ГЛАЗНЫЕ КАПЛИ Российский патент 2001 года по МПК A61K31/728 A61F9/00 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано при лечении травматических повреждений, химических ожогов и трофических нарушений роговицы, конъюнктивы, в послеоперационном периоде при кератопластике и кератотомии, а также для адаптации ношения контактных линз.

Известен препарат "Баларпан" (МНТК "МГ", регистрационное удостоверение МЗ РФ N 96/69/4). "Баларпан" - 0,01%-ный раствор, содержащий нативные сульфатированные гликозаминогликаны (кератан сульфат и хондроитин сульфат), выделенные из роговиц сельскохозяйственных животных. "Баларпан" активизирует регенерацию поврежденной роговицы, оказывает противовоспалительное и дегидратирующее действие на строму роговицы.

Недостатком "Баларпана" является негомологичность тканям глаза, в результате чего возможны аллергические реакции. Кроме того, при применении вышеуказанного лекарственного препарата из "материалов риска", высок риск возникновения прионовой болезни.

Наиболее близким по технической сущности являются глазные капли (RU 2062079, A 61 F 9/00, 1966), которые приняты за прототип, содержащие выделенную из фракции роговицы свиней водорастворимую смесь гликозаминогликанов (кератан сульфат и хондроитин сульфат) при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Смесь гликозаминогликанов - 0,1-1,0
Физиологический раствор - Остальное
Водорастворимость глазных капель дает возможность быстрому проникновению лекарственного вещества в роговицу, в результате чего лечебное действие протекает более эффективно и с более высоким функциональным исходом.

Однако наличие хондроитин сульфата влияет на свертывающую систему крови, что может привести к увеличению кровоточивости поврежденных сосудов (Pandolfi M. , Hender U. The effect of sodium hyaluronate and sodium chondroitin sulfate on the coagulation system in vitro. Ophthalmology, 1984, 91, N 7, p. 864-866). Препарат легко смывается слезой, что снижает его эффективность. Кроме того, вышеуказанные глазные капли не содержат гиалуроновой кислоты, основного представителя гликозаминогликанов, обладающей более эффективным ранозаживляющим действием (Касавина Б.С., Музыкант Л.И. Экспер. хир. и анестезиол., 1960, 5, с. 54; Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. "Медицина", 1969).

Нами была поставлена задача разработать препарат, обладающий биорегуляторным, тканеспецифичным свойствами и пролонгированным действием из доступного сырья.

Для решения поставленной задачи предложены глазные капли, содержащие биологическое активное вещество и физиологический раствор, отличающиеся тем, что в качестве биологически активного вещества используют выделенную из пупочных канатиков человека высокомолекулярную гиалуроновую кислоту 95%-ной чистоты при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гиалуроновая кислота - 0,05 - 0,2
Физиологический раствор - Остальное
Преимущество предлагаемых глазных капель состоит в том, что они обладают пролонгированным действием, то есть сохраняют фармакологическое действие в конъюнктивальной полости в течение нескольких часов, усиливают ранозаживляющую активность, сокращают сроки лечения и уменьшают частоту осложнений.

Глазные капли готовят из субстанции высокомолекулярной гиалуроновой кислоты 95%-ной чистоты, полученной из пупочных канатиков человека согласно ТУ N 05/007589 от 11/XII 1997. Способ приготовления субстанции заключается в следующем: предварительно из пупочных канатиков человека путем ферментативного протеолиза с последующим осаждением в этиловый спирт выделяют смесь гликозаминогликанов (ГАГ). Из этой смеси с помощью DEAE - целлюлозы элюируют высокомолекулярную гиалуроновую кислоту (ВГК).

Способ приготовления субстанции. Берут 1 кг пупочных канатиков, гомогенизируют и заливают экстрагентом (0,15 М NaCl). Смесь экстрагируют в течение 2-3 суток и отделяют экстракт фильтрацией через нейлоновую ткань. Комплексы гликозаминогликанов с белками (муцины) осаждают этиловым спиртом. Для избавления от белка осадок растворяют в буферном растворе (0,15 М NaCl, ЭДТА, SDS) и проводят протеолиз с помощью протеиназы "K". После протеолиза ГАГ из раствора осаждают этиловым спиртом, осадок растворяют в 0,15 М NaCl и очищают фильтрацией через активированный уголь. Фильтрат диализируют против дистиллированной воды, очищают методом ионообменной хроматографии на DEAE - целлюлозе и элюируют 0,7 М NaCl ВГК, осаждают этиловым спиртом и высушивают.

Глазные капли готовят последовательным растворением в 0,9%-ном растворе натрия хлорида. Готовый раствор фильтруют через осветляющий мембранный фильтр, разливают во флаконы, герметично укупоривают и стерилизуют автоклавированием.

Для экспериментальной проверки заявляемых глазных капель были приготовлены 4 состава, содержащие различные количества гиалуроновой кислоты (0,03%; 0,05%; 0,1%; 0,2%; 0,3%). При инстилляции 0,03%-ного раствора наблюдается недостаточно быстрый ранозаживляющий эффект. 0,05, 0,1, 0,2 и 0,3%-ные растворы обладали хорошей ранозаживляющей активностью, длительным нахождением в конъюнктивальной полости, однако при приеме 0,3%-ного раствора, ввиду повышенной вязкости препарата, наблюдалось склеивание век. Оптимальными составами явились 0,05, 0,1 и 0,2%-ные растворы.

