СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТНОСИТЕЛЬНОГО И АБСОЛЮТНОГО ЧИСЛА НУЛЕВЫХ ЛИМФОЦИТОВ Российский патент 2001 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, конкретно к лабораторной диагностике, может быть использовано в иммунологических лабораториях для оценки факторов неспецифической защиты организма, его функциональной активности и резервных возможностей. Применим в клиниках различного профиля, имеющих минимальное лабораторное оснащение и не требует наличия высококвалифицированных кадров.

Важным лабораторным параметром, определяемым при оценке состояния иммунной системы, является число нулевых лимфоцитов, включающих незрелые клетки, стареющие, дефектные, киллерные и другие лимфоциты, не имеющие на мембранной поверхности определяемых рецепторов из-за блокирования их или временной утраты (Лебедев К. А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. - М. , Наука. - 1990. - 224 с.), т.е. не дифференцируемые исследователем. Увеличение их количества наблюдается при иммунной недостаточности функционального характера, возникающей вследствие влияния различных экзо- и эндогенных неблагоприятных факторов, а также при нарушениях регуляторных механизмов в организме. Констатация таких состояний может являться решающим фактором при определении терапевтической тактики и необходимости иммуномодулирующих воздействий.

Известен способ вычисления количества нулевых лимфоцитов путем вычитания из общего числа лимфоцитов число T- и B-лимфоцитов, содержащихся в периферической крови, определяемых лабораторными методами (Лабораторные методы исследования в клинике. - Под ред. В.В. Меньшикова. - М., 1987; Лебедев К.А., Понякина И. Д. Иммунограмма в клинической практике. - М., Наука. - 1990. - 224 с.; Лозовой В.П., Кожевников B.C., Волчек И.А., Соколович Г.Е., Баширов Р. С. Методы исследования T-системы иммунитета в диагностике вторичных иммунодефицитов при заболеваниях и повреждениях. /Учебное пособие. - Томск, 1986; Тузанкина И.А. Клинико-иммунологические подходы к формированию групп часто болеющих детей и эффективность иммуномодулирующей терапии в комплексе группоспецифических реабилитационных мероприятий/ Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Екатеринбург, 1992; К.К. Ниппон котай кэнкюсе. Способ количественного определения T- и B-лимфоцитов/ Изобретения стран мира. - 1989. - N 7. - Вып. 108).

В известных способах определения количества нулевых лимфоцитов необходимо проводить отдельные лабораторные тесты для определения каждой популяции T- и B-лимфоцитов
Цель изобретения - совершенствование способа оценки состояния иммунной системы организма путем сокращения затрат на реактивы и лабораторное производство исследований. Это сокращает рабочее время для получения результатов, достоверность которых не отличается от таковой при проведении лабораторных исследований, а ошибка измерений в предлагаемом способе не превышает ошибку, допустимую при лабораторном определении указанных параметров.

Наиболее близким диалогом предлагаемого способа является способ вычисления количества нулевых лимфоцитов путем вычитания из общего числа лимфоцитов числа T- и B-лимфоцитов, содержащихся в периферической крови (Лабораторные методы исследования в клинике. Под ред. В.В. Меньшикова. - М., 1987). В этом способе необходимо определить лабораторными методами число T- и B-лимфоцитов, а также общее число лимфоцитов.

Предлагаемый способ определения относительного и абсолютного количества нулевых лимфоцитов предполагает лабораторное определение только общего числа лимфоцитов и относительного числа T-лимфоцитов без проведения лабораторных тестов определения B-лимфоцитов.

С другой стороны снижение числа B-лимфоцитов в сыворотке - малоинформативный параметр, поскольку не отражает их истинного количества. Значительное количество B-лимфоцитов, как известно, может депонироваться в периферических лимфоидных органах или участвовать в механизмах иммунного ответа в очагах. Важным является отсутствие B-лимфоцитов, что наблюдается лишь в весьма редких случаях - при одном из синдромов первичного иммунодефицита, называемым "Агаммаглобулинемия без B-клеток", факт отсутствия данной субпопуляции лимфоцитов устанавливается при помощи моноклональных антител методом иммунофлюоресценции.

