СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ИЗОНИАЗИДА, ОБЛАДАЮЩИХ ПОНИЖЕННОЙ ГЕПАТОТОКСИЧНОСТЬЮ Российский патент 2000 года по МПК A61K31/732 A61K9/16 A61K31/732 A61K31/70 A61K33/14 A61K31/455 A61P31/06 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается производства лекарственных средств с участием природных вспомогательных веществ - полисахаридов.

Известны лекарственные формы изониазида в виде таблеток, порошков и инъекционных растворов, обладающие высокой туберкулостатической активностью. Однако препараты обладают рядом побочных эффектов. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. 1993).

Изониазид быстро выводится из организма, метаболизируясь путем ацетилирования в 1-ацетил-2-никотиноилгидразин, что делает необходимым трех-четырехразовый прием. Отличаясь высокой терапевтической активностью, изониазид обладает повышенной токсичностью по сравнению с производными первого ряда противотуберкулезных средств, что связывают с наличием в молекуле препарата свободной аминогруппы. Препарат способен вызывать нарушения в нервной и эндокринной системе, а также оказывать гепатотоксическое действие при длительном применении. Это связано с угнетением пиридоксальфосфата, что приводит к ингибированию трансаминазных реакций и в свою очередь к нарушению обмена веществ (Машковский М.Д. Лекарственные средства. 1993).

Задачей изобретения является получение лекарственной формы изониазида, которая способна снижать его гепатотоксическое действие при сохранении туберкулостатической активности самого изониазида на основе сочетания с полисахаридами.

Сущность изобретения заключается в создании лекарственной формы изониазида, содержащей полисахариды, которая обладает пониженной токсичностью, пролонгированностью действия при сохранении терапевтической концентрации в крови.

Предлагаемая лекарственная форма имеет следующий состав:
Изониазид - 1.0
Пектин свекловичный - 6.0
Сахароза - 1.0.

Спирт этиловый 40% - 1.0
Раствор кальция хлорида 10% - 1.0
Выбор пектина свекловичного, как вспомогательного вещества, вызван его собственной гепатопротекторной активностью, связанной с его сорбционными и антиоксидантными свойствами. При этом изониазид смешивают с пектином свекловичным и сахарозой, добавляя ко всему количеству основного вещества по частям увлажнитель спирт этиловый 40% до образования гранулируемой смеси; смесь гранулируют, полученные гранулы диаметром 0,3-0,5 см обрабатывают 10% раствором хлорида кальция и высушивают в термостате при температуре 60^oC ± 5^oC в течение 1 часа. Гранулы представляют собой частицы овальной формы, коричневого цвета, не обладающие запахом. Содержат шесть частей основного препарата изониазида. Полученную лекарственную форму подвергают стандартизации, качественному и количественному анализу (для количественного определения изониазида применяют спектрофотометрический метод с использованием комбинированного полинома).

Для оценки биофармацевтических и фармакологических свойств гранул изониазида с пектином исследовали динамику высвобождения изониазида из лекарственной формы методом "Вращающейся корзинки" в соответствии с требованиями ГФХ1 издания, сроки годности препарата методом "ускоренного старения", фармакокинетические показатели, туберкулостатическую активность, биохимические и гистоморфологические показатели, характеризующие функциональное состояние печени, острую токсичность.

Результаты определения динамики высвобождения изониазида в водную среду из гранул представлены на чертеже, согласно которому для гранул изониазида в отличие от таблеток изониазида характерно замедление скорости высвобождения из препарата.

Экспериментально с помощью метода "ускоренного старения" установлено, что срок годности изониазида в форме гранул соответствует двум годам хранения в обычных условиях.

Сравнительный анализ фармакокинетики таблеток изониазида с пектином проводили в опытах на белых крысах массой 200-220 г. при их введении однократно в желудок в дозе 40 мг/кг (в пересчет на чистый изониазид). Забор крови проводили у крыс через 1, 3, 6, 12, 18, 24, 36 часов после введения исследуемого препарата. В качестве контроля использовали сыворотку интактных животных. Каждая группа определений проводилась на шести животных. Полученные пробы крови центрифугировали в течение 20 минут со скоростью 3 тыс.об/мин. Количество изониазида в сыворотке крови определяли по методике Волленберга в модификации Шендеровой Р.И. и Гребенника А.Н. (Определение активного тубазида в сыворотке крови методом Волленберга. 1965). Результаты обрабатывали методом вариационной статистики.