Пример 1. Способ приготовления. 3 мг субстанции высокомолекулярного гиалуроновой кислоты заливают 10 мл физиологического раствора и перемешивают в течение 1 часа до образования прозрачного раствора. Компоненты в соотношении
Гиалуроновая кислота - 3 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 2. Способ приготовления. 5 мг субстанции высокомолекулярного гиалуроната натрия заливают 10 мл физиологического раствора и перемешивают в течение 1 часа до образования прозрачного раствора. Компоненты в соотношении
Гиалуроновая кислота - 5 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 3. Способ приготовления аналогичен примерам 1 и 2. Глазные капли с компонентами берут в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 10 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 4. Глазные капли готовят аналогично примеру 1, но компоненты в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 20 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Пример 5. Глазные капли готовят аналогично примеру 1, но компоненты в следующем соотношении
Гиалуроновая кислота - 30 мг
Физиологический раствор - 10 мл
Выбор оптимальных компонентов приведен в таблице.

Из проведенного эксперимента можно сделать вывод, что капли приготовленные из компонентов, мас.%:
Гиалуроновая кислота - 0,05 - 0,2
Физиологический раствор - Остальное
отвечают требованиям Фармакопеи X: стерильно, лекарственное вещество растворяется в 0,9 изотоническом растворе натрия хлорида, терапевтическое действие в нетоксичных и не раздражающих глаз дозах.

Готовые глазные капли представляют собой бесцветный, прозрачный раствор, без запаха. Препарат доступен для применения в амбулаторных условиях.

Способ применения: инстилляция капель в конъюнктивальную полость 3-4 раза в день по 1-2 капли.

Терапевтическую эффективность лечения оценивали по следующим признакам: сроки уменьшения и исчезновения явлений раздражения и стромального отека, сроки начала полной эпителизации эрозии роговицы.

Пример 1. После получения несквозного стандартного дозированного дефекта роговицы в правый глаз кролика породы "Шиншилла" закапывают 0,3%-ный раствор гентамицина 4-6 раза в день, 1%-ный раствор атропина 1 раз в день и 0,1%-ный раствор гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день.

На первые сутки отмечалась умеренная инъекция сосудов конъюнктивы глазного яблока, дефект роговицы 5х5 мм, окрашивается флюоресцеином, передняя камера средней глубины.

На третьи сутки дефект роговицы уменьшился вдвое, передняя камера средней глубины, реакция зрачка на свет живая, радужка спокойная.

На шестые сутки наступила эпителизация раневого дефекта, что подтверждается отсутствием окрашивания флюоресцеином, в центре роговицы нежное облачковидное помутнение.

На четырнадцатые и последующие сроки роговица прозрачная.

Пример 2. Проведена стандартная дозированная радиальная кератотомия роговицы правого глаза кролика породы "Шиншилла", проведено лечение 0,3%-ным раствором гентамицина 4-6 раз в день и 0,05%-ным раствором гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день.

На 5-6 сутки лечения глаз кролика спокойный, произошла эпителизация радиальных насечек роговицы.

В отдаленные сроки роговица прозрачная, нежные радиальные рубцы.

Пример 3. После моделирования химического щелочного ожога роговицы средней тяжести правый глаз кролика породы "Шиншилла" пролечен 0,3%-ным раствором гентамицина 4-6 раз в день, 1% раствором атропина 1 раз в день, 0,2%-ным раствором гиалуроновой кислоты 3-4 раза в день.

На первые сутки - умеренное сужение глазной щели, смешанная инъекция сосудов глазного яблока, диффузный отек поверхностных и средних слоев стромы, частичная эрозия роговицы в центре.

На третьи сутки - уменьшение площади эрозии и частичная резорбция отека роговицы, влага передней камеры прозрачная, реакция зрачка живая.

На седьмые сутки - перикорнеальная инъекция, умеренный отек роговицы, эрозивная поверхность уменьшилась вдвое, васкуляризация отсутствует.

На 12 сутки - полная эпителизация роговицы, в центре помутнение роговицы в поверхностных слоях стромы 2х2 мм.

На 30 сутки и в отдаленные сроки глаз спокоен, роговица прозрачная.

Результаты морфологического исследования подтверждают, что полная эпителизация непроникающих ранений роговицы под влиянием глазных капель происходит на седьмые сутки, ускоряется репаративная регенерация роговицы, не наблюдается врастание сосудов в роговицу.

Таким образом, при экспериментальном доклиническом исследовании глазных капель, содержащих 0,05 - 0,2%-ные растворы гиалуроновой кислоты, выявлены стимуляция репаративной регенерации роговицы, сокращение сроков лечения и улучшение функционально-косметических результатов.

Изобретение может быть использовано в медицине, в частности в офтальмологии для лечения травматических повреждений, химических ожогов и трофических нарушений роговицы, конъюнктивы, а также для адаптации ношения контактных линз, в послеоперационном периоде при кератопластике и кератотомии. Глазные капли в качестве биологически активного вещества содержат выделенную из пупочных канатиков человека высокомолекулярную гиалуроновую кислоту 95%-ной чистоты и физиологический раствор в следующем соотношении компонентов, мас. %: гиалуроновая кислота 0,05 - 0,2, физиологический раствор - остальное. Применение глазных капель улучшает функциональные исходы, сокращает сроки лечения. Препарат доступен для применения в амбулаторных условиях. 1 табл.

Глазные капли, содержащие биологически активное вещество и физиологический раствор, отличающиеся тем, что в качестве биологически активного вещества используют выделенную из пупочных канатиков человека высокомолекулярную гиалуроновую кислоту 95%-ной чистоты при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Гиалуроновая кислота - 0,05 - 0,2
Физиологический раствор - Остальное