Оценка состояния иммунной системы проводилась у 795 детей с различными видами патологии в разных фазах заболеваний. Отбор детей для исследования осуществлялся сплошным методом. Корреляционный анализ иммунологических параметров, традиционно определяемых при оценке состояния защиты организма, выявил закономерности в распределении лимфоцитов по популяциям. Эти исследования дали возможность математического вычисления относительного и абсолютного количества нулевых лимфоцитов без проведения дополнительных исследований по определению количества B-лимфоцитов, исключая затраты, связанные с ними. При этом ошибка вычисления не превышала погрешность измерения при проведении лабораторных исследований анализируемых параметров.

Регрессионный анализ данных позволил определить коэффициенты пересчета, которые дают возможность вычислять относительное число 0-лимфоцитов по относительному числу T-лимфоцитов, а абсолютное число 0-лимфоцитов по относительному числу T-лимфоцитов и абсолютному общему числу лимфоцитов.

Значения коэффициентов пересчета, а также их стандартные ошибки для разных возрастных групп приведены таблицах 1 и 3. Оценки качества моделей (коэффициенты корреляции, R-квадрат и стандартные ошибки оценки σ представлены в таблицах 2, 4 и фиг. 1, 2.

Зависимость относительного числа 0-лимфоцитов (0-лимфоцит) от относительного числа T-лимфоцитов (T-лимфоцит) выражается следующими уравнениями:
для дошкольников
0-лимфоцит (%) = 93,64-1,14 • T-лимфоцит (%);
для школьников
0-лимфоцит (%) = 91,04 - 1,08 • T-лимфоцит (%).

Зависимость абсолютного числа 0-лимфоцитов (0-лимфоцит) от относительного числа T-лимфоцитов (T-лимфоцит) и от абсолютного общего числа лимфоцитов (Лимфоцит) выражается следующими уравнениями:
для дошкольников
0-лимфоцит (абс) = 1671,17+0,50 • Лимфоцит(абс)-42.25 • T-лимфоцит (%);
для школьников
0-лимфоцит (абс) = 1360.97+0.39 • Лимфоцит(абс)-28,42 • T-лимфоцит (%).

В интервал ± 2 • σ около линии регрессии попадает 95,98% выборочных данных для относительного числа нулевых лимфоцитов и 95,10% данных для абсолютного числа нулевых лимфоцитов.

Таким образом, получена возможность вычисления относительного и абсолютного значения 0-лимфоцитов, лабораторно определяя только относительное количество T-лимфоцитов. При этом нет необходимости проведения лабораторных тестов для определения числа B-лимфоцитов, требующих дополнительных реактивов, значительных затрат времени и рутинного труда лабораторных работников.

Изобретение относится к медицине, конкретно к лабораторной диагностике, может быть использовано в иммунологических лабораториях при диагностике заболеваний для оценки состояния иммунной системы организма, его функциональной активности и резервных возможностей. Способ предполагает предварительное определение общего количества лимфоцитов (Лимфоцит) и относительного количества Т-лимфоцитов (Т-лимфоцит). Затем путем математических вычислений с использованием полученных методом регрессионного анализа коэффициентов пересчета вычисляют относительное и абсолютное количество 0-лимфоцитов по формулам. При этом для дошкольников используют формулы: 0-лимфоцит (%) = 93,64-1,14 • Т-лимфоцит (%) и 0-лимфоцит (абс) = 1671,17 + 0,50 • Лимфоцит (%). Для школьников используют формулы: 0-лимфоцит (%) = 91,04-1,08 • T-лимфоцит (%) и 0-лимфоцит (абс) = 1360,97+0,39 • Лимфоцит (абс) - 28,42 • Т-лимфоцит (%). Способ позволяет сократить расходы и получить достоверные результаты. 4 табл., 2 ил.

Способ определения относительного и абсолютного количества нулевых лимфоцитов, отличающийся тем что предварительно определяют общее количество лимфоцитов (лимфоцит) и относительное количество Т-лимфоцитов (Т-лимфоцит) и путем математического вычисления, используя полученные методом регрессивного анализа коэффициенты пересчета, определяют относительное количество нулевых лимфоцитов (0-лимфоцит) по формулам:
для дошкольников
0-лимфоцит (%) = 93,64-1,14 x Т-лимфоцит (%),
для школьников
0-лимфоцит (%) = 91,04-1,08 х Т-лимфоцит (%),
и абсолютное количество нулевых лимфоцитов по формулам:
для дошкольников
0-лимфоцит (абс) = 1671,17+0,50 х лимфоцит (абс) - 42,25 х Т-лимфоцит (%),
для школьников
0-лимфоцит (абс) = 1360,97+0,39 х лимфоцит (абс) - 28,42 х Т-лимфоцит (%).