Результаты количественного определения изониазида в сыворотке крови крыс при пероральном введении таблеток изониазида и гранул изониазида с пектином представлены в табл. 1.

Из приведенных данных видно, что изониазид при введении в форме таблеток не обнаруживается в крови через 12 часов после введения, а при введении в форме гранул с пектином - через 36 часов. Для сравнения биофармацевтических свойств изучаемых лекарственных форм были построены фармакокинетические кривые и рассчитаны фармакокинетические параметры: клиренс, константа элиминации, максимальная концентрация, площадь под фармакокинетической кривой, период полувыведения, относительная биологическая доступность (табл. 2).

Из полученных данных видно, что достижение максимальных концентраций изониазида при применении гранул изониазида с пектином происходит позже, чем в случае применения таблеток. Уровни максимальной концентрации близки и составляют для таблеток 5,05 мкг/мл, для гранул 5,16 мкг/мл.

Имеются существенные различия в периоде полувыведения (таблетки T_1/2= 0,45 ч^-1, гранулы T_1/2=2,23 ч^-1), и соответственно - в константах элиминации. Значения относительной биодоступности подтверждают преимущество гранул изониазида с пектином (167,1% против 100,0%), что свидетельствует о пролонгированности эффекта.

Таким образом, проведенный сравнительный анализ фармакокинетических параметров лекарственных форм изониазида показал, что у гранул изониазида с пектином элиминация значительно ниже, а биодоступность значительно выше, чем у таблеток изониазида.

Туберкулостатическая активность гранул изониазида с пектином обоснована результатами изучения туберкулостатической активности на среде Левенштейна-Иенсена в сравнении с прототипом - таблетками изониазида (табл. 3 и 4). Минимальная концентрация, подавляющая рост микобактерий для таблеток и гранул составила 0,2 мкг/мл. Это позволяет заключить, что гранулы изониазида с пектином не уступают по туберкулостатической активности таблеткам изониазида.

Определение острой токсичности лекарственных форм изониазида проводили по методу Кербера (Беленький М.А., Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 1963) с использованием для каждой лекарственной формы изониазида четырех групп белых крыс (по 6 животных в каждой группе), получавших однократно по 10 мг/кг, 100 мг/кг, 250 мг/кг, 500 мг/кг препарата (в пересчете на чистый изониазид).

Установлено LD₅₀ для таблеток изониазида 188 4 мг/кг, а для гранул изониазида с пектином 275,0 мг/кг. Таким образом выявлено снижение острой токсичности изониазида в форме гранул с пектином на 45,9%, по сравнению с таблетками.

Для сравнительного анализа гепатотоксичности гранул изониазида с пектином и таблеток изониазида исследовалась детоксицирующая функция печени с помощью бромсульфалеиновой пробы (Недошивина Р.В., Бромсульфафталеиновый метод для функциональной диагностики. 1965), определялись в сыворотке крови активность аланинаминотрансферазы (АлТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), и содержание общего холестерина (Колб В.Г., Камышников В.С. Справочник по клинической химии. 1982), а также содержание гликогена и общих липидов в ткани печени (Прохорова М. Н.,Туликова З.Н. Большой практикум по углеводному и липидному обмену. 1965). По завершению опытов в ткани печени исследовали гистоморфологические показатели с помощью гемотоксилин-эозиновой окраски, окраски Суданом III, ШИК-реакции.

Результаты опытов по изучению токсичности препаратов представлены в табл. 5.

Как следует из представленных в табл. 5 данных, исследуемые лекарственные формы изониазида в дозе 20 мг/кг не вызвали существенных изменений активности АлТ и ЩФ и содержания холестерина в сыворотке крови. Однако в дозе 200 мг/кг они примерно в равной степени увеличили активность ЩФ. В то же время уровень холестерина при введении гранул изониазида с пектином повысился в два раза меньше, чем при введении таблеток изониазида. Еще более демонстративными оказались результаты определения АлТ. Гранулы изониазида с пектином как в терапевтической дозе (20 мг/кг), так и в высокой дозе (200 мг/кг) не оказали существенного влияния на активность этого фермента, тогда как таблетки изониазида в дозе 200 мг/кг вызвали значительное повышение активности АлТ. Эти результаты свидетельствуют, что введение изониазида в форме гранул с пектином меньше нарушает циркуляцию желчи и предохраняет печеночные клетки от цитолиза (Логинов А.С. и соавт. Новый метод оценки функционального состояния печени в клинике внутренних болезней при диспансеризации некоторых контингентов больных. 1990).

