СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АКТИВНОГО КОМПЛЕКСА ИЗ БИОМАССЫ КЛЕТОК ЖЕНЬШЕНЯ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/78 C12N5/04 

Изобретение относится к биотехнологии. Выделенный активный комплекс может быть использован в медицине, косметике и пищевой промышленности.

Известно, что биомасса культивируемых клеток женьшеня содержит биологически активные вещества, в том числе панаксозиды.

Выделение этих веществ проводят обычно из воздушно-сухого сырья (воздушно-сухое сырье, которое высушивают при температуре 55-56^oC до остаточной влаги 8-10%) путем экстракции его органическими растворителями (петролейным или серным эфиром, хлороформом) и водно-спиртовыми растворами (метанолом, этанолом, бутанолом), концентрированием этих растворов со сменой растворителей и дальнейшим выделением гликозидов путем хроматографирования (1, 2).

Недостатком этих способов является их длительность во времени, использование большого числа органических растворителей и сложной техники и получение на конечном этапе только гликозидов.

Известен способ выделения ферментного комплекса из культивируемых клеток (3). По данному способу используют сырую биомассу клеток (сырая биомасса - клетки женьшеня в конце срока культивирования, содержащие до 95% влаги). Он предусматривает их гомогенизацию, после проведения экстракции 70 - 80% водно-спиртовыми растворами их деалколизацию с последующей элюцией ферментного комплекса на сефадексе и его дальнейшей лиофилизацией.

Этим способом, который также многоэтапный и сложный технически, получают только ферментный комплекс.

Наиболее близким к предложенному способу является способ получения биологически активных веществ из биомассы сухих клеток женьшеня путем их перколяции 40% спиртом этиловым (4, 5). При этом воздушно-сухое сырье первоначально несколько часов настаивают с водно-спиртовым раствором, перколируют этим же раствором с определенной скоростью, отстаивают на холоду несколько дней и фильтруют. Полученная настойка содержит от 0,12% до 0,24% суммы гликозидов на воздушно-сухое сырье. Недостатками данного способа являются его большая длительность и выделение в качестве биологически активных веществ, в основном, гликозидов.

Задача изобретения - простыми техническими приемами выделить наиболее полный комплекс веществ, имеющихся в биомассе клеток женьшеня.

Поставленная задача реализуется предложенным способом путем выделения активного комплекса из биомассы культуры растительных клеток, заключающимся в гомогенизации сырых клеток биомассы женьшеня 30-96% водным раствором спирта этилового и последующим центрифугированием раствора, содержащего активный комплекс.

Способ осуществляется следующим образом (табл. 1 поясняет предлагаемый способ).

Пример 1. К 100 г сырой биомассы женьшеня (штамм ИФР Ж5 ВСКККВР N 11) приливают 100 мл 96% спирта этилового. Смесь гомогенизируют 6000 об/мин в течение 10 мин. Гомогенат центрифугируют 30 мин при 3000 об./мин и собирают центрифугат. Состав активного комплекса см. в табл.2.

Пример 2. К 100 г сырой биомассы женьшеня приливают 50 мл 96% спирта этилового. Смесь гомогенизируют при 6000 об./мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин собирая центрифугат. Состав активного комплекса см. в табл. 2.

Пример 3. К 100 г сырой биомассы женьшеня приливают 100 мл 40% спирта этилового. Смесь гомогенизируют при 6000 об/мин в течение 8 мин при комнатной температуре, а затем смесь центрифугируют при 3000 об./мин в течение 20 мин. Состав активного комплекса см. в табл. 2.

Пример 4. 100 г сырой биомассы женьшеня гомогенизируют при 6000 об/ мин в течение 5 мин с 50 мл спирта этилового 40%. Смесь центрифугируют при 3000 об./мин. Центрифугат собирают. Состав активного комплекса см. в табл.2.

Пример 5. К 60 г сырой биомассы женьшеня приливают 20 мл 40% спирта этилового и гомогенизируют при 6000 об./мин при комнатной температуре 3 мин, а затем смесь центрифугируют при 3000 об./мин 10 мин. Состав активного комплекса см. в табл. 2.

Пример 6. К 100 г сырой биомассы женьшеня приливают 100 мл 30% спирта этилового и гомогенизируют смесь при 6000 об./мин 10 мин. Смесь центрифугируют при 3000 об./мин 10 мин. Состав активного комплекса см. в табл. 2.

Таким образом, простыми техническими приемами, без предварительной сушки сырья, путем гомогенизации сырых клеток биомассы женьшеня с 30-96% водно-спиртовым раствором спирта этилового с последующим его центрифугированием удалось сократить количество операций на 50%, а время проведения этих операций сократилось в 8-10 раз (с 400 мин до 40), получив при этом активный комплекс, содержащий сумму гликозидов и ферменты: супероксиддисмутазу (СОД) и пероксидазу.

Литература
1. Александрова И. В., Данилина А.Н., Груздев Л.Г., Стрелец Н.И., Пастушенко Г.М. 1979. Культура ткани женьшеня - перспективное растительное сырье. Растительное ресурсы, т.ХV, вып.3, с. 61-367.

2. Furuya Tsutomu, Kojima Hisashi, Syono Kunihiko, Ishi Takafunu et al. 1973. Plant tissue cultures. XVII. Isolation of saponins and sapogenins from callus tissue of Panax ginseng. Chem. Pharm. Bull. 21,(1), pp.98-101.

3. Патент РФ N 2046140, C 12 N 9/02. Способ выделения ферментного комплекса из культивируемых клеток. (08.07.92).

4. Муравьев И.А. Технология лекарств. 1980. М., Медицина, 392 с.

5. ВФС-42-1890-89. Настойка Биоженьшеня.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицине, косметике и пищевой промышленности. Способ включает гомогенизацию сырой биомассы, экстракцию 30 - 96%-ным водным раствором этилового спирта с одновременной гомогенизацией и выделение целевого продукта центрифугированием. Полученный биологически активный комплекс содержит гликозиды и ферменты (СОД и пероксидазу). Способ прост и технологичен. 2 табл.

Способ выделения активного комплекса из биомассы клеток женьшеня, предусматривающий использование в качестве исходного сырья сырой биомассы, ее гомогенизацию, экстракцию водным раствором этилового спирта и выделение целевого продукта, отличающийся тем, что экстракцию осуществляют в процессе гомогенизации 30 - 96%-ным водным раствором этилового спирта и центрифугированием выделяют целевой продукт.