ВЫСОКОМЕЧЕННЫЙ ТРИТИЕМ ЦИКЛОСПОРИН А Российский патент 2000 года по МПК C07B59/00 A61K38/13 A61K51/00 C07K7/64 

Изобретение относится к области органической химии и может быть использовано при медикобиологических исследованиях.

Современные методы исследования физиологически активных соединений требуют использования их в виде высокомеченных производных.

Циклоспорин A - вещество общей формулы

(The Merck Index an encyclopedia of chemicals druds and biolodicals Eleventth Edition and 12-th 1989-1996 NJ U.S.A.),
является физиологически активным соединением. Циклоспорин A не описан в виде высокомеченного тритием производного.

Задачей, решаемой настоящим изобретением, явилось расширение ассортимента высокомеченных физиологически активных соединений. Задача решена тем, что впервые получен высокомеченный третием циклоспорин A.

Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение.

Пример 1. В реакционную ампулу помещена 12,1 мг циклоспорина A, 30,8 мг 5% PdO/Al₂O₃, 52,0 мг PdO. Напускали газообразный тритий до давления 400 гПа, и при охлаждении жидким азотом средней части ампулы смесь нагревали при 80^oC в течение 10 мин. При этом образующаяся при восстановлении окиси палладия стопроцентная тритиевая вода конденсировалась в средней части ампулы. Далее зону, содержащую активированный катализатор, вакуумировали при температуре 20^oC 10 мин. При этом основная часть адсорбированного на катализаторе трития удалялась и не гидрировала двойные связи циклоспорина A. Затем реакцию вели следующим образом. Снимали охлаждение со средней части ампулы и охлаждали жидким азотом нижнюю часть ампулы. При этом тритиевая вода перегонялась в смесь катализатора и вещества, ампулу снимали с установки, в реакционную ампулу впрыскивали 100 мкл смеси диоксана с триэтиламином (9:1), ампулу запаивали и реакцию вели при 150^oC 60 мин. Затем содержимое ампулы замораживали жидким азотом, ампулу вскрывали, катализатор отфильтровывали и промывали метанолом (5х0,5 мл). Общая радиоактивность реакционного раствора после изотопного обмена 13,2 Ки, без тритиевой воды - 0,7 Ки, после ТСХ - 140 мКи, после первой ВЭЖХ - 45 мКи, после второй ВЭЖХ - 8 мКи (радиохимическая чистота выше 97%). Выход меченого препарата 60 - 65%, с молярной радиоактивностью - 1 Ки/ммоль.

Меченый препарат очищали хроматографическими методами: ТСХ: (А) Ацетон-этилацетат - 50% уксусная кислота (2:1:5) Rf 0,82, (Б) трет-бутанол-метилэтилкетон-вода-аммиак (6,6: 5,0: 2,5:2,5) Rf (0,91; (В) бензол-диоксан (4: 1) Rf 0,36; (Г) хлороформ-диоксан (4:1) Rf 0,65; (Д) гексан-изо-пропиловый спирт (4:1) Rf 0,53. ВЭЖХ: (Ж) Saporon SGX, 5 мкм, 3,3х150 мм, метанол-50 мМ аммонийфосфатный буфер (pH 4,5) (85:15), V - 2 мл, 60^oC, время удержания - 15,41 мин; (И) Silasorb C₁₈, 13 мкм, 10х250 мм, метанол-вода-уксусная кислота (85:15:0,1), V - 2 мл, 60^oC, время удерживания - 15,85 мин; (К) Nucleosil C₁₈, 5 мкм, 2х75 мм, метанол - 50 мМ буфер (pH 2,7) (82:18), V - 0,1 мл/мин, 50^oC, время удерживания - 9,05 мин; (М) Nucleosil C₁₈, 5 мкм, 2х75 мм, метанол-буфер (pH 4,5) (87:13), V - 0,1 мл/мин, 60^oC, время удерживания - 5,52 мин.

Пример 2. В реакционную ампулу помещали 12,4 мг циклоспорина A, 31 мг 5% PdO/Al₂O₃, 51,7 мг PdO. Напускали газообразный тритий до давления 450 гПа, и при охлаждении жидким азотом средней части ампулы смесь нагревали при 70^oC в течение 10 мин. При этом образующаяся при восстановлении окиси палладия стопроцентная тритиева вода конденсировалась в средней части ампулы. Далее зону, содержащую активированный катализатор, вакуумировали при температуре 25^oC 5 мин. При этом основная часть адсорбированного на катализаторе трития удалялась и не гидрировала двойные связи циклоспорина A. Затем реакцию вели следующим образом. Снимали охлаждение со средней части ампулы и охлаждали жидким азотом нижнюю часть ампулы. При этом тритиевая вода перегонялась в смесь катализатора и вещества, ампулу снимали с установки, в реакционную ампулу впрыскивали 100 мкл смеси диоксана с триэтиламином (9:1), ампулу запаивали и реакцию вели при 180^oC 40 мин. Затем содержимое ампулы замораживали жидким азотом, ампулу вскрывали, катализатор отфильтровывали и промывали метанолом (5х0,5 мм). Общая радиоактивность реакционного раствора после изотопного обмена 13 Ки, без тритиевой воды - 0,8 Ки, после ТСХ - 180 мКи, после первой ВЭЖХ - 60 мКи, после второй ВЭЖХ - 30 мКи (радиохимическая чистота выше 97%). Выход меченого препарата 50 - 55%, с молярной радиоактивностью - 4 Ки/ммоль.

Таким образом, впервые получен высокомеченный тритием циклоспорин A.

Использование: в органической химии, в медикобиологических исследованиях. Сущность изобретения: получено новое высокомеченное тритием физиологически активное соединение циклоспорин А формулы I.

Высокомеченный тритием циклоспорин А формулы