В пользу меньшей гепатотоксичности гранул изониазида с пектином свидетельствуют также результат определения в ткани печени содержания общих липидов и гликогена (табл.5). При введении гранул истощение запасов гликогена в печени оказалось недостоверным, а увеличение общих липидов значительно меньшим в отличие от опытов с введением таблеток изониазида. Это свидетельствует о меньшей степени повреждения печени, так как патология печени сопровождается ее липидозом и обеднением гликогеном (Губский Ю.И., Коррекция химического поражения печени. 1989; Саркисов Х.С., Ремезов П.И" Воспроизведение болезней человека в эксперименте. 1960). Важным доказательством снижения токсичности изониазида в форме гранул с пектином служат результаты исследования экскреторной функции печени, которые показали (табл.6), при введении гранул в дозе 200 мг/кг меньшее повышение содержания бромсульфалеина в крови в 2 раза, по сравнению с эффектом таблеток изониазида, что свидетельствует о меньшем нарушении экскреторной функции печени.

Сравнительная оценка гистоморфологических изменений в печени белых крыс по окончании опытов позволили констатировать, что при введении гранул изониазида (в дозе 200 мг/кг) выраженность гиперемии в сосудах триад, снижение содержания гликогена в гепатоцитах и нарушение его распределения в цитоплазме клеток, равно как и количество жировых клеток и степень липидоза печени, существенно меньше, чем у животных, получавших таблетки изониазида (в дозе 200 мг/кг).

Приведенные данные позволяют заключить, что предложенная лекарственная форма изониазида - гранулы изониазида с пектином, по сравнению с таблетками изониазида, характеризуется пониженной гепатотоксичностью.

Таким образом, предлагаемая лекарственная форма изониазида обладает по сравнению с прототипом - таблетками изониазида рядом существенных преимуществ:
- простотой приготовления с использованием легкодоступных природных веществ;
- пролонгированностью действия;
- сохранением высокой туберкулостатической активности;
- пониженной острой токсичностью;
- пониженной гепатотоксичностью.

Список литературы
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, М. Медицина, - 1993, Т2, С. 292.

2. Недошивина Р.В. Бромсульфофталеиновый метод для функциональной диагностики. // Пат. физиология и экспериментальная теория, - 1965 N3, стр. 82-83.

3. Колб В. Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии; Минск, Беларусь, 1982, стр. 90-92.

4. Пектин. Производство и применение /Карпович Н.С., Данченко Л.В., Нелина В.В и др.-Киев.:Урожай, 1988. -С. 88.

5. Перспективы использования пектинов в качестве вспомогательных веществ /Котенгко А. И. ,Горин А.П., Спиридонов В.Л и др. //Состояние и перспективы разработки, производства и использование лекарственных средств.: Тез. докл. Всесоюзн. науч. конф. -Харьков, 1982.- С.146-165.

6. Фирсов А.А., Пиотровский В.К.Фармакокинетические методы в биофармации //Проблемы фармакокинетики.: М.ВИНИТИ.- Т.14.-С.114-127
7. Шендерова Р.И. Определение активного тубазида в сыворотке крови методом Волленберга //Лаб.дело. -1976.N 2.-С. 114-115.

8. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени. Киев. "Здоровья". М, 1989,-168c.

9. Саркисов Д. , Ремезов П.И. Воспроизведение болезней человека в эксперименте. М, 1960,-780 с.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности. Изониазид смешивают с пектином свекловичным и сахарозой в соотношении 1:6:1. Ко всему количеству смеси по частям добавляют спирт этиловый 40% в качестве увлажнителя до образования гранулируемой массы. Затем ее гранулируют. Полученные гранулы обрабатывают 10%-ным раствором кальция хлорида и высушивают при температуре 60 + 5^oС в течение 1 ч. Изобретение позволяет снизить гепатотоксичность и сохранить туберкулостатическую активность средства. 1 ил., 6 табл.

Способ получения лекарственной формы изониазида со сниженной гепатоксичностью и пролонгированностью действия при полном сохранении туберкулостатической активности, отличающийся тем, что изониазид смешивают с пектином свекловичным и сахарозой в соотношении 1 : 6 : 1, добавляя ко всему количеству смеси по частям спирт этиловый 40%-ный в качестве увлажнителя до образования гранулируемой массы, которую затем гранулируют, полученные гранулы обрабатывают 10%-ным раствором кальция хлорида и высушивают при температуре 60 ± 5^oC в течение 1 ч.