СПОСОБ АГГЛЮТИНАЦИОННОГО ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА Российский патент 2000 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, может быть использовано в диагностике различных инфекционных и соматических патологий. При этих заболеваниях в организме больного возникают антитела, комплиментарные антигенам, лежащим в основе патогенеза заболевания.

Эти антитела антигены могут обнаруживаться в периферической крови и других биологических жидкостях, однако до настоящего времени не созданы диагностические препараты, отличающиеся стабильностью иммунохимических свойств и позволяющие осуществлять данную реакцию бесприборно. Отсутствуют надежные и простые методы для скрининговых исследований больных и населения, относящихся к группам риска, что важно для коррекции терапии и определения прогноза заболевания.

Цель изобретения - разработка экспресс-метода для определения наличия и вида антител и антигенов - маркеров различных нозологий, увеличение чувствительности анализа, уменьшение процента ложнопозитивных реакций, расширение сырьевой базы данного способа.

Аналогом данного метода является способ определения различных антигенов либо антител путем мечения одного из компонентов: антигенов либо комплементарных им антител, именуемых в дальнейшем биолигандами, различными метками - радиологическими, ферментными, флюоресцентными, эритроцитарными [1].

Аналогом данного метода является способ определения антител против вируса клещевого энцефалита в сыворотке крови с помощью реакции непрямой агглютинации [2].

Аналогом данного метода является также способ определения антирезусных антител при аутоиммунной гемолитической анемии [3] с помощью реакции гемагглютинации.

Прототипом данного технического решения является способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, описанный в [4]. Данный способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, включающий постановку реакции агглютинации на основе гидрозольного дисперсного препарата с сорбированными на его поверхности биоспецифическими лигандами путем соединения последнего с биологическими жидкостями в емкостях для проведения указанного анализа, имеет ряд недостатков.

Недостатками прототипа можно считать:
1. недостаточную чувствительность агглютинационного иммунологического анализа;
2. длительное время постановки реакции гидрозольной агглютинации;
3. наличие ложноположительных (ложнопозитивных) результатов анализа.

Указанные недостатки преодолеваются, если поверхность емкости для осуществления указанного агглютинационного иммунологического анализа покрывают антифрикционными материалами [5]. К таковым относятся: графит, нитрит бора, дихалькогениды переходных металлов, фторполимеры, фторированные органические масла.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1.

Осуществляют анализ в круглодонных планшетах по прототипу и по заявленному способу. В первом случае используют в качестве модификатора сополимер с содержанием фтора до 23%; биолиганда - противокоревой иммуноглобулин; гидрозоля - оксид железа (III). В качестве модификаторов используют: графит, дисульфид молибдена, солидол, фторированный графит, кремнийорганическую жидкость.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 20 мин, с заявляемыми объектами во всех случаях - 5 мин; уровень чувствительности был всюду одинаковым, уровень себестоимости в заявляемых случаях был всюду на порядок ниже.

Пример 2.

Используют анализ аналогично примера 1; в качестве фторполимера используют препарат с содержанием фтора 40%, в качестве биолиганда - генно-инженерные антигены ВИЧ, в качестве основы гидрозоля - фосфат цинка. Из заявляемых объектов использовали: графит, дисульфид молибдена, нитрид бора, солидол, загущенную кремнийорганическую жидкость.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 15 мин, с заявленными объектами во всех случаях - /3 - 5/ мин.

Пример 3.

Осуществляют анализ аналогично примеров 1 - 2, в качестве основы гидрозолей используют гидроокись меди, в качестве основы гидрозолей используют гидроокись меди, в качестве биолиганда - антитела к поверхностному антигену рака молочной железы. Остальные объекты аналогичны примеру 2.

В результате - время постановки реакции с прототипом составило 20 мин, с заявляемыми объектами - 5 мин во всех случаях при одинаковой чувствительности и снижении себестоимости анализа на порядок.

Пример 4.

Осуществляют анализ аналогично примера 1, с той лишь разницей, что в качестве биолиганда используют туберкулезный антиген, в качестве гидрозоля - оксалат никеля. Время постановки реакции по прототипу составило 15 мин, по заявляемому способу - 4 мин во всех случаях; при этом имели место одинаковая чувствительность и снижение себестоимости анализа в случае заявляемого решения.

Во всех случаях обработки поверхности емкостей для постановки агглютинационного иммунологического анализа - скошенных лунок планшетов либо стекол - антифрикционными материалами [5]: фторполимерами, фторированными органическими маслами, дисульфидом молибдена, нитридом бора - наблюдали полезные эффекты. Во-первых, уменьшался процент ложноположительных результатов, во-вторых, увеличивалась чувствительность реакции. Наконец, в-третьих, достигается снижение времени выполнения единичного анализа.

Указанные полезные эффекты ведут к повышению эффективности единичного анализа, снижению его себестоимости за счет повышения производительности труда, расширению сырьевой базы для осуществления указанных анализов.

Использованная литература
1. Ройт А. Основы иммунологии. - М.: Мир, 1991. - С. 91 - 93.

2. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинев, 1982. - 304 с.

3. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. - Кишинев, 1982. - 304 с.

4. Мешандин А. Г. Физико-химические аспекты сорбционных процессов при синтезе твердофазных биолигандов. - М., 1994. - С. 31 - 34.

5. Химическая энциклопедия. - Т. 1. - М., 1998. - С. 184 - 185.

Способ может быть использован в медицине, а именно в иммунологии. Используют гидрозоли из группы: оксиды, фосфаты, гидроксиды, соли карбоновых кислот металлов, на поверхности которых засорбированы биоспецифические лиганды. Поверхность емкостей для осуществления реакции покрывают антифрикционными материалами. Способ обеспечивает сокращение времени постановки анализа.

Способ постановки агглютинационного иммунологического анализа, включающий постановку реакции агглютинации на основе гидрозольного дисперсного препарата с сорбированными на его поверхности биоспецифическими лигандами путем соединения последнего с биологическими жидкостями в емкостях для проведения указанного анализа, отличающийся тем, что поверхность емкостей для осуществления данного анализа покрывают антифрикционным материалом.