основание считать, что атропозид может быть использован для создания эффективного противоатеросклеротического лечебного препарата.

Литература
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. Медицина, 1972, ч. II, с. 139-140.

2. Лесков А. И. Мартынова Р.Г. Соколов С.Я. Полиспонин новый лечебный препарат антисклеротического действия. ХФЖ, 1976, N 1, с. 147-150.

3. Кемертелидзе Э.П. Пхеидзе Т.А. Качухашвили Т.Н. и др. Трибуспонин - антисклеротическое средство, А.с. N 567449 БН СССР, 1977, 54 (29) 10.

4. Полякова Э.Д. Климова Т.А. Пат. физиология, 1973, N 1, с. 74-77.

5. Колб В. Г. Камышников В.С. Справочник по клинической химии, Минск, Беларусь, 1982, с. 366-367.

Способ предназначен для получения стероидных гликозидов ряда спиростана, обладающих гипохолестеринемической активностью. Семена красавки экстрагируют метанолом, смешанным с хлороформом. Затем перколяцией разделяют фракции спиростаноловых и фуростаноловых гликозидов. Последние подвергают ферментативным реакциям для перевода их в спиростаноловые аналоги. 1 табл.

Способ выделения стероидных гликозидов ряда спиростана, включающий экстракцию растительного сырья метанолом, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют семена красавки, экстракцию ведут метанолом, смешанным с хлороформом, затем перколяцией разделяют фракции спиростаноловых и фуростаноловых гликозидов и последние подвергают ферментативным реакциям, переводя их в спиростаноловые аналоги.