ШТАММ BACILLUS SUBTILIS "МЖ-6" - АНТАГОНИСТ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 A61K39/04 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/125 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии.

Цель изобретения - получение нового штамма, обладающего выраженными антагонистическими свойствами по отношению к микобактериям туберкулеза. Штамм Bacillus subtillis "МЖ - 6 сдан на хранение в коллекцию Института биохимии и физиологии микроорганизмов.

Штамм получен путем многократного пассирования штамма Bacillus subtillis N 720 на питательных средах с вакциной БЦЖ.

Культурно-морфологические признаки. Величина клеток односуточной агаровой культуры 0,0 - 0,8 х 1,5 - 2,0 мкм. Располагаются по одиночке или короткими цепочками. Перитрихи. Образуют центрально расположенные споры размером 0,6 - 0,8 мкм. Капсулы не образуют. Граммположительные палочки. Колонии на агаре: мелкие, сероватого цвета, амебовидные с зубчатыми краями. На косом агаре образуют нежный серовато-белый, маслянистый, блестящий, расплывающийся, плотно пристающий к поверхности агара налет.

Мясо-пептонный бульон. При температуре 37^oC в течение 4 - 6 ч происходит его помутнение, образование нежной пленки сероватого осадка. Лакмус-молоко: неощелочение, пептонизация.

Физиолого-биохимические свойства. Штамм размножается при 10 - 56^oC. Оптимум роста при 30 - 37^oC.

Расщепляет глюкозу и сахарозу до кислоты. Индол не образует, нитраты редуцирует, желатину разжижает, крахмал гидрализует. Сероводород образует в небольших количествах. Факультативный аэроб. Продуцирует антибактериальное вещество широкого спектра действия, вызывающее деструктивные изменения микобактерий туберкулеза и угнетающее рост тест-штаммов в зоне 15 - 20 мм: Staphylococcus aureus "Никифоров", Staphylococcus aureus "Филиппов", Shigella dysenteriae, Salmonella thyphi.

Пример: Штамм Bacillus subtillis "МЖ - 6" получен путем пассирования штамма Bacillus subtillis N 720 на питательных средах с вакциной БЦЖ. Штамм в течение суток при 37^oC выращивают на 1,5% пептонном агаре. Штамм смывают 0,9% раствором хлорида натрия и лиофилизируют.

1 мг сухого вещества содержит 500 млн. живых клеток, активность 1 мг составляет 0,1 МБк.

Микобактерии туберкулеза были выделены из 26 бацилловыделителей, больных туберкулезом легких, находящихся на стационарном лечении в областном противотуберкулезном диспансере Г. Самары. Из них 15 больных были с диагнозом: инфильтративный туберкулез легких, фаза распада; 6 - с диагнозом: диссемированный туберкулез легких, фаза распада и обсеменения, 5 - с диагнозом: фиброзно-кавернозный туберкулез легких.

Объектом исследования служила мокрота. Бактериоскопически определяют наличие в ней микобрактерий туберкулеза. Затем производят посев положительного материала на питательные среды Левенштейна-Йенсена и Финна II. Произведено 104 посева: по два на среду Левенштейна-Йенсена и по два на среду Финна II от каждого больного. Во всех пробирках получен рост микобактерий: от 3 колоний (3 случая из 12 пробирок) до сплошного роста (10 случаев - 40 пробирок).

Определяют чувствительность выделенных микобактерий туберкулеза к штамму Bacillus subtillis "МЖ - 6" методом разведений на средах Левенштейна-Йенсена (без крахмала) и Финна II. Готовят разведения штамма 1:10 и 1:100 на 0,9% растворе хлорида натрия. Для этого готовят 4 колбы по 100 мл: две для среды Левенштейна-Йенсена и две среды Финна II, в каждую из которых добавляют соответствующие разведения штамма Bacillus subtillis "МЖ - 6".

Среды со штаммом тщательно перемешивают, разливают по пробиркам и свертывают при температуре 86^oC в течение 1 ч. Готовят гомогенную взвесь ранее выделенным микобактерий туберкулеза в 0,9% растворе хлорида натрия, содержащую 5 единиц в 1 мл (500 млн. микробных тел) по оптическому стандарту. В каждую пробирку вносят по 0,1 мл бактериальной взвеси. Пробирки выдерживают в горизонтальном положении при температуре 37^oC 3 ч, обжигают верхушки ватных пробок, погружают их пинцетом в пробирки, заливают смесью воска и парафина и помещают в термостат.

Предварительные результаты учитывали на 12 - 14 день, а окончательные на 20 - 21 день инкубации.

Из 104 пробирок с разведениями штамма Bacillus subtillis "МЖ - 6" в 4 из них наблюдался рост микобактерий туберкулеза: в 2 пробирках - при разведении 1:10 и в 2 пробирках - при разведении 1:100.

Таким образом, штамм Bacillus subtillis "МЖ - 6" в 96,2% случаев подавляет рост микобактерий туберкулеза на питательных средах.

Штамм предназначен для подавления роста микобактерий туберкулеза и может быть использован во фтизиатрии. Штамм Bacillus subtilis '' МЖ-6 '' получен путем многократного пассирования исходного штамма Bacillus subtilis N 720 на питательных средах с вакциной БЦЖ. Штамм хранится в коллекции Института биохимии и физиологии микроорганизмов. Штамм Bacillus subtilis '' МЖ-6 '' обладает выраженными антагонистическими свойствами по отношению к микобактериям туберкулеза и в 96,2% случаев подавляет их рост на питательных средах.

Штамм Bacillus subtilis "МЖ - 6" - антагонист микобактерий туберкулеза.